本文關(guān)鍵詞：白色海綿狀斑痣—家系角蛋白13基因突變位點(diǎn)研究

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【摘要】：目的:尋找白色海綿狀斑痣(white sponge nevus,WSN)家系角蛋白K13(keratin 13,K13或KRT13)基因突變,研究角蛋白13基因(k13)突變位點(diǎn)對(duì)K13在組織與細(xì)胞中表達(dá)水平的影響。方法:收集一個(gè)WSN家系,此家系現(xiàn)存9人,WSN患者2人。抽取該家系中5人外周靜脈血各5ml作為實(shí)驗(yàn)組,另抽取3名健康人外周靜脈血各5ml作為對(duì)照組,經(jīng)過PCR擴(kuò)增后基因組測(cè)序,以NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)人標(biāo)準(zhǔn)堿基序列作對(duì)比,分析基因突變位點(diǎn)。應(yīng)用免疫組化技術(shù),檢測(cè)該家系中患者口腔黏膜組織中K13表達(dá)水平,以人正�？谇火つそM織、口腔白斑組織做對(duì)照,進(jìn)行分析對(duì)比。以RNAi慢病毒為工具,針對(duì)k13基因構(gòu)建突變載體,感染人永生化表皮細(xì)胞(HaCaT),構(gòu)建角蛋白k13基因敲減與角蛋白k13基因c.T3222C(p.L409P)突變細(xì)胞模型,和未經(jīng)處理的人永生化表皮細(xì)胞做對(duì)照,運(yùn)用WB技術(shù)檢測(cè)該模型細(xì)胞中角蛋白K13的表達(dá)水平,運(yùn)用MTT細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)模型細(xì)胞的增殖效率。結(jié)果:WSN患者與正常人群DNA序列分析發(fā)現(xiàn)10個(gè)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP),經(jīng)家系分析及對(duì)照組分析初步將c.T3222C(p.L409P)確定為致病基因。該家系中2例患者口腔黏膜組織角蛋白K13在棘細(xì)胞層表達(dá)水平較正常人降低(p0.05)。細(xì)胞模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)中,k13基因敲減模型細(xì)胞中角蛋白K13無表達(dá),k13基因c.T3222C(p.L409P)突變細(xì)胞模型中角蛋白K13表達(dá)水平較空白對(duì)照組降低。MTT細(xì)胞檢測(cè)表明,兩組模型中細(xì)胞的增殖效率均較空白對(duì)照組提高。證實(shí)k13基因c.T3222C(p.L409P)突變是導(dǎo)致WSN的原因。結(jié)論:本研究所收集的WSN家系患者k4、k13基因存在10個(gè)單核苷酸多態(tài)性,其中k13基因c.T3222C(p.L409P)為致病基因。細(xì)胞水平研究顯示W(wǎng)SN患者k13基因突變與其口腔黏膜上皮角蛋白表達(dá)水平降低、細(xì)胞增殖效率提高的關(guān)系,同時(shí)解釋了WSN患者口腔黏膜出現(xiàn)增厚的白色海綿狀斑塊的臨床現(xiàn)象。這一發(fā)現(xiàn)增加了k13的基因突變譜。
【關(guān)鍵詞】：白色海綿狀斑痣 基因突變 角蛋白13
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R758.51
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-14
• 材料和方法14-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器14-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-28
• 2.1 病例選擇17-21
• 2.2 基因組DNA抽提和PCR測(cè)序21-23
• 2.3 WSN 組織中角蛋白 K13 免疫組化檢測(cè)23-24
• 2.4 k13 基因突變細(xì)胞模型實(shí)驗(yàn)24-28
• 結(jié)果28-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 附錄1 白色海綿狀斑痣患者角蛋白k 13 基因突變 ( 綜述 )44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 致謝50-51

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1 林端嫻;吳蘭雁;張琳;周紅梅;;同胞兄弟白色海綿狀斑痣的不同臨床體征[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2013年04期

2 孫開華，，吳奇光，王晶，朱曉濱;口腔粘膜白色海綿狀斑痣的超微結(jié)構(gòu)觀察[J];中華口腔醫(yī)學(xué)雜志;1995年03期

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 秦家佳;白色海綿狀斑痣—家系角蛋白13基因突變位點(diǎn)研究[D];上海交通大學(xué);2015年

本文編號(hào)：720463