本文關(guān)鍵詞：4.1B對小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

  更多相關(guān)文章： 腫瘤轉(zhuǎn)移 黑色素瘤 4.1B 增殖 EMT

【摘要】：研究目的目前,黑色素瘤已經(jīng)成為全球發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤之一。腫瘤轉(zhuǎn)移導(dǎo)致傳統(tǒng)治療方法不能取得理想的效果,因此,有效抑制腫瘤轉(zhuǎn)移可以改善黑色素瘤的治療效果。EMT在腫瘤轉(zhuǎn)移、干細(xì)胞性、耐藥性中發(fā)揮重要作用,因此尋找EMT相關(guān)的負(fù)調(diào)控因子,對惡性腫瘤的預(yù)防和預(yù)后都具有重要意義。蛋白4.1B是一種骨架蛋白,已有研究表明在多種腫瘤中蛋白4.1B呈現(xiàn)不同程度的表達(dá)下調(diào)或缺失,可能是一種潛在的腫瘤抑制因子。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)4.1B在B16和B16-F10細(xì)胞中均呈現(xiàn)表達(dá)缺失,構(gòu)建pEGFP-N1-EPB41L3真核表達(dá)載體,探究4.1B在黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用。將外源性的EPB41L3基因轉(zhuǎn)染4.1B缺失表達(dá)的黑色素瘤細(xì)胞系,探討其對細(xì)胞的增殖和遷移能力的影響,以及在B16皮下移植瘤和B16-F10肺轉(zhuǎn)移中的作用,并初步探索4.1B調(diào)控黑色素瘤細(xì)胞EMT的分子機(jī)制。方法1.PCR和western blot技術(shù)篩選蛋白4.1家族在黑色素瘤細(xì)胞B16和B16-F10中的表達(dá)情況;熒光定量PCR進(jìn)一步檢測EPB41L3基因的表達(dá)情況。2.構(gòu)建pEGFP-N1-EPB41L3真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染B16和B16-F10細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察蛋白4.1B在黑色素瘤細(xì)胞內(nèi)的定位情況,PCR、熒光定量PCR以及western blot實(shí)驗(yàn)方法檢測蛋白4.1B的表達(dá)情況。3.MTT法檢測蛋白4.1B對黑色素瘤細(xì)胞體外增殖的影響,細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測蛋白4.1B對其遷移能力的影響。4.熒光定量PCR和western blot技術(shù)檢測EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、vi mentin、MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況。熒光定量PCR檢測啟動EMT相關(guān)的T GF-β家族成員、轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug、Twist 2基因的表達(dá)量。5.熒光定量PCR技術(shù)檢測蛋白4.1B對integrinβ1基因水平表達(dá)量的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白4.1B對細(xì)胞表面integrinβ1的表達(dá)以及活化的影響。6.B16皮下移植瘤模型以及B16-F10肺轉(zhuǎn)移模型評估蛋白4.1B的抑癌功能。結(jié)果1.小鼠黑色素瘤細(xì)胞系B16和B16-F10中,4.1R、4.1N、4.1G在核酸和蛋白水平均正常表達(dá),但是蛋白4.1B在兩種細(xì)胞中都呈現(xiàn)表達(dá)缺失。2.成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pEGFP-N1-EPB41L3,EPB41L3基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞后熒光顯微鏡鏡檢,可觀察到綠色熒光。PCR、熒光定量PCR和western blot技術(shù)檢測結(jié)果顯示EPB41L3基因轉(zhuǎn)染后細(xì)胞均表達(dá)4.1B。3.蛋白4.1B對黑色素瘤細(xì)胞系B16和B16-F10細(xì)胞的體外增殖以及遷移具有抑制作用。4.蛋白4.1B表達(dá)后,上皮型標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)出現(xiàn)明顯上調(diào),間充質(zhì)型標(biāo)志物vimentin、MMP-9的表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)。蛋白4.1B可能通過抑制轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug、Twist 2基因的表達(dá)抑制EMT。5.蛋白4.1B對細(xì)胞表面integrinβ1的表達(dá)和活化沒有影響。6.蛋白4.1B對B16皮下移植瘤和B16-F10肺轉(zhuǎn)移具有一定的抑制作用。結(jié)論蛋白4.1B對B16和B16-F10細(xì)胞的增殖和遷移具有抑制作用,并且能夠通過下調(diào)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug、Twist 2的表達(dá)水平,調(diào)節(jié)EMT相關(guān)標(biāo)志物E-cadherin、vimentin、MMP-9的表達(dá),從而抑制黑色素瘤細(xì)胞EMT,抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了蛋白4.1B能夠顯著性抑制B16皮下移植瘤的生長,對小鼠肺轉(zhuǎn)移模型中B16-F10的肺轉(zhuǎn)移也具有一定的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤轉(zhuǎn)移 黑色素瘤 4.1B 增殖 EMT
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-14
• 常見英文縮寫一覽表（文中先后順序）14-16
• 第一章 引言16-23
• 1.1 黑色素瘤16
• 1.2 腫瘤轉(zhuǎn)移16-17
• 1.3 上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化17-18
• 1.4 蛋白 4.1B18-20
• 1.5 研究目的與意義20
• 1.6 研究內(nèi)容與方法20-22
• 1.7 技術(shù)路線22-23
