本文關(guān)鍵詞：鹽酸阿比多爾減輕水通道蛋白-4抗體陽性血清的神經(jīng)毒性作用：體內(nèi)外實驗研究

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【摘要】：目的:視視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis optica,NMO)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘性自身免疫性疾病,常常引起視力下降和局灶神經(jīng)功能缺損。其主要發(fā)病機制是水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)抗體與星形膠質(zhì)細胞足突上的AQP4特異性結(jié)合誘發(fā)抗體依賴的細胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)和補體依賴的細胞毒性(Complement-dependent cytotoxicity,CDC)作用,引起炎性反應(yīng),血腦屏障破壞,從而導(dǎo)致髓鞘脫失,星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元壞死。目前NMO治療方法相對單一,主要包括免疫抑制劑,免疫調(diào)節(jié)劑和血漿置換,尚不能有效的預(yù)防NMO復(fù)發(fā),且均未涉及其發(fā)病機制。近來,應(yīng)用AQP4轉(zhuǎn)染細胞及小鼠NMO模型研究發(fā)現(xiàn)小分子抑制劑-鹽酸阿比多爾能夠阻斷AQP4抗體與AQP4的特異性結(jié)合,并有效減輕AQP4抗體介導(dǎo)的CDC及ADCC作用。而阿比多爾在原代皮層混合培養(yǎng)和大鼠體內(nèi)NMO模型的作用如何尚未見報道,因此我們應(yīng)用SD(Sprague-Dawley)大鼠大腦皮層原代混合培養(yǎng)細胞及大鼠腦內(nèi)注射模型觀察鹽酸阿比多爾在體內(nèi)外對AQP4抗體神經(jīng)毒性的作用。方法:常規(guī)培養(yǎng)新生SD大鼠大腦皮層細胞,用含有10%體積胎牛血清DMEM/F12制備成單細胞懸液,并種植于預(yù)先包被有多聚賴氨酸的培養(yǎng)板(或24孔板)中,置37℃5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),分別于24h、72h換液,培養(yǎng)4d的細胞用于實驗。實驗隨機分為4組,①正常血清組:原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)細胞4d后給予10%體積正常對照血清;②AQP4抗體陽性血清組:原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)細胞4d后給予10%體積抗體陽性性血清;③阿比多爾預(yù)處理組:阿比多爾依據(jù)12.5μM、25μM、50μM不同濃度分3個亞組。原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)細胞4d,分別加不同濃度阿比多爾處理1h后給予10%體積抗體陽性性血清;④二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)對照組(1%DMSO),原代培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)細胞4d,加入等體積DMSO預(yù)處理1h,各組細胞再培養(yǎng)6h后進行Hoechst33258/碘化丙啶(propidium iodide,PI)雙染篩查阿比多爾最合適濃度,選�、壑凶钣行舛冉M及其余各組行細胞免疫熒光染色,觀察星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元變化。另使用SD大鼠腦內(nèi)注射AQP4陽性血清制備NMO動物模型,選取24只SD成年大鼠隨機分為4組,分別給予右側(cè)腦內(nèi)注射40μL正常人血清,右側(cè)腦內(nèi)注射40μL AQP4抗體陽性血清,腹腔注射濃度為10mg/ml的阿比多爾(54mg/kg)干預(yù)3h后右側(cè)腦內(nèi)注射40μL抗體陽性血清,腹腔注射等體積濃度的DMSO預(yù)處理3h后右側(cè)腦內(nèi)注射40μL抗體陽性血清,各組大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)3天后斷頭取腦,冠狀切片,分別進行HE及免疫組織化學染色觀察灶局部炎性細胞及AQP4和神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表達的變化,并測量病灶大小。結(jié)果:1篩查鹽酸阿比多爾最有效濃度正常血清組及DMSO對照組均無明顯的細胞壞死,而AQP4抗體陽性血清組細胞壞死明顯;分別給予12.5μM、25μM、50μM濃度的鹽酸阿比多爾預(yù)處理壞死細胞均減少,以上各組總體比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=261.7,P0.05),組間比較顯示12.5μM與25μM的阿比多爾預(yù)處理組細胞存活率(64.24%和78.92%)分別與AQP4抗體陽性血清組(48.62%)比較差異有統(tǒng)計學意義(P均0.01),而50μM阿比多爾預(yù)處理組存活率為(36.32%),與AQP4抗體陽性血清組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.014)。2阿比多爾預(yù)處理對原代培養(yǎng)大鼠皮層星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的影響AQP4抗體陽性血清組星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元單個視野陽性細胞總面積分別為405.17±79.41μm2和295.26±43.31μm2均較正常血清對照組3226.85±334.56μm2和1990.03±63.27μm2明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.01);阿比多爾預(yù)處理組星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元陽性細胞總面積分別為1086.17±148.31μm2和955.75±132.05μm2,明顯高于AQP4抗體陽性組,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.01),而DMSO組星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元陽性細胞總面積(2903.61±162.50μm2和1864.10±67.39μm2)與正常血清組比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.102)。3腦內(nèi)注射AQP4抗體陽性血清產(chǎn)生類似NMO病灶改變HE染色顯示注射部位周圍可見廣泛的炎性細胞侵潤,而對側(cè)炎性細胞反應(yīng)不明顯。免疫組織化學染色示AQP4抗體陽性血清引起病灶內(nèi)AQP4和GFAP表達顯著缺失,病灶周圍GFAP表達顯著增加,正常血清組僅針道周圍GFAP表達活性增加,AQP4表達未見明顯缺失。4鹽酸阿比多爾預(yù)處理減少GFAP與AQP4表達缺失范圍腦內(nèi)注射AQP4抗體陽性血清GFAP和AQP4染色缺失面積分別為15.5864±0.72756和18.0692±1.21775(mm2),較正常血清組4.6205±0.3178和3.8589±0.28073明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05);和AQP4抗體陽性血清組比較,鹽酸阿比多爾預(yù)處理組GFAP和AQP4染色缺失面積9.7107±0.41437和8.3793±0.59119明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05)。結(jié)論:1 SD大鼠腦內(nèi)注射NMO患者AQP4抗體陽性血清能夠誘導(dǎo)病灶炎性細胞浸潤,AQP4和GFAP表達缺失。2阿比多爾在體內(nèi)外均能減輕AQP4抗體血清的毒性作用。3阿比多爾可能用于治療NMO。3腦內(nèi)注射AQP4抗體陽性血清產(chǎn)生類似NMO病灶改變
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R744.52

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王承娜;林麗;段振芳;鐘飛;左代英;吳英良;;新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元與星形膠質(zhì)細胞的混合培養(yǎng)[J];藥學學報;2013年11期

2 張潔;劉亞坤;王彥永;任士卿;;甲潑尼龍減輕水通道蛋白4抗體對星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的毒性[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;2013年03期

3 劉曉;裴科;陳曉輝;畢開順;;鹽酸阿比朵爾在大鼠體內(nèi)的分布與排泄研究[J];中國新藥雜志;2013年07期

4 劉亞坤;張潔;任士卿;;水通道蛋白4抗體對體外培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)細胞的毒性作用[J];中華神經(jīng)醫(yī)學雜志;2012年07期

5 王孟昭,蔡柏薔,李龍蕓,林江濤,蘇楠,俞紅霞,高和,趙建忠,劉麗;阿比朵爾治療流行性感冒的隨機、雙盲、安慰劑對照、多中心臨床研究[J];中國醫(yī)學科學院學報;2004年03期

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本文編號：1271508