本文關鍵詞：大自噬在小膠質細胞介導的神經(jīng)炎癥及多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用

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【摘要】：目的:大自噬在小膠質細胞介導的神經(jīng)炎癥及多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用。方法:以BV2細胞和原代小膠質細胞為研究對象,采用腫瘤壞死因子(TNF-α)和細菌脂多糖(LPS)建立細胞炎癥模型。第一部分:采用Western blot法檢測自噬相關蛋白LC3(microtubule-associated protein light chain 3)、p62及Beclin1的表達水平;Q-PCR法檢測小膠質細胞M1和M2表型marker的m RNA水平的變化;第二部分:采用定量和逆轉錄PCR(Quantitative and reverse transcription PCR)檢測M1表型marker(i NOS、IL-1β)以及M2表型marker(Arginase、Ym1/2)m RNA水平的變化;用研究自噬的工具藥(雷帕霉素,白藜蘆醇,3甲基腺嘌呤)、血清剝奪和敲減自噬相關基因Atg5,Q-PCR法檢測M1及M2表型marker m RNA水平的變化;第三部分:將原代小膠質細胞培養(yǎng)的上清以1:2的比例和神經(jīng)元培養(yǎng)基混合后,和原代中腦神經(jīng)元共同培養(yǎng)24h,通過CCK8檢測不同組別原代中腦神經(jīng)元細胞的活力,并通過免疫熒光以MAP-2標記神經(jīng)元觀察神經(jīng)元突起的變化。結果:第一部分:TNF-α(1ng/ml和5ng/ml)作用于小膠質細胞可以使自噬相關蛋白LC3、Beclin1、p62升高(P0.05),激活自噬;TNF-α(5ng/ml)作用于小膠質細胞,可以使小膠質細胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平升高(P0.05),而M2marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平下降(P0.05)。第二部分:在TNF-α(5ng/ml)和LPS(100ng/ml)作用于小膠質細胞的細胞模型上,用研究自噬的工具藥上調自噬,可以發(fā)現(xiàn)小膠質細胞M1 marker(i NOS、IL-1β)的m RNA水平下降(P0.05)而M2 marker(Arginase、Ym1/2)的m RNA水平升高(P0.05);而下調自噬,觀察到相反的變化。第三部分:通過CCK8檢測神經(jīng)元活力發(fā)現(xiàn),和單獨TNF-α作用組的小膠質細胞上清共培養(yǎng)后神經(jīng)元活力下降;神經(jīng)元和抑制自噬組的小膠質細胞條件培養(yǎng)上清共培養(yǎng)后,中腦神經(jīng)元活力下降更明顯;同樣和抑制自噬組的小膠質細胞上清共培養(yǎng),中腦神經(jīng)元的突起明顯的縮短;與增強自噬的小膠質細胞上清共培養(yǎng)觀察到相反的變化。結論:大自噬可以調控小膠質細胞介導的炎癥并且增強自噬觀察到小膠質細胞向M2表型趨化,并減弱小膠質細胞條件培養(yǎng)基對中腦損傷元的損傷作用。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R742.5

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