• 第二章 蛋白 4.1 家族在小鼠黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)篩選23-38
• 2.1 材料23-26
• 2.1.1 細(xì)胞株23
• 2.1.2 主要試劑23-24
• 2.1.3 主要儀器24-25
• 2.1.4 常用試劑配制25-26
• 2.2 方法26-35
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)方法26-28
• 2.2.2 PCR法檢測蛋白 4.1 家族基因的表達(dá)情況28-30
• 2.2.3 Western blot技術(shù)檢測蛋白 4.1 家族的表達(dá)30-33
• 2.2.4 熒光定量PCR檢測EPB41L3基因的表達(dá)33-35
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35
• 2.3 結(jié)果35-37
• 2.3.1 PCR法初步篩選蛋白 4.1 家族的表達(dá)35-36
• 2.3.2 Western blot法檢測蛋白 4.1 家族的表達(dá)情況36-37
• 2.3.3 熒光定量PCR法檢測EPB41L3基因的表達(dá)情況37
• 2.4 討論37-38
• 第三章 真核表達(dá)載體p EGFP-N1-EPB41L3的構(gòu)建和表達(dá)38-56
• 3.1 材料38-40
• 3.1.1 細(xì)胞株38
• 3.1.2 主要試劑38-39
• 3.1.3 主要儀器39-40
• 3.1.4 常用試劑配制40
• 3.2 方法40-46
• 3.2.1 小鼠EPB41L3基因的擴(kuò)增40-41
• 3.2.2 真核表達(dá)載體p EGFP-N1-EPB41L3的構(gòu)建41-43
• 3.2.3 熒光顯微鏡檢測 4.1B融合蛋白的表達(dá)43-44
• 3.2.4 PCR檢測EPB41L3的表達(dá)44
• 3.2.5 熒光定量PCR法檢測EPB41L3基因的表達(dá)情況44-45
• 3.2.6 Western blot法檢測蛋白 4.1B45
• 3.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45-46
• 3.3 結(jié)果46-55
• 3.3.1 小鼠EPB41L3基因的擴(kuò)增結(jié)果46
• 3.3.2 繪制小鼠EPB41L3基因的外顯子圖譜46-47
• 3.3.3 真核表達(dá)載體p EGFP-N1-EPB41L3的鑒定47-50
• 3.3.4 熒光顯微鏡觀察 4.1B在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況50-52
• 3.3.5 PCR檢測EPB41L3基因的表達(dá)情況52
• 3.3.6 熒光定量PCR檢測EPB41L3基因的表達(dá)情況52-53
• 3.3.7 Western blot法檢測B16和B16-F10細(xì)胞表達(dá)蛋白 4.1B53-55
• 3.4 討論55-56
• 第四章 4.1B對B16、B16-F10細(xì)胞體外增殖和遷移的影響56-63
• 4.1 材料56
• 4.1.1 細(xì)胞株56
• 4.1.2 主要試劑56
• 4.1.3 主要儀器56
• 4.1.4 常用試劑配制56
• 4.2 方法56-59
• 4.2.1 MMT法檢測蛋白 4.1B抑制B16的體外增殖56-57
• 4.2.2 MTT法檢測蛋白 4.1B抑制B16-F10的體外增殖57-58
• 4.2.3 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測蛋白 4.1B對細(xì)胞遷移的影響58
• 4.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析58-59
• 4.3 結(jié)果59-62
• 4.3.1 蛋白 4.1B抑制B16細(xì)胞的體外增殖59-60
• 4.3.2 蛋白 4.1B抑制B16-F10細(xì)胞的體外增殖60-61
• 4.3.3 蛋白 4.1B抑制黑色素瘤細(xì)胞系B16、B16-F10的遷移61-62
• 4.4 討論62-63
• 第五章 4.1B抑制黑色素瘤細(xì)胞EMT的機(jī)制研究63-75
• 5.1 材料63-64
• 5.1.1 細(xì)胞株63
• 5.1.2 主要試劑63-64
• 5.1.3 主要儀器64
• 5.1.4 常用試劑配制64
• 5.2 方法64-67
• 5.2.1 熒光定量PCR檢測EMT相關(guān)基因的表達(dá)64-65
• 5.2.2 Western blot法檢測EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)情況65-66
• 5.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測integrin β1 的表達(dá)和活化66-67
• 5.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析67
• 5.3 結(jié)果67-73
• 5.3.1 蛋白 4.1B影響EMT相關(guān)marker的表達(dá)67-68
• 5.3.2 蛋白 4.1B對TGF-β 家族成員的影響68-69
• 5.3.3 蛋白 4.1B抑制驅(qū)動EMT的相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子69-70
• 5.3.4 蛋白 4.1B對MMP-2 和MMP-9 的影響70-71
• 5.3.5 蛋白 4.1B對integrinβ1 的影響71-73
• 5.4 討論73-75
• 第六章 小鼠皮下移植瘤和肺轉(zhuǎn)移動物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 4.1B功能75-80
• 6.1 材料75-76
• 6.1.1 細(xì)胞株75
• 6.1.2 主要試劑75
• 6.1.3 主要儀器75
• 6.1.4 常用試劑配制75-76
• 6.1.5 實(shí)驗(yàn)動物76
• 6.2 方法76-77
• 6.2.1 蛋白 4.1B對B16皮下移植瘤的影響76
• 6.2.2 蛋白 4.1B對B16-F10肺轉(zhuǎn)移的影響76-77
• 6.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析77
• 6.3 結(jié)果77-79
• 6.3.1 蛋白 4.1B對B16皮下移植瘤的影響77-78
• 6.3.2 蛋白 4.1B對B16-F10肺轉(zhuǎn)移的影響78-79
• 6.4 討論79-80
• 第七章 全文討論80-82
• 全文結(jié)論82-83
• 參考文獻(xiàn)83-88
• 個(gè)人簡歷、碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果88-89
• 致謝89

