本文關(guān)鍵詞：經(jīng)鼻rhEPO對(duì)慢性腦缺血大鼠行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響

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【摘要】：目的:觀察人重組促紅細(xì)胞生成素(rh EPO)對(duì)大鼠慢性腦缺血后行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響,探索rh EPO在慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。方法:將60只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為假手術(shù)組,2VO組(雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎),2VO+rh EPO組,2VO+rh EPO+AG490組(JAK2的特異性拮抗劑),2VO+AG490組(n=12)。采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法(2VO)建立永久性慢性腦缺血模型。造模3天后給藥,各組分別腹腔注射DMSO(AG490的溶媒)或AG490(5mg/kg),30min后鼻腔緩慢注入生理鹽水或rh EPO(150U/125μl),每周1次,共8次。第8次給藥結(jié)束24小時(shí)后行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取標(biāo)本分別進(jìn)行HE染色觀察神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化;免疫組化法檢測(cè)JAK2,P-JAK2(Tyr1007 1008),STAT3,P-STAT3(Tyr705),Bcl-2,Bax蛋白的表達(dá)水平;原位末端標(biāo)記法(TUNEL)法檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù);實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)Bcl-2,Bax的m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)果:評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)并獲取空間信息的能力和空間記憶能力。(1)定位航行實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到訓(xùn)練期間大鼠平均速度無(wú)顯著差異,且每天各組之間比較無(wú)明顯差異。隨著訓(xùn)練日期增加,5組大鼠平均逃避潛伏期明顯縮短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=23.648,p0.0001);2VO+rh EPO組逃避潛伏期較2VO組明顯縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);2VO+rh EPO+AG490組逃避潛伏期較2VO+rh EPO組延長(zhǎng),從第二天開始兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組逃避潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(2)空間探索實(shí)驗(yàn):2VO+rh EPO組目標(biāo)象限停留時(shí)間與穿越平臺(tái)次數(shù)較2VO組均明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2VO+rh EPO+AG490組目標(biāo)象限停留時(shí)間與穿越平臺(tái)次數(shù)均較2VO+rh EPO明顯縮短,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組目標(biāo)象限停留時(shí)間、穿越平臺(tái)次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.HE染色結(jié)果顯示:假手術(shù)組神經(jīng)元形態(tài)學(xué)未見明顯缺血性改變,細(xì)胞結(jié)構(gòu)緊密,排列整齊。2VO組神經(jīng)元缺失較多,殘留的神經(jīng)細(xì)胞邊緣模糊,排列松散不規(guī)則,胞漿皺縮,邊緣出現(xiàn)空泡,核深染,核固縮、核溶解。2VO+rh EPO組神經(jīng)元形態(tài)學(xué)有輕微改變,排列較整齊。2VO組,2VO+rh EPO+AG490組,2VO+AG490組,神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變類似。3.免疫組化及實(shí)時(shí)定量RT-PCR的結(jié)果:(1)與假手術(shù)組比較,2VO組中P-JAK2和P-STAT3表達(dá)增強(qiáng),上調(diào)Bcl-2、Bax的表達(dá)(p0.05)。(2)與2VO組比較,2VO+rh EPO組增強(qiáng)P-JAK2、P-STAT3蛋白的表達(dá),并上調(diào)Bcl-2的表達(dá)和下調(diào)Bax的表達(dá)(p0.05)。(3)與2VO+rh EPO組比較,2VO+rh EPO+AG490組可抑制EPO誘導(dǎo)的P-JAK2、P-STAT3的表達(dá),下調(diào)Bcl-2的表達(dá)和上調(diào)Bax的表達(dá)(p0.05)。(4)2VO+AG490組中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表達(dá)與2VO組和2VO+rh EPO+AG490組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。4.TUNEL結(jié)果:造模后各組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均較假手術(shù)組增多,各組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:rh EPO可能通過(guò)激活JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,促進(jìn)Bcl-2上調(diào)和Bax下調(diào),減緩慢性腦缺血大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡,從而改善慢性腦缺血大鼠的認(rèn)知功能。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 陳濤;章軍建;余芬;詹雪春;;促紅細(xì)胞生成素對(duì)慢性腦缺血大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年02期

2 姜春娟;許倩;徐凱;代海洋;吳文娟;張追陽(yáng);;EPO干預(yù)后大鼠腦缺血再灌注區(qū)域STAT1和STAT3蛋白表達(dá)與細(xì)胞凋亡[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2013年10期

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本文編號(hào)：1174857