本文關(guān)鍵詞：PI3K-AKT通路對(duì)腦缺血損傷神經(jīng)干細(xì)胞的增殖作用

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【摘要】：目的:利用低氧干預(yù)分離的小鼠神經(jīng)干細(xì)胞,通過構(gòu)建腺病毒載體將腺病毒5-絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶3(Ad5-AKT3)基因和絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶3小干擾RNA(AKT3 si RNA)干擾轉(zhuǎn)染至缺血神經(jīng)干細(xì)胞,探索磷酸肌醇三磷酸激酶-絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶(PI3K-AKT)通路對(duì)缺血性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖作用。方法:取新生24h昆明小鼠海馬,分離培養(yǎng)原代神經(jīng)干細(xì)胞,并采用巢蛋白(Nestin)免疫熒光檢測(cè)和5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Brdu)滲入實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行鑒定;將所培養(yǎng)的傳代神經(jīng)干細(xì)胞隨機(jī)分組:正常組、缺血模型組、低氧組(低氧+缺血模型組)、Lip2000組(低氧+缺血模型組+Lip2000空轉(zhuǎn)染組)、AKT轉(zhuǎn)染組(低氧+缺血模型組+Ad5-AKT3轉(zhuǎn)染組)、AKT干擾組(低氧+缺血模型組+Lip2000+AKT3 si RNA干擾組)。建立腦缺血損傷的體外模型,低氧干預(yù),構(gòu)建腺病毒Ad5-AKT3載體和AKT3 si RNA后,各組行MTT檢測(cè);RT-q PCR檢測(cè)AKT3 m RNA表達(dá)情況;Werstern Blot檢測(cè)PI3K、AKT3、PCNA。結(jié)果:通過免疫熒光檢測(cè)Nestin鑒定神經(jīng)干細(xì)胞球,在熒光顯微鏡下觀察到綠色明亮且典型的細(xì)胞球,球內(nèi)可見清晰結(jié)構(gòu);滲入Brdu免疫熒光檢測(cè)可見整個(gè)著色細(xì)胞球。MTT OD值和RT-q PCR檢測(cè)AKT3 m RNA均顯示,與正常組相比,模型組和AKT干擾組下降(P0.05),其余各組均升高(P0.05),其中低氧組和Lip2000組之間無明顯差異(P0.05)。與模型組相比,除AKT干擾組下降外(P0.05),其余各組均升高(P0.05)。Western Blot檢測(cè)PI3K、AKT3、PCNA蛋白表達(dá)與正常組相比,模型組和AKT干擾組表達(dá)量減少(P0.05),低氧組、Lip2000組和AKT轉(zhuǎn)染組均增加(P0.05),其中AKT轉(zhuǎn)染組差異最明顯(P0.01)。結(jié)論:PI3K-AKT信號(hào)通路在低氧干預(yù)下有效促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖過程。
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬教學(xué)醫(yī)院南京軍區(qū)福州總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;南京軍區(qū)福州總醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： PIK-AKT信號(hào)通路 神經(jīng)干細(xì)胞 腺病毒AKT載體 AKT干擾
【基金】：南京軍區(qū)醫(yī)藥衛(wèi)生科研基金(12MA100)
【分類號(hào)】：R743
【正文快照】： 神經(jīng)干細(xì)胞是一類存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)具有高度增殖、自我更新及分化能力,在一定條件下能不斷進(jìn)行有絲分裂并分化成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞及少突膠質(zhì)細(xì)胞的原始母細(xì)胞�；谏窠�(jīng)干細(xì)胞上述良好特性,神經(jīng)干細(xì)胞移植研究取得了重要進(jìn)展,在缺血缺氧性腦病[1—2]、阿爾茨海默病[3]

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1 劉佩;劉U，

本文編號(hào)：1032011