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;高溫所致黑色素瘤細(xì)胞表面變化的超微組化觀察[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1987年04期

2 楊廷桐,李紅梅,劉冬欣,方偉崗,鄭杰,吳秉銓;具有不同成瘤和轉(zhuǎn)移能力的人黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為觀察[J];中華病理學(xué)雜志;2000年04期

3 白玲,陳保生;穩(wěn)定表達(dá)組織因子的黑色素瘤細(xì)胞中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的誘導(dǎo)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2003年01期

4 肖國宏;羅成群;唐國茂;周建大;;人內(nèi)皮抑素基因轉(zhuǎn)染原代成人黑色素瘤細(xì)胞[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

5 李鳳云;免疫RNA引起對黑色素瘤細(xì)胞的溶解[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年S1期

6 歐宜君，，鄧漪平;人Bowes黑色素瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中組織型纖溶酶原激活劑的提純[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;1994年04期

7 王亞珍;呂品田;王鳳紅;鄭振茹;;赤芍總苷聯(lián)合卡鉑對黑色素瘤細(xì)胞生長的抑制及相關(guān)機(jī)制研究[J];醫(yī)學(xué)動物防制;2011年12期

8 楊方黎;唐均英;米彥;姚陳果;王劍飛;;納秒級陡脈沖電場誘導(dǎo)人黑色素瘤細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤凋亡作用及機(jī)制[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年13期

9 李鳳云;黑色素瘤細(xì)胞浸出物在試管內(nèi)抑制淋巴細(xì)胞對瘤細(xì)胞的毒性作用[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1978年S1期

10 羅惠先,劉云華,余達(dá)經(jīng),周潔萍;高溫所致黑色素瘤細(xì)胞的生長及其表面變化的掃描電鏡觀察[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1990年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 桑紅;;積雪甙對黑色素瘤細(xì)胞生長影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2002中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2002年

