本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-199a-3p調(diào)控mTOR信號(hào)通路抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制研究

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【摘要】：研究目的:膠質(zhì)瘤是最常見的高度惡性、高侵襲性的原發(fā)性惡性腦腫瘤。盡管已經(jīng)過了幾十年的不懈研究,但是由于腫瘤的快速增殖、高度侵襲潛能以及對(duì)放化、療的耐受,使得腫瘤的預(yù)后仍極差,多形性膠質(zhì)瘤母細(xì)胞瘤(GBM)的平均生存期僅15~18個(gè)月。越來越多的研究表明在惡性腫瘤中,微小RNA(mi RNAs)的異常表達(dá)與腫瘤進(jìn)展、復(fù)發(fā)、預(yù)后密切相關(guān)。mi RNAs是一類小的非編碼RNA,通過上調(diào)或下調(diào)mi RNAs的表達(dá)可以調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄后翻譯水平。據(jù)報(bào)道,micro RNA-199a-3p(mi R-199a-3p)在人類多種惡性腫瘤中存在差異表達(dá)現(xiàn)象,mi R-199a-3p的過表達(dá)或低表達(dá)能影響哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的功能,調(diào)控腫瘤的增殖、凋亡、侵襲等不同的生物學(xué)作用。然而,關(guān)于mi R-199a-3p在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平、功能研究以及可能的影響機(jī)制的報(bào)道極少。因此,我們使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR比較了mi R-199a-3p在人腦膠質(zhì)瘤和非瘤腦組織的表達(dá)差異,隨后進(jìn)一步驗(yàn)探索其與人腦膠質(zhì)瘤的增殖、侵襲、凋亡作用及相關(guān)機(jī)制。研究方法:我們選擇了蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)外科自2000年至2013年術(shù)中切除的膠質(zhì)瘤的組織標(biāo)本61例,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測了mi R-199a-3p在標(biāo)本中的表達(dá)水平;然后,在膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87和U251中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi R-199a-3p上調(diào)其表達(dá)水平,隨后檢測上調(diào)后細(xì)胞增殖、侵襲和凋亡功能的變化。Western blot分析m TOR信號(hào)通路上相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.人腦膠質(zhì)瘤中mi R-199a-3p,m TOR及其下游基因P70S6K的表達(dá)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測了6例非瘤腦組織和61例膠質(zhì)瘤標(biāo)本中mi R-199a-3p的表達(dá),其表達(dá)水平在膠質(zhì)瘤標(biāo)本中比非瘤腦組織低,但在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組(Ⅱ級(jí))和高級(jí)別(Ⅲ,Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤組之間表達(dá)無差異(P0.05)。m TOR在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)較非瘤腦組織高(P0.01),且高級(jí)別膠質(zhì)瘤組中m TOR表達(dá)水平比低級(jí)別膠質(zhì)瘤組更高(P0.01)。膠質(zhì)瘤中m TOR下游基因p70S6K的表達(dá)比非瘤腦組織高(P0.01),但在低級(jí)別組膠質(zhì)瘤和高級(jí)別組膠質(zhì)瘤之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.上調(diào)mi R-199a-3p表達(dá)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖在U87和U251兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞中上調(diào)mi R-199a-3p表達(dá)后明顯抑制了細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期,數(shù)據(jù)提示mi R-199a-3p增加了G1期細(xì)胞數(shù)(P0.01),降低了S期的細(xì)胞數(shù)(P0.05)。3.mi R-199a-3p表達(dá)水平的改變與凋亡、侵襲無關(guān)在mi R-199a-3p過表達(dá)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251中,細(xì)胞的凋亡和侵襲能力未見明顯改變(P0.05);同時(shí)Western blot分析與凋亡、侵襲相關(guān)蛋白MMP2(matrix metallopeptidase 2)和caspase-3的表達(dá),結(jié)果提示未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.上調(diào)mi R-199a-3p后抑制了m TOR及其下游基因PCR結(jié)果表明在轉(zhuǎn)染mi R-199a-3p的U87和U251兩株膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中,m TOR表達(dá)水平明顯下降(P0.01)。此外,Western blot分析和免疫熒光結(jié)果提示m TOR信號(hào)通路中m TOR、p-AKT、P70S6K和p-4E-BP1的表達(dá)在mi R-199a-3p上調(diào)組中有下降。預(yù)先經(jīng)NVP-BEZ-235處理抑制m TOR表達(dá),然后再上調(diào)mi R-199a-3p后細(xì)胞增殖改變不明顯(P0.05)。結(jié)論:mi R-199a-3p在膠質(zhì)瘤標(biāo)本,膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U87、U251中的表達(dá)比非瘤腦組織中的表達(dá)低,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87、U251中,mi R-199a-3p可通過m TOR信號(hào)通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖,發(fā)揮類似抑癌基因的作用。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤 miR-199a-3p microRNA mTOR 增殖
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.4
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-13
• 參考文獻(xiàn)11-13
• 第一部分MIR-199A-3P在人腦膠質(zhì)瘤的表達(dá)及臨床意義13-23
• 材料與方法13-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-20
• 討論20-21
• 結(jié)論21
• 參考文獻(xiàn)21-23
• 第二部分MIR-199A-3P調(diào)控AKT/MTOR信號(hào)通路的功能研究23-40
• 材料和方法23-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-36
• 討論36-37
• 結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述40-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 英文縮寫一覽表47-48
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文48-49
• 致謝49-50

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林松;邵楠楠;范磊;馬秀才;浦飛飛;邵增務(wù);;Effect of MicroR NA-101 on Proliferation and Apoptosis of Human Osteosarcoma Cells by Targeting mTOR[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2014年06期

2 李振宇;;miRNA與腫瘤發(fā)生[J];中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)、醫(yī)學(xué)版);2006年03期

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本文編號(hào)：1092735