本文關(guān)鍵詞：馬爾尼菲青霉次級(jí)代謝產(chǎn)物對巨噬細(xì)胞功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 觀察馬爾尼菲青霉(Penicillium marneffei, PM)次級(jí)代謝產(chǎn)物對小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7形態(tài)、活力和極化功能的影響,從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)角度初步探討馬爾尼菲青霉次級(jí)代謝產(chǎn)物在病原體逃避宿主免疫防御中的作用。方法分離提取PM酵母樣細(xì)胞在DMEM液體培養(yǎng)基37℃振蕩培養(yǎng)的濾液,培養(yǎng)濾液與巨噬細(xì)胞RAW264.7共同培養(yǎng)：(1)光學(xué)顯微鏡觀察PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞生長形態(tài)的影響。(2)糖原染色(PAS染色)觀察PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞吞噬PM分生孢子能力的影響；(3)WST-8法檢測PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞的毒性及增殖影響程度；(4)Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞凋亡、壞死的影響程度；(5)ELISA法檢測PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-12、IL-10)的影響；(6)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測PM培養(yǎng)濾液對巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志CD16/32、CD206表達(dá)情況的影響。結(jié)果 (1)PM培養(yǎng)濾液作用于巨噬細(xì)胞RAW264.724 h～48 h,巨噬細(xì)胞生長密度降低,體積變大,腫脹變圓,部分胞漿內(nèi)見空泡,少許細(xì)胞崩解。(2)10%～50% PM培養(yǎng)濾液作用于巨噬細(xì)胞,24 h時(shí),實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞吞噬PM分生孢子的吞噬率(%)和吞噬指數(shù)分別為83.687±6.279,5.969±1.170；48 h時(shí),吞噬率(%)和吞噬指數(shù)分別為78.402±5.522,6.602±0.784；24 h、48 h吞噬率和吞噬指數(shù)分別與對照組比較均有顯著升高(P0.05)。(3)10%～40% PM培養(yǎng)濾液作用于巨噬細(xì)胞24 h、48 h, WST-8檢測實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞OD值分別為0.996±0.152,0.564±0.269,與對照組比較均有顯著降低(24 h,P0.0548 h,P0.001)。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡壞死：實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞存活細(xì)胞率(%)、凋亡率(%)和壞死率(%)在24 h時(shí),分別為76.41±10.99,9.13±4.10,11.03±8.34；48 h時(shí),分別為58.91±21.00,13.18±5.51,18.14±12.73；24 h、48 h存活率分別與對照組比較均有顯著降低(P0.05)；凋亡率有顯著升高(P0.05)；壞死率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)10%～60% PM培養(yǎng)濾液作用于巨噬細(xì)胞,24 h時(shí),實(shí)驗(yàn)組巨噬細(xì)胞TNF-α、IL-1β、IL-12、IL-10濃度(pg/ml)分別為1807.300±193.759,4.769±3.736,3.180±1.141,35.431±16.005；與對照組比較TNF-α、IL-10、IL-12分泌量均有顯著升高(P0.05),IL-1β分泌量顯著減少(P0.01)。48 h時(shí),實(shí)驗(yàn)組TNF-α、IL-1β、IL-12、IL-10濃度分別為1491.307±695.238,7.153±4.128,4.084±1.631,20.878±11.696,與對照組比較TNF-α、IL-10分泌量均有顯著升高(P0.01),IL-1β分泌量顯著減少(P0.01),IL-12差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)觀察20% PM培養(yǎng)濾液作用于巨噬細(xì)胞,表達(dá)CD206,不表達(dá)CD16/32；巨噬細(xì)胞與PM分生孢子共同培養(yǎng),同樣僅表達(dá)CD206。結(jié)論(1)PM培養(yǎng)濾液中含有的次級(jí)代謝產(chǎn)物可以激活巨噬細(xì)胞表達(dá)CD206和分泌細(xì)胞因子TNF-α、IL-10。(2) PM次級(jí)代謝產(chǎn)物作用于巨噬細(xì)胞的早期(24 h～48 h)可能通過CD206的表達(dá)和TNF-α的分泌趨化巨噬細(xì)胞,增加其對PM的吞噬,同時(shí)PM次級(jí)代謝產(chǎn)物對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生毒性,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞凋亡、壞死增多。
【關(guān)鍵詞】：馬爾尼菲青霉 培養(yǎng)濾液 次級(jí)代謝產(chǎn)物 巨噬細(xì)胞極化
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R756
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-5
• 主要中英文縮寫對照5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-23
• 結(jié)果23-43
• 討論43-52
• 結(jié)論52-53
• 展望53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 綜述58-73
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 致謝73-74
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文74-75
• 附件75-78

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：馬爾尼菲青霉次級(jí)代謝產(chǎn)物對巨噬細(xì)胞功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：322194