本文關(guān)鍵詞：rAAV2-TRAIL的構(gòu)建及對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞的凋亡作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 探討腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV)介導(dǎo)的腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)基因?qū)盒院谏亓黾?xì)胞的凋亡作用。 方法 采用PCR方法，以TRAIL質(zhì)粒為模板，擴(kuò)增出編碼sTRAIL的TRAIL胞外區(qū)片段，，將此TRAIL胞外區(qū)片段插入真核表達(dá)載體，構(gòu)建出穿梭質(zhì)粒pSNAV2.0-sTRAIL，利用細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒DNA同源重組法將擴(kuò)增出的sTRAIL片段插入至腺相關(guān)病毒載體上，構(gòu)建出攜帶有表達(dá)sTRAIL的重組腺相關(guān)病毒rAAV2-sTRAIL。將該病毒體外轉(zhuǎn)染人惡性黑色素瘤細(xì)胞A375（實(shí)驗(yàn)組）及人胚腎細(xì)胞HEK293（對(duì)照組），ELISA、Western blot法檢測目的基因在細(xì)胞中的表達(dá)，MTT法檢測其對(duì)細(xì)胞增殖的影響，電鏡下觀察及流式細(xì)胞儀檢測rAAV2-sTRAIL對(duì)A375的凋亡作用，分析其體外抗人惡性黑色素瘤細(xì)胞的機(jī)制。 結(jié)果 成功構(gòu)建出病毒rAAV2-sTRAIL，PCR檢測目的基因條帶正確；Western blot方法可在細(xì)胞內(nèi)檢測出現(xiàn)明顯TRAIL條帶；轉(zhuǎn)染48小時(shí)后ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中TRAIL，HEK293培養(yǎng)基中濃度為190.6±24.1ng/ml，A375培養(yǎng)基中濃度為56.7±12.4ng/ml；MTT法見rAAV2-sTRAIL可對(duì)A375增殖有明顯影響，而對(duì)HEK293無明顯影響；電鏡觀察及流式細(xì)胞儀檢測證實(shí)rAAV2-sTRAIL可誘導(dǎo)惡性黑色素瘤細(xì)胞A375凋亡。 結(jié)論 AAV2-sTRAIL可以在人正常細(xì)胞HEK293及惡性黑色素瘤細(xì)胞A375中高效表達(dá)并分泌到胞外，對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞A375有明顯的誘導(dǎo)凋亡作用，而對(duì)HEK293無明顯影響。
【關(guān)鍵詞】：腺相關(guān)病毒 腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體 人惡性黑色素瘤細(xì)胞人胚腎細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 第1章 引言9-13
• 第2章 AAV2-TRAIL 的構(gòu)建及對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞的凋亡作用13-27
• 2.1 材料13-14
• 2.1.1 試劑材料13
• 2.1.2 儀器及設(shè)備13-14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法及步驟14-18
• 2.2.1 主要試劑和培養(yǎng)基配備方法14-15
• 2.2.2 rAAV2-sTRAIL 的構(gòu)建、擴(kuò)增、純化及鑒定15-17
• 2.2.3 rAAV2-sTRAIL 的轉(zhuǎn)染及目的基因的表達(dá)17
• 2.2.4 rAAV2-sTRAIL 在體外對(duì)細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)活性17-18
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理18
• 2.3 結(jié)果18-24
• 2.3.1 rAAV2-sTRAIL 的構(gòu)建、擴(kuò)增、純化及鑒定結(jié)果18-20
• 2.3.2 rAAV2-sTRAIL 的轉(zhuǎn)染及目的基因的表達(dá)結(jié)果20-22
• 2.3.3 rAAV2-sTRAIL 對(duì) A375 的凋亡誘導(dǎo)作用結(jié)果22-24
• 2.4 討論24-27
• 第3章 結(jié)論27-28
• 致謝28-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 綜述32-37
• 參考文獻(xiàn)36-37

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號(hào)：282386