發(fā)布時間：2017-12-09 04:26

  本文關(guān)鍵詞：構(gòu)建M23-AQP4穩(wěn)定表達的HEK293細胞應(yīng)用于血清抗AQP4抗體檢測的研究

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【摘要】：目的構(gòu)建M23-AQP4穩(wěn)定表達HEK293細胞(HEK293-M23-AQP4)并用于抗AQP4抗體檢測,以探索臨床可行的抗AQP4抗體檢測方法。方法用磷酸鈣轉(zhuǎn)染試劑將pEGFP-N1-M23-AQP4質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293細胞,通過G418篩選HEK293-M23-AQP4,以細胞間接免疫熒光法(CBA)檢測M23-AQP4表達及分布。以HEK293-M23-AQP4為底物的CBA法檢測視神經(jīng)脊髓炎(NMO)6例、多發(fā)性硬化(MS)16例、其他脫髓鞘疾病(視神經(jīng)炎、脊髓炎、吉蘭-巴雷綜合征、急性播散性腦脊髓炎)30例、非脫髓鞘性疾病患者10例血清抗AQP4抗體及其滴度,并比較4組抗體陽性率,計算抗AQP4抗體診斷NMO的敏感性,分別以非NMO的脫髓鞘疾病和非脫髓鞘疾病作對照計算抗AQP4抗體診斷NMO的特異性。將HEK293-M23-AQP4細胞于室溫、4℃、-20℃保存4周,分別作為底物檢測經(jīng)首次檢測所得抗AQP4抗體陽性標(biāo)本并隨機選取5例抗體陰性標(biāo)本的抗AQP4抗體及滴度,比較其陽性率及滴度變化;將上述首次檢測所得抗AQP4抗體陽性標(biāo)本及5例抗體陰性標(biāo)本反復(fù)凍融3次后分別于室溫、4℃、-20℃保存1周后,檢測其抗AQP4抗體及滴度,比較陽性率和滴度變化。結(jié)果 HEK293-M23-AQP4構(gòu)建成功,M23-AQP4主要表達在細胞膜上。NMO患者抗AQP4抗體陽性率達83.3%(5/6),顯著高于MS患者〔6.3%(1/16)〕、其他脫髓鞘疾病〔3.3%(1/30)〕和非脫髓鞘性疾病〔0.0%(0/10)〕(均P0.01);抗AQP4抗體診斷NMO的敏感性為83.3%(5/6),以非NMO的脫髓鞘疾病作對照時,其診斷NMO特異性為95.6%(44/46),以非脫髓鞘疾病作對照時,其診斷NMO特異性為100%(10/10)。HEK293-M23-AQP4于不同溫度保存后所檢測抗AQP4抗體陽性率和滴度與首次檢測比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P=1.0)。血清標(biāo)本4℃及-20℃保存1周后所檢測抗AQP4抗體陽性率和滴度與首次檢測比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P=1.0);室溫保存1周后抗體滴度(1∶400、1∶400、1∶3200、1∶6400、1∶6400、1∶12800、1∶51200)與首次檢測(1∶800、1∶1600、1∶12800、1∶25600、1∶25600、1∶51200、1∶120400)比較均顯著下降(均P0.01),但陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=1.0)。結(jié)論成功構(gòu)建HEK293-M23-AQP4細胞。以此細胞為底物的CBA法檢測血清抗AQP4抗體對診斷NMO的敏感性和特異性較高,且對標(biāo)本存儲條件要求較低。
【作者單位】： 江西省神經(jīng)病學(xué)研究所;南昌大學(xué)研究生院;
【基金】：江西省科技廳項目(20133BCB24017) 江西省科技廳基金資助項目(20123BBA13050)
【分類號】：R744.5
【正文快照】： 視神經(jīng)脊髓炎(NMO)是主要累及視神經(jīng)和脊髓的嚴(yán)重自身免疫性脫髓鞘性疾病。2004年Lennon等[1]首次在NMO患者血清中發(fā)現(xiàn)NMO-IgG抗體,即抗AQP4抗體[2],從而為認(rèn)識NMO為有別于MS的獨立性疾病提供了依據(jù)。目前已將血清抗AQP4抗體作為支持條件納入NMO診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。血清抗AQP4抗體的

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 趙忙所;孔杰辰;石建雄;王麗華;谷偉中;耿同超;;視神經(jīng)脊髓炎患者血清NMO-IgG檢測及其診斷價值[J];中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2011年01期

2 劉俊秀;賴蓉;鐘德霞;黃帆;豐巖清;梁秀齡;;表達AQP4不同亞型的細胞系檢測AQP4抗體敏感性的研究[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2012年05期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 覃惠洵;劉琳琳;郝洪軍;劉鳳君;高楓;;寡克隆區(qū)帶及抗水通道蛋白4抗體在多發(fā)性硬化診斷中的意義[J];中國實用神經(jīng)疾病雜志;2013年06期

2 李芳;;免疫抑制劑治療神經(jīng)脊髓炎的效果和安全性分析[J];中國實用神經(jīng)疾病雜志;2015年11期

3 潘祥奮;;免疫抑制劑治療視神經(jīng)脊髓炎的有效性及安全性評價[J];中國醫(yī)學(xué)工程;2013年06期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蒙蓮;水通道蛋白4抗體診斷視神經(jīng)脊髓炎準(zhǔn)確性的Meta分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

【二級參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙忙所;孫朝暉;耿同超;;穩(wěn)定表達水通道蛋白-4 HEK293細胞株的建立及應(yīng)用[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年01期

2 孫巧松;劉俊秀;豐巖清;國寧;陳曦;賴蓉;黃帆;;中國人視神經(jīng)脊髓炎疾病譜NMO-IgG/anti-AQP4抗體檢測方法學(xué)的比較[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2010年06期

3 劉俊秀;孫巧松;豐巖清;曾纓;賴蓉;陳曦;黃帆;;穩(wěn)定表達人水通道蛋白4的胚腎細胞系HEK293/AQP4的建立及應(yīng)用[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2010年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 盧永科,李昱辰,杜伯雨,陳新志,仲來福;非蛋白巰基對順鉑在HEK293細胞內(nèi)累積量的影響[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2004年03期

2 呂延成;潘曉瑜;周丹丹;袁俊杰;黃暢;;靶向UL27shRNA抑制Ⅱ型單純皰疹病毒在HEK293細胞中的復(fù)制[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年08期

3 楊保仲,莊心良,趙雪蓮,李士通;肌肉型乙酰膽堿受體在HEK293細胞上的表達[J];中國藥理學(xué)通報;2004年10期

4 張?zhí)?徐琦,宋\，

本文編號：1269088