本文關(guān)鍵詞：EAE小鼠腦及脊髓組織中IL-17及c-Maf表達(dá)與病程關(guān)系的研究

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【摘要】：目的:探討IL-17及c-Maf在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠不同發(fā)病時(shí)期腦及脊髓組織中的動(dòng)態(tài)變化,進(jìn)一步探討IL-17及c-Maf在EAE的發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:按照隨機(jī)數(shù)字法將36只10-12周齡,體重在18-22g之間的雌性C57BL/6小鼠,分為EAE組18只和對照組18只。本研究采用髓鞘少突細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)35-55多肽/完全弗氏佐劑(CFA)的方法免疫C57BL/6小鼠制備EAE模型。對照組小鼠僅給予生理鹽水注射。每天觀察每只小鼠的臨床表現(xiàn),稱重并參照評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能評分。將免疫后第10天記為發(fā)病前期,第18天記為發(fā)病高峰期,第30天記為緩解期,并在兩組中分別取材,記為發(fā)病高峰期組和緩解期組。將兩組小鼠按不同時(shí)期處死后取腦組織做石蠟切片,觀察炎癥細(xì)胞浸潤的情況,取脊髓組織做LFB染色,觀察脫髓鞘情況。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測各時(shí)期兩組小鼠腦及脊髓組織中IL-17m RNA及c-Maf m RNA含量并進(jìn)行比較,觀察各個(gè)時(shí)期的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以x±SD表示,所有數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和正態(tài)性檢驗(yàn),比較采用t檢驗(yàn),多組間參數(shù)比較采用單因素方差分析,計(jì)量資料組間比較進(jìn)行方差分析和q檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,以P0.05作為差異顯著性指標(biāo)。結(jié)果:1、動(dòng)物發(fā)病情況:EAE組的小鼠均出現(xiàn)臨床癥狀,體重明顯下降,平均體重均低于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);且EAE組神經(jīng)功能評分均高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2、組織病理學(xué)觀察:2.1 HE染色2.1.1發(fā)病前期:EAE組中小鼠的腦組織中發(fā)現(xiàn)少數(shù)單核細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞浸潤,未見血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。2.1.2發(fā)病高峰期:EAE小鼠的腦組織中出現(xiàn)大量單核細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞浸潤和血管袖套樣改變。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。2.1.3緩解期:EAE小鼠的腦組織中單核樣細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞減少,血管袖套樣改變消失。對照組小鼠的腦組織中無明顯上述表現(xiàn)。2.2 LFB染色2.2.1發(fā)病前期:EAE小鼠的脊髓組織中出現(xiàn)白質(zhì)疏松。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。2.2.2發(fā)病高峰期:EAE小鼠的脊髓組織中可見明顯脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。2.2.3緩解期:EAE小鼠的脊髓組織中可見脫髓鞘改變。對照組小鼠的脊髓組織中無明顯上述表現(xiàn)。3、腦組織中IL-17 m RNA及c-Maf m RNA的含量及動(dòng)態(tài)變化3.1腦組織中IL-17 m RNA的含量:3.1.1發(fā)病前期:EAE組小鼠的腦組織中IL-17m RNA表達(dá)比對照組高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.1.2發(fā)病高峰期:EAE組小鼠的腦組織中IL-17m RNA表達(dá)明顯高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.1.3緩解期:EAE組小鼠的腦組織的IL-17m RNA表達(dá)高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.1.4動(dòng)態(tài)變化:對照組中,IL-17m RNA在各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)差距不大,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。EAE組中,IL-17m RNA各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)顯示,發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.2腦組織中c-Maf m RNA的含量:3.2.1發(fā)病前期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)較對照組高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.2.2發(fā)病高峰期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)明顯高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.2.3緩解期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.2.4動(dòng)態(tài)變化:空白對照組各時(shí)間點(diǎn)c-Maf m RNA表達(dá)差距不大,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。EAE組各時(shí)間點(diǎn)c-Maf m RNA表達(dá)發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4、脊髓組織中IL-17 m RNA及c-Maf m RNA的含量及動(dòng)態(tài)變化4.1脊髓組織中IL-17m RNA的含量:4.1.1發(fā)病前期:EAE組的IL-17m RNA表達(dá)較對照組高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.1.2發(fā)病高峰期:EAE組的IL-17m RNA表達(dá)明顯高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.1.3緩解期:EAE組的IL-17m RNA表達(dá)高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.1.4動(dòng)態(tài)變化:對照組各時(shí)間點(diǎn)IL-17m RNA表達(dá)差距不大,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意差異(P0.05)。EAE組各時(shí)間點(diǎn)IL-17m RNA表達(dá)發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.2脊髓組織中c-Maf m RNA的含量:4.2.1發(fā)病前期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)較對照組高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.2.2發(fā)病高峰期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)明顯高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.2.3緩解期:EAE組的c-Maf m RNA表達(dá)高于對照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4.2.4動(dòng)態(tài)變化:空白對照組各時(shí)間點(diǎn)c-Maf m RNA表達(dá)差距不大,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。EAE組各時(shí)間點(diǎn)c-Maf m RNA表達(dá)發(fā)病高峰期高于發(fā)病前期和緩解期,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:隨著免疫時(shí)間的延長及EAE小鼠的病程進(jìn)展,IL-17及其重要的調(diào)控因子c-Maf的表達(dá)水平呈先增高后下降的趨勢。IL-17及c-Maf與EAE的發(fā)生、發(fā)展和緩解存在重要聯(lián)系。
【關(guān)鍵詞】：實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎 IL-17 c-Maf 多發(fā)性硬化
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R744.5
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 縮略語12-13
• 第1章 引言13-15
• 第2章 材料與方法15-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組15
• 2.2 試劑15-16
• 2.3 主要儀器16
• 2.4 手術(shù)材料和器械16
• 2.5 動(dòng)物模型的建立16-17
• 2.6 動(dòng)物發(fā)病的觀察17
• 2.7 取材17
• 2.8 HE染色17-18
• 2.9 LFB染色18-19
• 2.10 RT-PCR檢測腦組織和脊髓組織中的IL-17和c-Maf的mRNA水平19-21
• 2.10.1 提取RNA19
• 2.10.2 cDNA第一鏈的合成19
• 2.10.3 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)19-20
• 2.10.4 電泳鑒定20-21
• 第3章 結(jié)果21-25
• 3.1 發(fā)病總體情況21-22
• 3.1.1 體重變化比較21
• 3.1.2 神經(jīng)功能缺損評分比較21-22
• 3.2 病理結(jié)果觀察22
• 3.2.1 兩組小鼠的HE染色22
• 3.2.2 兩組小鼠的LFB染色22
• 3.3 兩組小鼠RT-PCT方法檢測IL-17mRNA和c-MafmRNA的表達(dá)結(jié)果22-25
• 3.3.1 EAE組和對照組腦組織中IL-17mRNA和c-MafmRNA的表達(dá)情況22-23
• 3.3.2 EAE組和對照組脊髓組織中IL-17mRNA和c-MafmRNA的表達(dá)情況23-25
• 第4章 討論25-28
• 第5章 結(jié)論與展望28-29
• 5.1 結(jié)論28
• 5.2 展望28-29
• 致謝29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 附圖33-36
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果36-37
• 綜述 EAE模型的研究進(jìn)展37-43
• 參考文獻(xiàn)42-43

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