本文關(guān)鍵詞：EGFR抑制劑對宮內(nèi)感染仔鼠腦組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 小膠質(zhì)細(xì)胞 表皮生長因子受體 EGFR抑制劑C225 宮內(nèi)感染 新生大鼠

【摘要】：背景目前認(rèn)為,母體感染所繼發(fā)的宮內(nèi)感染是胎兒罹患神經(jīng)系統(tǒng)畸形的主要原因,病毒和細(xì)菌感染致流產(chǎn)和新生兒出生后神經(jīng)功能障礙的病例多有報(bào)道,因此,慢性腦內(nèi)炎癥反應(yīng)有可能是其相關(guān)重要病理特征之一,而小膠質(zhì)細(xì)胞近年來已成為研究神經(jīng)系統(tǒng)炎癥的一個(gè)熱點(diǎn)。小膠質(zhì)細(xì)胞是一種非常敏感的細(xì)胞,神經(jīng)系統(tǒng)中極其微小的病變就可以引起小膠質(zhì)細(xì)胞的激活,活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可以釋放多種細(xì)胞因子,如TNF-α、 IL-1β等,在腦內(nèi)炎癥中起到損傷作用。小膠質(zhì)細(xì)胞的激活機(jī)制可能與EGFR通路(Epithelial growthfactor receptor pathway)有關(guān),EGFR通路中的某種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞活化,從而使活化的小膠質(zhì)細(xì)胞釋放相關(guān)炎性因子,進(jìn)而造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害。LPS是最常用最經(jīng)典的致炎劑,是小膠質(zhì)細(xì)胞確定的活化因子之一,多次用來制作神經(jīng)細(xì)胞的炎性損傷模型。C225是EGFR的特異性單克隆抗體,可以通過免疫結(jié)合抑制EGFR通路活化,故應(yīng)用其作為EGFR抑制劑創(chuàng)建本研究的干預(yù)組。本實(shí)驗(yàn)通過制作宮內(nèi)感染動物模型探討了EGFR通路的活化對小膠質(zhì)細(xì)胞的激活機(jī)制的影響,抑制EGFR通路后小膠質(zhì)細(xì)胞的活化程度,以及EGFR抑制劑對宮內(nèi)感染所致炎癥相關(guān)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和損傷后修復(fù)的影響。目的本研究擬通過建立孕鼠LPS動物模型,將孕鼠隨機(jī)分組并分別給予C225或等量生理鹽水進(jìn)行干預(yù)后,腹腔注射LPS模擬孕鼠宮內(nèi)炎癥,通過形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)等手段檢測EGFR通路對小膠質(zhì)細(xì)胞的激活機(jī)制以及其相關(guān)下游炎癥因子水平變化的影響,觀察EGFR抑制劑對宮內(nèi)感染仔鼠腦組織炎癥反應(yīng)影響。探究了EGFR通路在活化小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)炎癥中的作用和抑制EGFR通路后對小膠質(zhì)細(xì)胞激活造成的影響,以及EGFR抑制劑對宮內(nèi)感染所致炎癥相關(guān)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和損傷后修復(fù)的關(guān)系。方法將雌性大鼠80只與雄性大鼠40只于20時(shí)以2：1合籠,次日上午8時(shí)查陰道涂片,以查得精子為妊娠第1天,孕鼠另籠飼養(yǎng)。將上述孕鼠隨機(jī)分為干預(yù)組(C225+LPS組)、模型組(LPS組)和對照組(NS組)。脂多糖凍干粉制劑溶于滅菌生理鹽水配制成1g/ml和0.5g/ml兩種規(guī)格,振蕩混勻,4-C保存?zhèn)溆谩Ｃ拷M取妊娠14天的大鼠,向模型組孕鼠腹腔注射濃度為0.5g/ml的脂多糖溶液0.2m1,向干預(yù)組孕鼠腹腔注射濃度1g/ml的脂多糖溶液0.1ml,同時(shí)注射含250 nM C225的生理鹽水0.1ml,向?qū)φ战M孕鼠腹腔注射生理鹽水0.2m1,均連續(xù)注射5天。每組隨機(jī)取6只新生仔鼠,飼養(yǎng)至28天,通過簡化Morris水迷宮測試,了解其學(xué)習(xí)與記憶能力；分別取生后1、3、5天新生鼠,稱重后一部分做腦組織石蠟切片,一部分直接斷頭取腦,留取新鮮腦組織標(biāo)本,先液氮保存,次日轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存?zhèn)溆�。進(jìn)行TTC染色,觀察腦組織大體形態(tài)。進(jìn)行HE染色,觀察其病理變化。用免疫組織化學(xué)法檢測OX42和磷酸化表皮生長因子受體(Phosphorylation of growth factor receptor, pEGFR)的表達(dá)。ELISA法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞活化產(chǎn)物TNF-a及IL-1p的表達(dá)水平。另各組孕鼠留取其胎盤,行HE染色觀察其病理變化。SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.