本文關(guān)鍵詞：高糖缺氧通過(guò)增加UCP2表達(dá)和線粒體凋亡途徑加重星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷

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【摘要】：目的研究高血糖狀態(tài)下,體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞在氧糖剝奪后復(fù)氧復(fù)糖(OGD/R)損傷時(shí)UCP2基因及線粒體凋亡相關(guān)因子的表達(dá),探討高血糖加重腦缺血再灌注損傷中星形膠質(zhì)細(xì)胞的變化及其分子機(jī)制。方法取F2代星形膠質(zhì)細(xì)胞(MA-h)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分組如下(1)正�？瞻讓�(duì)照組:含17.5mmol/l葡萄糖的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,培養(yǎng),不進(jìn)行缺氧處理;(2)缺氧缺糖再灌注組(OGD/R):正常條件下培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧缺糖6h,然后再?gòu)?fù)氧復(fù)糖0、6、12、24h,共4個(gè)時(shí)間點(diǎn);(3)高糖缺氧缺糖再灌注組(OGD/R):50mmol/l葡萄糖的DMEM/F12完全培養(yǎng)基,37℃,培養(yǎng),缺氧缺糖處理與(2)相同。采用CCK-8法檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷后的生存率;DHE熒光探針染色觀察ROS生成情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;免疫熒光、Wetern blot、熒光PCR法檢測(cè)UCP2基因及線粒體通路凋亡相關(guān)因子Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9在不同處理組細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果(1)CCK-8及臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果顯示,隨著復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間的延長(zhǎng),星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活率呈下降趨勢(shì),而死亡率逐漸升高。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果提示,正常血糖組,隨著復(fù)氧復(fù)糖時(shí)間的延長(zhǎng),星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡率逐漸遞增;高血糖組,OGD后復(fù)氧復(fù)糖各時(shí)間點(diǎn)的星形膠質(zhì)細(xì)胞凋亡率明顯高于正常血糖組,并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)DHE熒光探針染色ROS結(jié)果提示,正常對(duì)照組幾乎不產(chǎn)生ROS,OGD/R24h組ROS產(chǎn)生量高于OGD6h組;高血糖組相應(yīng)各亞組的綠色熒光都強(qiáng)于正常血糖組。(4)免疫熒光、Wetern blot、PCR檢測(cè)結(jié)果表明:與正常血糖組比較,高血糖各亞組的UCP2表達(dá)及凋亡途徑關(guān)鍵因子Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9的表達(dá)都明顯升高(P0.05)。結(jié)論氧糖剝奪能夠引起星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡,高血糖增加缺氧損傷時(shí)星形膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡及ROS產(chǎn)生。高血糖缺氧增加UCP2基因及蛋白表達(dá)。高血糖缺氧損傷時(shí),可以通過(guò)激活線粒體凋亡途徑加重星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細(xì)胞 氧糖剝奪(OGD) 解偶聯(lián)蛋白-2 線粒體
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R587.1;R743.3
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 縮略詞表8-10
• 前言10-13
• 第一部分 高糖/氧糖剝奪(OGD)加重星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷13-22
• 引言13
• 材料與方法13-18
• 結(jié)果18-20
• 討論20-22
• 第二部分 高血糖氧糖剝奪后星形膠質(zhì)細(xì)胞UCP2基因及凋亡相關(guān)因子的表達(dá)22-47
• 引言22
• 材料與方法22-33
• 結(jié)果33-42
• 討論42-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-57
• 文獻(xiàn)綜述 高血糖加重腦缺血再灌注防治研究進(jìn)展57-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文67

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本文編號(hào)：1055806