背景:黑色素瘤是世界上最具侵襲性的惡性腫瘤之一。在過去的幾十年里,黑色素瘤的發(fā)病率一直在持續(xù)上升。腫瘤的早期診斷是非常重要的。因此,器官特異性生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)迫在眉睫,這有助于及早發(fā)現(xiàn)黑素瘤,準確監(jiān)測疾病進展并預(yù)測治療效果。血紅素氧合酶1(HO-1,32k Da)是一種重要的酶,它能催化血紅素降解為膽綠素、一氧化碳和鐵離子。許多人類腫瘤中的HO-1的表達水平上升,尤其是乳腺癌、甲狀腺癌和口腔癌,通常與疾病分期和病人預(yù)后不良有關(guān)。HO-1促進癌細胞增殖,抑制化學(xué)毒性物質(zhì)或紫外線照射引發(fā)的細胞凋亡。據(jù)報道,在細胞壓力反應(yīng)下HO-1轉(zhuǎn)移到細胞核發(fā)揮獨立于酶活性的許多重要功能,特別是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。除了細胞定位影響HO-1的功能,異構(gòu)體的產(chǎn)生可能也是影響HO-1功能的一種重要途徑。在真核細胞中,內(nèi)含子的存在極大地增加了基因表達的復(fù)雜性,這使得一個基因可以產(chǎn)生各種各樣的蛋白質(zhì),這是通過一種叫做選擇性剪接的過程來實現(xiàn)的。大多數(shù)人類基因轉(zhuǎn)錄本可以通過多種方式剪接而成。然而,HO-1的可變剪接體到目前為止還沒有被報道過。本文鑒定了HO-1基因的一種新型選擇性剪接形式,它是由移除3號外顯子產(chǎn)生的,我們將它命名...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1.HO-1基因擴增及測序分析

用TBST溶液清洗PVDF膜2次，每次2分鐘，加入用一抗稀釋液稀釋好的抗體（稀釋比例為1：1000），放置在搖床上在0到4度低溫環(huán)境下緩慢搖晃過夜�；厥找豢购�，用TBST溶液清洗PVDF膜3次，每次7分鐘。將PVDF膜浸泡在5%的脫....

圖2.2.HO-1外顯子/內(nèi)含子剪接方式及相應(yīng)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測

圖2.1中可以看出，以A375，F(xiàn)EK4，OSC-19和SCC-15的cDNA為底到的HO-1基因867bp的條帶，但同時發(fā)現(xiàn)以A375，OSC-19和SCC-15為底物擴增的基因片段存在400bp大小的條帶，我們對該條帶進行測序后條帶為37....

圖2.3.HO-1不同外顯子區(qū)域PCR擴增結(jié)果

重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文2新型可變剪接體14kDaHO-1的發(fā)現(xiàn)及鑒定修飾后導(dǎo)致HO-1編碼的蛋白質(zhì)失去了與Heme綁定的結(jié)構(gòu)域。推測14kDaHO-1具有獨立于HO-1酶活性的生物學(xué)功能。2.4.3HO-1不同外顯子區(qū)域基因PCR分析為進一步從m....

圖2.4.Westernblotting檢測HO-1的表達

圖2.4.Westernblotting檢測HO-1的表達Fig2.4.DetectionofHO-1proteinbyWesternblotting從圖2.4中可以看出，在A375，OSC-19和SCC-15細胞中均可檢測到14kDaHO-....

本文編號：3997397