本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)內(nèi)分泌瘤BON-1及H727細(xì)胞的體外培養(yǎng)模型構(gòu)建及藥物作用研究

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【摘要】：目的：通過不同材料的制備,建立神經(jīng)內(nèi)分泌瘤細(xì)胞的體外三維培養(yǎng)模型,為神經(jīng)內(nèi)分泌瘤的藥物篩查提供新的方法；探究VEGFR抑制劑對人神經(jīng)內(nèi)分泌瘤BON-1和H727細(xì)胞系的影響；同時觀察舒尼替尼與阿西替尼對二維培養(yǎng)與三維培養(yǎng)下的BON-1以及H727細(xì)胞的影響,并探討其影響機制。方法：(1)制備瓊脂糖、海藻酸鍶—聚丙烯酰胺以及聚乙二醇交聯(lián)甲基乙烯基醚馬來酸酐水凝膠,顯微鏡下觀察BON-1細(xì)胞及H727細(xì)胞在水凝膠中的培養(yǎng)情況。(2)96孔板分別培養(yǎng)神經(jīng)內(nèi)分泌瘤BON-1和H727細(xì)胞,并分別加入終濃度為Oumol/L(陰性對照組)、1 umol/L、2 umol/L的舒尼替尼以及1 umol/L、2 umol/L的阿西替尼作用于細(xì)胞后,不同時間段CCK-8法測定各組細(xì)胞增殖的情況。(3)體外建立BON-1和H727細(xì)胞的二維及三維培養(yǎng)模型：①CCK-8法檢測舒尼替尼及阿西替尼對不同培養(yǎng)方式下的BON-1細(xì)胞抑制率的影響；②CCK-8法檢測舒尼替尼及阿西替尼對不同培養(yǎng)方式下的H727細(xì)胞抑制率的影響；③FDA/PI雙染法檢測舒尼替尼對H727細(xì)胞多細(xì)胞球體的影響；④數(shù)碼顯微分析系統(tǒng)評價阿西替尼對H727細(xì)胞多細(xì)胞球體的影響。結(jié)果：(1)BON-1和H727細(xì)胞在海藻酸鍶/聚丙烯酰胺水凝膠上培養(yǎng)可形成類似瓊脂糖培養(yǎng)結(jié)果,而在聚乙二醇交聯(lián)甲基乙烯基醚馬來酸酐水凝膠中,兩者均能形成多細(xì)胞球體。(2)CCK-8法檢測結(jié)果顯示：各實驗組所測OD值低于對照組,進行組間比較,差異存在統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05,即阿西替尼及舒尼替尼給藥組,BON-1及H727細(xì)胞增殖速度低于陰性對照組。(3)①隨著濃度的升高,舒尼替尼以及阿西替尼對BON-1細(xì)胞的抑制率逐漸增大,二維平面培養(yǎng)的抑制率顯著高于三維培養(yǎng),P0.05,該差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；②二維培養(yǎng)下,H727細(xì)胞的抑制率隨著舒尼替尼及阿西替尼的濃度的增加逐漸增大;③FDA/PI雙染法檢測結(jié)果示：當(dāng)舒尼替尼濃度≥4uM時,給藥48h后球體裂解,形態(tài)消失,大量H727細(xì)胞出現(xiàn)凋亡；④隨著時間推移,高劑量阿西替尼組的H727細(xì)胞多細(xì)胞球體在體積上明顯縮小,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：瓊脂糖、海藻酸鍶-聚丙烯酰胺水凝膠及聚乙二醇交聯(lián)甲基乙烯基醚馬來酸酐水凝膠可用于神經(jīng)內(nèi)分泌瘤BON-1及H727細(xì)胞的體外三維模型構(gòu)建,其中瓊脂糖涂層培養(yǎng)具有更良好的可控性；舒尼替尼、阿西替尼對神經(jīng)內(nèi)分泌瘤細(xì)胞BON-1細(xì)胞和H727細(xì)胞的生長增殖具有抑制作用；三維培養(yǎng)下的BON-1細(xì)胞對舒尼替尼、阿西替尼的敏感性低于二維培養(yǎng)；舒尼替尼、阿西替尼能夠促進H727細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4

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5 胡R，

本文編號：1252279