本文關(guān)鍵詞：白色念珠菌菌絲壁蛋白1的N端片段的克隆及原核表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 隨著糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑和廣譜抗菌藥物、介入性治療等診療技術(shù)的廣泛應(yīng)用，以及艾滋病患者的增加，真菌感染的發(fā)病率日趨升高。調(diào)查顯示侵襲性白色念珠菌病占所有深部真菌感染的比例一直高達(dá)70%-85%。盡管有抗真菌藥物的治療，但由于早期診斷困難，侵襲性白色念珠菌病往往預(yù)后極差。白色念珠菌是一種既能以酵母形態(tài)又能以菌絲形態(tài)生長的真菌，產(chǎn)生菌絲是其具有致病力的一種表現(xiàn)，Staab等首先發(fā)現(xiàn)白色念珠菌菌絲壁蛋白1（hyphal wall protein1, Hwp1），研究顯示，Hwp1具有菌絲特異性及抗原性和種屬特異性特點(diǎn)，使其在侵襲性念珠菌病診斷中可能發(fā)揮重要作用。本研究擬構(gòu)建白色念珠菌的菌絲壁蛋白1(Hwp1) N端片段的重組質(zhì)粒，在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白。為后續(xù)探討Hwp1抗原、抗體系統(tǒng)在診斷侵襲性白念珠菌的作用和地位奠定基礎(chǔ)。 方法 1.目的基因的制備：使用酵母基因組提取試劑盒白色念珠菌基因組DNA，經(jīng)PCR方法擴(kuò)增獲得目的基因。 2.目的基因的克�。簩⒛康幕蚩寺≈羛MD18-T載體上，通過藍(lán)白篩選法獲得克隆成功的質(zhì)粒，經(jīng)PCR法及雙酶切法鑒定目的基因后測序進(jìn)行檢驗。 3.重組Hwp1的N端片段的誘導(dǎo)表達(dá)：將目的基因連接至表達(dá)載體pET28a(+)，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中，提取質(zhì)粒進(jìn)行PCR、雙酶切法鑒定，經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷酶(IPTG)誘導(dǎo)、超聲裂解菌體、SDS-PAGE電泳觀察結(jié)果，獲得重組表達(dá)的目的蛋白。 結(jié)果 1.經(jīng)PCR方法克隆出全長為500bp的Hwp1基因的N端的核苷酸序列與GenBank中公布的序列基本同源。 2.成功制備了重組質(zhì)粒pMD18-T-Hwp1及pET28a(+)-Hwp1，PCR及雙酶切法鑒定結(jié)果。 3.構(gòu)建了含重組質(zhì)粒pET28a(+)-Hwp1的大腸桿菌工程菌，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)能高效表達(dá)目的蛋白。 結(jié)論 1.成功構(gòu)建了白色念珠菌基因Hwp1基因N端序列的原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a(+)-Hwp1。 2．Hwp1基因N端序列的原核表達(dá)質(zhì)粒在大腸桿菌BL-21中成功表達(dá)融合蛋白，為進(jìn)一步研究其在診斷白色念珠菌病中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：白色念珠菌 菌絲壁蛋白1 克隆 表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R756.6;Q78
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 附錄35-36
• 個人簡歷35
• 發(fā)表論文35
• 在讀期間獲榮譽(yù)35-36
• 致謝36-37
• 綜述37-46
• 參考文獻(xiàn)43-46

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 程幫照;余為一;周麗莎;謝金文;程寶艷;;傳染性法氏囊炎病毒部分VP2基因的克隆與原核表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2008年02期

2 王彥紅;馬懷良;胡順林;仇旭升;劉秀梵;;雞痘病毒ORF073基因克隆及原核表達(dá)[J];揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版);2006年04期

