發(fā)布時(shí)間：2017-06-20 16:02

  本文關(guān)鍵詞：miR-27a在WM239細(xì)胞中的表達(dá)及對其生物學(xué)特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的本研究主要通過構(gòu)建miR-27a模擬物和抑制物,觀察miR-27a對黑色素瘤WM239細(xì)胞增殖和耐藥的影響,并初步探討其機(jī)制。方法將mi R-27a模擬物、抑制物及其陰性對照轉(zhuǎn)染W(wǎng)M239細(xì)胞:熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)檢測miRNA-27a的相對表達(dá)水平,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測WM239細(xì)胞增殖,平板克隆試驗(yàn)檢測細(xì)胞克隆能力,流式細(xì)胞儀檢測WM239細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測抑癌基因p53、細(xì)胞周期基因cyclin D1、耐藥基因MDR1、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP2及MMP9、mi R-27a靶基因Sp1、ZBTB10及E2F7的表達(dá)變化,WB檢測增殖相關(guān)分子細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)、caspase-3和耐藥蛋白P糖蛋白(P-gp)的表達(dá)變化。結(jié)果細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率為80%~90%。轉(zhuǎn)染miR-27a模擬物后,細(xì)胞內(nèi)miR-27a表達(dá)量明顯上升(2-??CT值為26.98±0.01,F=6078713.38,P0.05);轉(zhuǎn)染miR-27a抑制物后,細(xì)胞中mi R-27a的表達(dá)量下降(2-??CT值為0.96±0.02),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。轉(zhuǎn)染miR-27a模擬物后,細(xì)胞增殖受到明顯抑制,與正常對照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=129.56,P0.05)。miR-27a模擬物組G0-G1期的細(xì)胞比例升高(F=30.33,P0.05),S期和G2-M期細(xì)胞比例減少(F=14.98,P0.05;F=3.66,P0.05);模擬物組細(xì)胞凋亡率與正常對照組相比明顯增加(F=530.90,P0.01);而抑制物組對細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡無明顯作用,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。轉(zhuǎn)染miR-27a模擬物后能明顯抑制細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表達(dá),促進(jìn)抑癌基因p53表達(dá),并激活凋亡相關(guān)分子天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3);通過檢測相關(guān)信號通路分子的表達(dá)變化,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平下降。轉(zhuǎn)染miR-27a模擬物后能明顯增強(qiáng)WM239細(xì)胞對紫杉醇的藥物敏感性,增強(qiáng)紫杉醇的對WM239細(xì)胞的殺傷作用,這與miR-27a抑制耐藥基因MDR1及其蛋白產(chǎn)物P-gp的表達(dá)有關(guān)。mi R-27a能抑制細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)分子MMP2和MMP9的表達(dá)。通過RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染miR-27a模擬物后其靶基因特異性蛋白1(Sp1)表達(dá)下降,而鋅指和BTB結(jié)構(gòu)域蛋白10(ZBTB10)表達(dá)上升,E2F7的表達(dá)無明顯變化。結(jié)論1.mi R-27a能抑制黑色素瘤細(xì)胞WM239增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期于G0-G1期,其機(jī)制可能與cyclinD1表達(dá)下降、p53表達(dá)上調(diào)、caspase-3的活化和ERK1/2的磷酸化被抑制相關(guān);2.mi R-27a能抑制侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)分子MMP2、MMP9的表達(dá),發(fā)揮抑癌作用;3.miR-27a能增加WM239細(xì)胞對紫杉醇的藥物敏感性,其機(jī)制可能與miR-27a通過ZBTB10-Sp間接調(diào)節(jié)MDR1/P-gp的表達(dá)相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：miR-27a 黑色素瘤 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡 藥物耐受性 轉(zhuǎn)移 轉(zhuǎn)染
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-13
• 主要符號表13-14
• 第一章 緒論14-16
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)與研究方法16-26
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器16-20
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料16-19
• 2.1.2 主要儀器19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-25
• 2.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率20
• 2.2.2 MTT檢測miR-27a對WM239細(xì)胞增殖的作用20
• 2.2.3 MTT法檢測miR-27a對WM239細(xì)胞耐藥性的作用20-21
• 2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-27a對WM239細(xì)胞周期的影響21
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-27a對WM239細(xì)胞凋亡的影響21
• 2.2.6 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞的增殖能力21
• 2.2.7 mi-R-27a對細(xì)胞耐藥蛋白P-gp及相關(guān)信號通路ERK1/2 的影響21-23
• 2.2.8 RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后Sp1、ZBTB10、E2F7、cyclinD1、p53、MDR1、MMP2、MMP9的表達(dá)變化23-25
• 2.2.9 實(shí)時(shí)定量PCR檢測轉(zhuǎn)染后miR-27a的表達(dá)水平25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理25-26
• 第三章 結(jié)果26-36
• 3.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率26
• 3.2 實(shí)時(shí)熒光定量檢測轉(zhuǎn)染后miR-27a的表達(dá)26-27
• 3.3 miR-27a對WM239細(xì)胞增殖的影響27-31
• 3.3.1 MTT法檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞增殖27
• 3.3.2 平板克隆形成試驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞增殖能力27-28
• 3.3.3 流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞凋亡28-29
• 3.3.4 流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞周期29-31
• 3.4 WB檢測細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白ERK1/2、caspase-3 和耐藥蛋白P-gp的變化31-32
• 3.5 RT-PCR檢測細(xì)胞增殖相關(guān)分子p53，細(xì)胞周期相關(guān)分子cyclinD1，，多藥耐藥基因MDR1的變化32-33
• 3.6 MTT法檢測轉(zhuǎn)染后WM239細(xì)胞對藥物敏感性的變化33-34
• 3.7 RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后侵襲相關(guān)分子MMP9、MMP2的變化34
• 3.8 RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染后miR-27a靶基因Sp1、ZBTB10、E2F7的變化34-36
• 第四章 討論36-45
• 第五章 結(jié)論與展望45-46
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 綜述52-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果61-62
• 致謝62

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王東生,袁肇凱,郭志華;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年12期

2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細(xì)胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運(yùn)動(dòng)與細(xì)胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會(huì)玲,景文莉,張小紅,高維娟;細(xì)胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年04期

5 梁薇;細(xì)胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機(jī)制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細(xì)胞凋亡與細(xì)胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細(xì)胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強(qiáng);細(xì)胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細(xì)胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細(xì)胞位置的細(xì)胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)暨第九屆全國會(huì)員代表大會(huì)摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細(xì)胞凋亡及其機(jī)理的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會(huì)第三屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細(xì)胞凋亡的機(jī)制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細(xì)胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會(huì)論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運(yùn)動(dòng)中細(xì)胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2006年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對細(xì)胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學(xué)會(huì)第九屆靜電學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2000年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 商東;“細(xì)胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

2 張志軍;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日報(bào);2002年

5 李明輝;“細(xì)胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2002年

6 洪敏;細(xì)胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報(bào);2008年

7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

8 本報(bào)實(shí)習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報(bào);2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細(xì)胞和動(dòng)物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細(xì)胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡效應(yīng)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對PC3細(xì)胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細(xì)胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動(dòng)力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)子的調(diào)節(jié)及在胚腎細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對人胚腎細(xì)胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的研究[D];云南民族大學(xué);2015年

3 唐建國;視黃醇X受體出核抑制對神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細(xì)胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達(dá)抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

6 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

8 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：miR-27a在WM239細(xì)胞中的表達(dá)及對其生物學(xué)特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：466119