本文關(guān)鍵詞：Foxo1介導(dǎo)腦出血損傷后的炎癥反應(yīng)及其機(jī)制研究

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【摘要】：背景:叉形頭轉(zhuǎn)錄因子O亞型(Forkhead box O1,Foxo)是一種存在于真核生物的重要轉(zhuǎn)錄因子,其生物學(xué)功能在臨床上應(yīng)用廣泛。在Foxo的眾多家族成員中,對于Foxo1的研究較為廣泛。目前已被證明其與凋亡、炎癥和細(xì)胞生長等病理生理或生理現(xiàn)象密切相關(guān)。近年來發(fā)現(xiàn)Foxo1在機(jī)體多種組織器官炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用,但在腦出血后炎癥反應(yīng)卻未見報道。因此,通過調(diào)控Foxo1的表達(dá),在腦出血后炎癥損傷以及疾病恢復(fù)等方面具有深遠(yuǎn)的臨床意義。目的:探討調(diào)控Foxo1對大鼠腦出血后炎癥損傷的保護(hù)作用以及對其下游炎癥因子的作用。方法:運用抽取的自體術(shù)側(cè)股動脈血注入同側(cè)大腦紋狀體建立腦出血(Intracerebral Hemorrhage,ICH)模型。在腦出血后Foxo1表達(dá)最佳時間點篩選實驗中,將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(sham)組、腦出血手術(shù)1h、6h、12h、24h、48h與72(ICH1h、6h、12h、24h、48h與72h)組,篩選Foxo1在ICH后最佳表達(dá)時間點;Foxo1表達(dá)最佳腦區(qū)篩選實驗中,將SD大鼠隨機(jī)分為術(shù)側(cè)紋狀體(Ipsi-CS)、術(shù)側(cè)皮質(zhì)(Ipsi-CX)、對側(cè)紋狀體(Cont-CS)與對側(cè)皮質(zhì)(Cont-CX)組,篩選Foxo1在ICH后最佳表達(dá)腦區(qū);特異性si RNA篩選實驗中,將SD大鼠隨機(jī)分為ICH+無序序列siRNA(nonsiRNA)和3條特異性siRNA處理(foxo1sirna-1285、foxo1sirna-1612、foxo1sirna-1434)組,處理組于ich建模前24h術(shù)側(cè)側(cè)腦室注射,篩選最佳sirna;在foxo1炎癥損傷與下游因子影響實驗中,將sd大鼠分為假手術(shù)(sham)組、篩選時間點后的手術(shù)(ich)組、ich+篩選后的sirna處理(ich+sirna)組與ich+無序序列sirna(nonsirna)組,觀察foxo1的調(diào)控是否具有腦保護(hù)作用與對其下游炎癥因子的影響,并探討相關(guān)機(jī)制。具體方法如下:(1)大鼠腦出血1h、6h、12h、24h、48h與72h后,將大鼠灌注、斷頭、處死并取腦組織蛋白。利用westernblot蛋白印跡篩選foxo1最佳表達(dá)時間后,westernblot蛋白印跡與rt-pcr篩選foxo1最佳表達(dá)腦區(qū)。(2)篩選出foxo1表達(dá)最佳時間點與腦區(qū)后,利用westernblot蛋白印跡法檢測foxo1蛋白在大鼠腦組織中的最佳時間點與腦區(qū)中表達(dá),篩選出最高效的foxo1干擾序列。(3)對sham組、ich組、ich+foxo1sirna和ich+nonsirna組大鼠進(jìn)行g(shù)arcia神經(jīng)功能評分與干-濕重腦水含量分析,westernblot蛋白印跡與rt-pcr檢測foxo1的蛋白與mrna水平。(4)westernblot蛋白印跡測定tlr4、nf-κb、tnf-α、il-1β與il-18蛋白的表達(dá),并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(elisa)檢測mpo、il-1β與il-18的蛋白濃度。結(jié)果:(1)foxo1在ich12h之前呈上升趨勢,并在12h的表達(dá)達(dá)到最高峰,同時隨時間推移又呈下降趨勢。位于12h時間點的蛋白表達(dá)條帶灰度值/內(nèi)參灰度值均高于其它時間點,存在顯著性差異(p0.01)。(2)foxo1在insi-cs中的蛋白表達(dá)條帶灰度值/內(nèi)參灰度值與mrna水平均高于其它三個腦區(qū)(insi-cx,cont-cs,Cont-CX),存在顯著性差異(P0.01)。(3)Foxo-siRNA-1612片段干擾后Foxo1表達(dá)條帶灰度值/內(nèi)參灰度值最低,其干擾效率達(dá)50%以上,干擾效果最佳,存在顯著性差異(P0.01)。(4)ICH+siRNA組大鼠相對于ICH組與ICH+nonsiRNA組,Foxo1表達(dá)條帶灰度值/內(nèi)參灰度值與mRNA水平均顯著性降低,存在顯著性差異(P0.01)。(5)ICH+siRNA組大鼠的Garcia評分均顯著性高于ICH組與ICH+nonsiRNA組,腦水含量均顯著性低于ICH組與ICH+nonsiRNA組,存在顯著性差異(P0.01);并且在ICH組與ICH+nonsiRNA組術(shù)側(cè)腦水含量顯著性高于對側(cè)腦,存在顯著性差異(P0.01);而ICH+siRNA組大鼠術(shù)側(cè)腦水含量明顯高于對側(cè)腦,存在明顯差異(P0.05)。(6)ICH+siRNA組大鼠TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β與IL-18表達(dá)條帶灰度值/內(nèi)參灰度值均顯著性低于ICH組與ICH+nonsiRNA組;MPO、IL-1β與IL-18蛋白濃度水平均顯著性低于ICH組與ICH+nonsiRNA組,存在顯著性差異(P0.01)。結(jié)論:(1)Foxo1在大鼠腦出血后12h的術(shù)側(cè)紋狀體中表達(dá)最明顯;si RNA能特異性抑制體內(nèi)Foxo1基因的表達(dá),減少神經(jīng)功能缺損與水腫。(2)siRNA干擾Foxo1后,Foxo1下游的炎癥因子蛋白水平與濃度均可得到有效的抑制,并闡明Foxo1的可能通過TLR4/NF-κB信號通路實現(xiàn)進(jìn)行炎癥反應(yīng),而抑制Foxo1的表達(dá)可能是其實現(xiàn)腦出血后抗炎反應(yīng)作用的重要機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】：Foxo1 腦出血 炎癥反應(yīng) TLR4
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R743.34
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 第一部分 Foxo1在不同時間點與出血后大鼠腦區(qū)的表達(dá)情況探究14-25
• 1 實驗材料14-16
• 2 實驗方法16-22
• 3 實驗結(jié)果22-24
• 4 討論24-25
• 第二部分 SiRNA干擾Foxo1后對腦出血損傷的影響以及對經(jīng)由Foxo1的下游炎癥因子的調(diào)控作用25-38
• 1 實驗材料25-26
• 2 實驗方法26-30
• 3 實驗結(jié)果30-36
• 4 討論36-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 致謝50-51
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文51

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