3 劉嵐;蘭英華;李用國;;腸出血性大腸埃希菌O157∶H7外膜蛋白A的表達(dá)、鑒定和純化[J];中國病原生物學(xué)雜志;2008年07期

4 白雪;沈景林;萬家余;李吉平;高宏偉;;梅花鹿正常朊蛋白特異性片段的高效表達(dá)和純化[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2009年01期

5 王軼,羅勤,吳俊,郭經(jīng)宇,楊毅,李旭鋒;甘藍(lán)型油菜植物防御素基因的克隆與原核表達(dá)[J];四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年04期

6 孫漢堂;吳補(bǔ)領(lǐng);郭希民;孫葉芳;楊聚才;蒲勤;;變形鏈球菌葡聚糖結(jié)合蛋白C基因特異片段的克隆和在大腸桿菌中的表達(dá)[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年09期

7 杜俊波;席德慧;王尚英;馮鴻;孫歆;袁澍;王建輝;劉自禮;薛立微;林宏輝;;青稞脫水素基因dhn4的克隆與原核表達(dá)[J];四川大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年02期

8 牟靜;張文;侯加法;沈權(quán);楊志彪;崔立;華修國;;基因4型HEV上海株ORF_2編碼蛋白表達(dá)及其抗原性分析[J];畜牧與獸醫(yī);2008年05期

9 楊學(xué)山;胡永浩;逯忠新;;豬胸膜肺炎放線桿菌外膜脂蛋白基因的原核表達(dá)[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2007年04期

10 閻斌倫;許冰;董丹;王洪斌;;鰻弧菌溶血毒素基因vah4的克隆及表達(dá)[J];生物技術(shù);2009年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 辛英豪;高繼明;劉標(biāo);李莎莎;姜世金;;Ⅰ型鴨病毒性肝炎VP1基因的克隆與原核表達(dá)[A];山東畜牧獸醫(yī)學(xué)會禽病學(xué)專業(yè)委員會第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

2 宋艷;柳學(xué)廣;朱曉蘇;徐麗;司馬楊虎;徐世清;;野桑蠶Bmand-Sxl基因的克隆及原核表達(dá)[A];中國蠶學(xué)會第六屆青年學(xué)術(shù)研討會論文集（1）[C];2009年

3 焦石;賈立軍;薛書江;劉明明;黃國明;張守發(fā);;牛源犬新孢子蟲MAG1基因的克隆及原核表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜寄生蟲學(xué)分會第六次代表大會暨第十一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

4 孟先明;潘艷;蔡新斌;陸專靈;梁湘;唐海波;楊劍;張紅普;羅廷榮;;狂犬病毒ERA株基質(zhì)蛋白的原核表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備[A];2010全國狂犬病防控高層論壇論文集[C];2010年

5 趙剛;李剛;范曉娟;;狂犬病病毒P基因的原核表達(dá)及間接ELISA方法的應(yīng)用[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

6 覃燁;許強(qiáng)華;;鹽度脅迫下三疣梭子蟹熱休克蛋白HSP90a的原核表達(dá)[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

7 路立婷;程安春;汪銘書;蔣金鳳;朱德康;賈仁勇;羅啟慧;陳孝躍;;鴨瘟病毒UL46基因主要抗原域的克隆、原核表達(dá)及其產(chǎn)物的抗原性分析[A];第四屆第十次全國學(xué)術(shù)研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（下冊）[C];2010年

8 李凱;高宏雷;祁小樂;高玉龍;高立;鄧小蕓;王笑梅;;禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒env基因的原核表達(dá)及其多克隆抗體制備[A];全球肉雞產(chǎn)業(yè)論壇暨第二屆中國白羽肉雞產(chǎn)業(yè)發(fā)展大會會刊[C];2010年

9 杜武英;戴佳琳;黃江;胡旭初;徐勁;余新炳;吳璇;;亞洲牛帶絳蟲稀醇酶基因的原核表達(dá)及組織定位研究[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 羅丹丹;程安春;汪銘書;;鴨瘟病毒UL47基因主要抗原域的原核表達(dá)及抗體制備[A];第四屆第十次全國學(xué)術(shù)研討會暨動物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（下冊）[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 本報記者 楊筱X;花季女孩張蕾的幾個人生片段[N];貴州日報;2010年