相同時(shí)間點(diǎn)相比,模型組所產(chǎn)新生大鼠體重較干預(yù)組及對照組新生大鼠均低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),對照組所產(chǎn)新生大鼠與干預(yù)組相比,體重較大,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且對照組及干預(yù)組所產(chǎn)新生大鼠體重增長較模型組快,模型組與干預(yù)組所產(chǎn)大鼠體重增長趨勢相當(dāng)。水迷宮測試結(jié)果提示模型組所產(chǎn)仔鼠平均逃逸潛伏期較干預(yù)組及對照組長,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而干預(yù)組較對照組長,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.TTC染色顯示模型組孕鼠所產(chǎn)大鼠腦組織可見損傷病灶,腦組織HE染色顯示,模型組孕鼠所產(chǎn)新生大鼠腦組織細(xì)胞水腫、細(xì)胞排列紊亂,并伴有神經(jīng)元的消失；干預(yù)組腦細(xì)胞仍可見正常的結(jié)構(gòu),細(xì)胞層次尚分明,部分可見少量炎細(xì)胞浸潤；對照組腦組織結(jié)構(gòu)清楚,細(xì)胞層次分明。模型組及干預(yù)組孕鼠胎盤HE染色結(jié)果顯示有中性粒細(xì)胞浸潤,對照組孕鼠胎盤結(jié)構(gòu)清晰,無中性粒細(xì)胞浸潤等炎癥反應(yīng)。3.免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示,模型組、干預(yù)組所產(chǎn)大鼠腦組織內(nèi)OX42及pEGFR標(biāo)記陽性細(xì)胞表達(dá)量多于對照組所產(chǎn)新生大鼠,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；模型組OX42及pEGFR陽性表達(dá)量明顯強(qiáng)于干預(yù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。組內(nèi)比較,模型組3天組及5天組與1天組相比,OX42及pEGFR陽性表達(dá)量相對多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；模型組3天組與5天組相比,OX42及pEGFR陽性表達(dá)量相當(dāng),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而干預(yù)組及對照組組內(nèi)對比,OX42及pEGFR在各時(shí)間點(diǎn)的陽性表達(dá)量無差異(P0.05)。4. ELISA法結(jié)果顯示模型組孕鼠所產(chǎn)大鼠腦組織TNF-α及IL-1β含量較干預(yù)組及對照組均明顯高(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。干預(yù)組所產(chǎn)大鼠腦內(nèi)TNF-α含量高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而干預(yù)組所產(chǎn)大鼠腦內(nèi)IL-1p含量與對照組相當(dāng),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組組內(nèi)比較,模型組3天組及5天組與1天組相比,TNF-α及IL-1p含量相對多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而3天組及5天組無差別；而干預(yù)組及對照組組內(nèi)對比,TNF-α及IL-1β含量在各時(shí)間點(diǎn)含量無差異(P0.05)。小結(jié)1.通過對模型組孕鼠所產(chǎn)大鼠體重監(jiān)測及損傷腦組織的病理學(xué)觀察證實(shí)宮內(nèi)感染孕鼠模型制作成功；2.干預(yù)組仔鼠腦組織OX42陽性小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)以及TNF-α、IL-1β的含量均低于模型組仔鼠腦組織,推測EGFR通路參與小膠質(zhì)細(xì)胞的活化過程；3.利用EGFR抑制劑C225對宮內(nèi)感染孕鼠模型進(jìn)行干預(yù)可減輕仔鼠腦組織損傷程度,起到了神經(jīng)保護(hù)作用；4. EGFR抑制劑C225可能會降低宮內(nèi)炎癥暴露后的仔鼠腦損傷的發(fā)生率。
【關(guān)鍵詞】：小膠質(zhì)細(xì)胞 表皮生長因子受體 EGFR抑制劑C225 宮內(nèi)感染 新生大鼠
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-16
• 1 材料與方法16-25
• 2 結(jié)果25-39
• 3 討論39-47
• 4 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述：小膠質(zhì)細(xì)胞在腦損傷中的研究進(jìn)展52-65
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 附錄65-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡歷69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：1015393