本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染TDP-25對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬蛋白表達(dá)及細(xì)胞活力、凋亡的影響

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【摘要】：目的:探討TDP-25對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞自噬蛋白表達(dá)及細(xì)胞活力、凋亡的影響。方法:將神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y分為3組,分別轉(zhuǎn)染質(zhì)粒GFP-N1、GFP-TDP-43和GFP-TDP-25,24 h后應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)包涵體,Western blot法檢測(cè)LC3、Beclin-1蛋白的表達(dá)情況。將SH-SY5Y細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒GFP-TDP-25后分為2組,一組加自噬抑制劑3-MA,一組不加3-MA,MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力,Annexin-V-FITC/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:GFP-N1組細(xì)胞胞質(zhì)、胞核均見(jiàn)較強(qiáng)綠色熒光信號(hào);GFP-TDP-43組較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)分布于胞核中,未見(jiàn)明顯的包涵體形成;GFP-TDP-25組可見(jiàn)較強(qiáng)的綠色熒光信號(hào)顆粒狀分布于胞質(zhì)中,形成包涵體;3組Beclin-1表達(dá)水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=192.700、247.420,P0.05),GFP-TDP-25組Beclin-1表達(dá)水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ大于GFP-TDP-43組(P0.05),后者大于GFP-N1組(P0.05)。加入3-MA后,轉(zhuǎn)染GFP-TDP-25的細(xì)胞細(xì)胞活力降低,細(xì)胞凋亡率增高(t=38.595、5.920,P0.001)。結(jié)論:TDP-25可能通過(guò)上調(diào)細(xì)胞巨自噬水平減弱其對(duì)細(xì)胞的損害。調(diào)控巨自噬水平對(duì)肌萎縮性側(cè)索硬化癥和額顳葉變性患者的病情進(jìn)展可能起到一定的延緩作用。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： TDP- 自噬 細(xì)胞活力 細(xì)胞凋亡
【基金】：鄭州市科技攻關(guān)項(xiàng)目131PLJRC675
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： TDP-43(transactive response DNA-binding pro-組,24 h后脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別轉(zhuǎn)染GFP-N1、GFP-tein of 43 000)是一種DNA和RNA結(jié)合蛋白,在心TDP-43和GFP-TDP-25,轉(zhuǎn)染24 h后每孔用40 g/L臟、腎臟、肌肉和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛表達(dá)[1],結(jié)構(gòu)多聚甲醛固定10 min,1×PBS漂洗3遍后,應(yīng)用

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 郭倩倩;劉志燕;姜麗麗;胡婷華;李東繁;劉瑩;劉夢(mèng)潔;梁璇;南克俊;;營(yíng)養(yǎng)缺乏對(duì)人肺癌細(xì)胞自噬的誘導(dǎo)作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

2 方立;王雪晶;荊婧;馬耀華;鄧文靜;張?chǎng)?滕軍放;;rhG-CSF對(duì)大鼠缺血缺氧神經(jīng)元巨自噬水平的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年06期

3 楊t熁，

本文編號(hào)：1001180