2 林治榮;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王衛(wèi)華;鄭士杰;;不同融合基因修飾的黑色素瘤細(xì)胞體外目的基因表達(dá)及體內(nèi)致瘤性的研究[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會論文摘要集（第二部分）[C];2002年

3 向青;徐梅;肖誠;李紅艷;徐波;郭宇鵬;耿傳營;潘琳;房青;唐勁天;;空間環(huán)境對黑色素瘤細(xì)胞基因表達(dá)的影響[A];中國空間科學(xué)學(xué)會第16屆空間生命學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

4 陳炳卿;薛英本;薛英威;劉瑞海;;共軛亞油酸對鼠黑色素瘤細(xì)胞與轉(zhuǎn)移相關(guān)的細(xì)胞行為的影響[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

5 王淙;李永梅;郭劉斌;馬俊遠(yuǎn);姜麗平;;四種常用美白成分對皮膚黑色素瘤細(xì)胞的作用[A];2013醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十三屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2013年

6 林治榮;沈斌;冉胤威;杜俊蓉;王衛(wèi)華;鄭士杰;;不同融合基因修飾的黑色素瘤細(xì)胞體外目的基因表達(dá)及體內(nèi)致瘤性的研究[A];中國藥理學(xué)會第八次全國代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

7 陳瑾;;DKK1對黑色素瘤細(xì)胞侵襲能力的抑制作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

8 宋旭;;長非編碼RNA參與腫瘤發(fā)生發(fā)展過程[A];生命的分子機(jī)器及其調(diào)控網(wǎng)絡(luò)——2012年全國生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要集[C];2012年

9 孫保存;倪春生;孫濤;趙秀蘭;郄碩;劉易欣;王星輝;古強(qiáng);戚紅;;小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與黑色素瘤細(xì)胞B16相互作用的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2007年學(xué)術(shù)年會暨第九屆全國病理大會論文匯編[C];2007年

10 向敏;顧振綸;梁中琴;周文軒;郭次儀;;熊果酸對小鼠B16黑色素瘤細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 通訊員 李靜 記者 馬躍華;黑色素瘤細(xì)胞生長可被抑制[N];光明日報(bào);2013年

2 王小舒;未來治療皮癌只需涂抹乳霜[N];北京日報(bào);2012年

3 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科教授 粟秀初;腦瘤為何被誤診為腦膜炎[N];健康報(bào);2014年

4 ;良好生活方式是遠(yuǎn)離癌癥的關(guān)鍵[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王寅;5-脂氧合酶抑制劑對黑色素瘤細(xì)胞a375轉(zhuǎn)移的抑制作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 李群;Survivin的下調(diào)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的黑色素瘤細(xì)胞凋亡抗性的影響機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

3 趙萬洲;乙酰乳香酸（BC-4）抗腫瘤作用的分子機(jī)制及黑色素瘤細(xì)胞基本生物學(xué)特性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

4 趙小瑜;rhIL-24對A375黑色素瘤細(xì)胞體內(nèi)外抗腫瘤效應(yīng)及其分子機(jī)理的研究[D];蘇州大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王曉利;EPS-8沉默和過表達(dá)對黑色素瘤細(xì)胞A375生物學(xué)行為的影響[D];鄭州大學(xué);2015年

2 陳晨;6-姜烯酚通過下調(diào)PKM2的表達(dá)抑制黑色素瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 宋登燕;miR-106b-5p抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖功能的初步研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

4 殷娜;重樓皂苷Ⅰ對人黑色素瘤細(xì)胞的增殖抑制作用的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓健;干擾素-γ對黑色素瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 宮美維;海洋真菌來源Dicitrinone B對人黑色素瘤細(xì)胞A375的抗腫瘤活性及機(jī)制研究[D];福州大學(xué);2014年

7 張婧思;間充質(zhì)干細(xì)胞對黑色素瘤細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制的研究[D];北京交通大學(xué);2016年

8 李延峰;靶向eEF-2K對黑色素瘤細(xì)胞Vemurafenib治療敏感性的影響及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2016年

9 門穎麗;4.1B對小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

10 周憶新;裂解型基因重組腺病毒對人黑色素瘤細(xì)胞及小鼠肝癌抑瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2007年

本文編號：525962