本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-210在尋常型銀屑病皮損中的表達(dá)及其對角質(zhì)形成細(xì)胞的影響

  更多相關(guān)文章： 尋常型銀屑病 皮損 miR-210 RUNX3 細(xì)胞活力 凋亡

【摘要】：目的 研究尋常型銀屑病皮損中miR-210表達(dá)變化；預(yù)測及驗證miR-210的靶基因；研究尋常型銀屑病皮損中靶基因RUNX3蛋白表達(dá)變化；研究抑制miR-210表達(dá)對HacaT細(xì)胞RUNX3蛋白的表達(dá)、細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞周期的影響。 方法 取20例尋常型銀屑病患者皮損和16例正常對照者皮膚組織,用TRIzol試劑提取總RNA,用蛋白質(zhì)抽屜試劑盒提取總蛋白,應(yīng)用Real-time PCR法對20例尋常型銀屑病患者和16例正常對照檢測miR-210的表達(dá)水平,應(yīng)用western blot(?)檢測蛋白表達(dá)水平。運用Mirbase/Targetscans/PicTar等靶基因預(yù)測軟件查找miR-210可能的靶基因,篩選出與尋常型銀屑病發(fā)病過程密切相關(guān)的基因作為候選靶基因,我們選定RUNX3為靶基因。構(gòu)建RUNX3野生型(RUNX3WT-luciferase)和突變型(RUNX3Mut-luciferase)熒光素酶報告基因,與miR-210模擬物(miR-210mimic)和陰性對照(mimic control)用脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染至HacaT細(xì)胞,轉(zhuǎn)染48小時后收集細(xì)胞,運用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng),以海腎熒光素酶作為內(nèi)參照,檢測螢火蟲熒光素酶的活性,在HacaT細(xì)胞中驗證miR-210是否調(diào)控RUNX3表達(dá)。使用miR-210抑制物(miR-210inhibitor)和陰性對照(miR-210inhibitor control),脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HacaT細(xì)胞,采用Real-time PCR法檢測轉(zhuǎn)染后miR-210的表達(dá),采用Western blot法檢測RUNX3蛋白表達(dá)水平,MTT法檢測細(xì)胞活力,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。 結(jié)果 1.Real-time PCR結(jié)果顯示：miR-210在尋常型銀屑病患者組皮損中表達(dá)較正常對照組顯著降低(p0.05)。western blot檢測結(jié)果顯示：相對于正常對照組,尋常型銀屑病組皮損中RUNX3的蛋白表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。尋常型銀屑病皮損中miR-210表達(dá)水平與RUNX3蛋白表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.849,p=0.002)。 2.在HacaT細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染]miR-210mimic或miR-210mimic control與RUNX3基因3'-UTR野生型報告載體(RUNX3WT-luciferase)或突變型報告載體(RUNX3Mut-luciferase),熒光素酶報告基因檢測顯示：與共轉(zhuǎn)染miR-210mimic control和RUNX3WT-luciferase組相比,共轉(zhuǎn)染miR-210mimic和RUNX3WT-luciferase組熒光素酶活性被顯著抑制(p0.05),而當(dāng)RUNX3-3'-UTR突變修飾后(RUNX3Mut-luciferase),熒光素酶活性無顯著改變(P0.05)。 3.轉(zhuǎn)染miR-210inhibitor的HacaT細(xì)胞相對于轉(zhuǎn)染miR-210inibitor control組miR-210表達(dá)水平降低,RUNX3蛋白表達(dá)水平升高,差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞增殖活力明顯增加,凋亡水平下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),細(xì)胞周期各期無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論 1.尋常型銀屑病患者皮損中miR-210表達(dá)降低。 2.RUNX3為miR-210的靶基因,miR-210通過作用于RUNX33'-UTR區(qū)抑制報告基因表達(dá),miR-210通過與靶基因RUNX3結(jié)合影響RUNX3蛋白表達(dá)水平。 3.HacaT細(xì)胞中miR-210表達(dá)水平降低導(dǎo)致細(xì)胞活力增加,凋亡減少,細(xì)胞周期無改變。
【關(guān)鍵詞】：尋常型銀屑病 皮損 miR-210 RUNX3 細(xì)胞活力 凋亡
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 目錄11-12
• 縮略詞表12-13
• 第一章 前言13-15
• 第二章 材料與方法15-38
• 1. 研究對象15-16
• 1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)15
• 1.2 PASI評分15-16
• 2. 主要儀器設(shè)備及試劑16-19
• 2.1 主要實驗儀器16-17
• 2.2 主要試劑及耗材17-18
• 2.3 其他常用試劑18
• 2.4 質(zhì)粒準(zhǔn)備18-19
• 3. 實驗方法19-37
• 3.1 尋常型銀屑病皮損和健康對照皮膚組織中miR-210表達(dá)水平的研究19-22
• 3.2 miR-210靶基因的預(yù)測和驗證22-28
• 3.3 miR-210對靶基因及HacaT細(xì)胞的影響28-37
• 4. 統(tǒng)計學(xué)方法37-38
• 第三章 結(jié)果38-52
• 第四章 討論52-55
• 第五章 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 綜述60-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 在讀期間發(fā)表論文情況68-69
• 致謝69

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：772568