本文關(guān)鍵詞：卵巢切除對(duì)SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表達(dá)的影響

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【摘要】：目的:肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是一慢性進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,主要累及上、下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元,表現(xiàn)為肌無力、肌萎縮和錐體束征。有研究證實(shí)在ALS病人和SOD1轉(zhuǎn)基因鼠的脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白水平呈現(xiàn)上調(diào)趨勢(shì)。另有報(bào)道在SOD1轉(zhuǎn)基因小鼠癥狀前期,與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白平衡失常。以上都說明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與ALS發(fā)病及病程進(jìn)展有關(guān)。Caspase-12為位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜的半胱氨酸蛋白酶家族成員之一。有報(bào)道稱caspase-12基因敲除小鼠可對(duì)抗內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘發(fā)的凋亡,而對(duì)其他形式凋亡信號(hào)刺激仍有反應(yīng)。Caspase-12在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡過程中處于關(guān)鍵位置,在死亡受體和線粒體凋亡途徑中不被激活。說明caspase-12參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡,與其他類型凋亡進(jìn)程無關(guān)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究證實(shí)SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠卵巢切組比SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠非卵巢切組提前發(fā)病,說明雌激素在ALS中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用(《卵巢切除對(duì)家族性肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型的影響》,學(xué)位論文,2012,鄭倩)。許多研究顯示雌激素可作用于其相應(yīng)受體干預(yù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。本實(shí)驗(yàn)通過觀察卵巢切除對(duì)SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠腰段脊髓caspase-12基因表達(dá)的影響,探討caspase-12、雌激素在SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)病進(jìn)程中可能存在的關(guān)系。方法:1動(dòng)物模型及分組繁殖并飼養(yǎng)家族性肌萎縮側(cè)索硬化動(dòng)物模型即經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)鑒定為SOD1G93A轉(zhuǎn)基因的雌性小鼠,隨機(jī)將10只5周齡攜帶SOD1G93A基因的小鼠分為2個(gè)實(shí)驗(yàn)組(n=5只):卵巢切除組(OVX組)、陽性對(duì)照組(NO-OVX組)。對(duì)照組為同窩、同月齡非SOD1G93A轉(zhuǎn)基因雌性小鼠(CON組)。2取材用10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后,摘除眼球取血后,迅速斷頭并剝離取出腦和脊髓組織,置于Eppendorf管內(nèi),投于盛有液氮的保溫桶內(nèi),轉(zhuǎn)移至超低溫冰箱儲(chǔ)存待用(OVX組、NO-OVX組分別于各組發(fā)病期取材,CON組與NO-OVX組同時(shí)取材)。3基因表達(dá)譜研究利用基因芯片技術(shù)對(duì)3組小鼠腰段脊髓進(jìn)行基因表達(dá)譜分析。4逆轉(zhuǎn)錄定量PCR(q RT-PCR)使用q RT-PCR技術(shù)檢測(cè)不同分組SODIG93A小鼠及陰性對(duì)照鼠腰段脊髓內(nèi)caspase-12基因表達(dá)情況。5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析,組間行兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),以a=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果:1基因芯片結(jié)果1.1聚類分析結(jié)果將OVX組、NO-OVX組、CON組3組樣本得到的差異基因進(jìn)行聚類分析,聚類分析后得到聚類熱圖,每組樣本均聚集在一起。OVX組與NO-OVX組、CON組比較差異基因表達(dá)明顯。1.2基因篩選結(jié)果選取SOD1G93A轉(zhuǎn)基因雌性小鼠OVX組、NO-OVX組、CON組基因表達(dá)譜進(jìn)行對(duì)比,取P≤0.05,fold-change值≥+2或≤-2為篩選條件。其中OVX組與NO-OVX組相比共篩選出差異表達(dá)基因21個(gè),表達(dá)上調(diào)的基因有19個(gè),表達(dá)下調(diào)的基因有2個(gè)。OVX組與NO-OVX組差異基因列于Table 1。其中caspase-12基因OVX組與NO-OVX組相比fold-change值為2.2458。2 Caspase-12在OVX組、NO-OVX組、CON組的表達(dá)。q RT-PCR結(jié)果顯示,OVX組腰段脊髓caspase-12基因表達(dá)量與NO-OVX組相比升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NO-OVX組腰段脊髓caspase-12基因表達(dá)量與CON組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1 Caspase-12基因在卵巢切除SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠腰段脊髓表達(dá)增加。2雌激素可能通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡對(duì)SOD1G93A轉(zhuǎn)基因鼠發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：Caspase-12 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 凋亡 肌萎縮側(cè)索硬化 脊髓 卵巢切除 基因芯片 逆轉(zhuǎn)錄定量PCR
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.8
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-20
• 附圖20-22
• 附表22-23
• 討論23-27
• 結(jié)論27-28
• 參考文獻(xiàn)28-32
• 綜述 Caspase家族與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病32-47
• 參考文獻(xiàn)38-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡歷48

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