2 華東師范大學(xué)教授、博士生導(dǎo)師 楊奎松;關(guān)于朝鮮戰(zhàn)爭的六個片段[N];深圳特區(qū)報;2010年

3 韓世煒;生物領(lǐng)域?qū)嵱眯耘袛嗟奶厥馇樾蝃N];中國知識產(chǎn)權(quán)報;2011年

4 吳一福;我學(xué)者首次發(fā)現(xiàn)抗HBV末端蛋白雜交瘤細(xì)胞系[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 本報記者 談媛;記憶片段里的時代聲音[N];中國氣象報;2009年

6 記者　耿建擴(kuò) 藺玉堂;“表達(dá)凝血八因子新的重組質(zhì)�！背晒ρ兄芠N];光明日報;2006年

7 本報記者 寧新路;30億后面的精彩片段[N];中國財經(jīng)報;2010年

8 紹興縣柯橋中學(xué) 陶志堅;限制性核酸內(nèi)切酶相關(guān)知識總結(jié)[N];學(xué)知報;2011年

9 本報記者 劉佳;點(diǎn)滴回憶 溫暖我心[N];天津教育報;2010年

10 申國寧;武瑞國：多彩人生的三個片段[N];檢察日報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃小波;豬傳染性胃腸炎檢測基因芯片與豬傳染性胃腸炎病毒SC-H株N基因表達(dá)研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

2 戴銀;雞MHCⅠ類分子結(jié)構(gòu)與抗病性關(guān)系的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 陳立志;牛源致病性壞死梭桿菌分離鑒定及其白細(xì)胞毒素免疫特性研究[D];吉林大學(xué);2008年

4 趙宇軍;豬戊型肝炎病毒結(jié)構(gòu)蛋白基因表達(dá)及其基因特異性噬菌體展示肽庫構(gòu)建[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2005年

5 韓俊友;牛蛙皮膚抗菌肽分離純化、基因克隆表達(dá)及生物學(xué)特性的研究[D];吉林大學(xué);2007年

6 李靜;海洋酵母菌Metschnikowia reukaufii W6b酸性蛋白酶的生產(chǎn)、基因克隆和表達(dá)的研究[D];中國海洋大學(xué);2008年

7 游向榮;龍眼成花轉(zhuǎn)變與成花逆轉(zhuǎn)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2009年

8 許波;抗菌/抗內(nèi)毒素多肽葛佬素的表達(dá)、純化及其生物活性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 孫照剛;傳染性喉氣管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表達(dá)、蛋白功能研究以及缺失該基因病毒的重組[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 鄭銀英;蘋果莖溝病毒和褪綠葉斑病毒分子變異研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙秀新;牛消化道Ⅰ型肽載體（bPepTⅠ）部分序列的克隆、表達(dá)及多克隆抗體的制備[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 丁彪;小鼠IFRG15基因在植入前胚胎及原核表達(dá)的研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 劉志強(qiáng);抗Cyclin D1人源胞內(nèi)單鏈抗體的原核表達(dá)與鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

4 王健;HLA-A33分子的體外表達(dá)及鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 歐陽錦鳳;人博卡病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1u，，非結(jié)構(gòu)蛋白ORFx和NP1的原核表達(dá)與抗體制備[D];華中師范大學(xué);2011年

6 李會娟;家蠶轉(zhuǎn)膠蛋白基因的原核表達(dá)及功能的初步研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

7 馬一君;A型流感病毒核蛋白基因的克隆與表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2005年

8 羅丹丹;鴨瘟病毒UL47基因轉(zhuǎn)錄時相分析及主要抗原域的原核表達(dá)和抗體制備[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 吳s

本文編號：461823