本文關(guān)鍵詞：2-甲氧基雌二醇對(duì)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:惡性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是一種較為常見(jiàn)的惡性腫瘤,皮膚黑色素瘤最為常見(jiàn),惡性程度極高,其中轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤患者的長(zhǎng)期生存率僅為5%[1],且惡性黑色素瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前,治療黑色素瘤的關(guān)鍵在于降低患病風(fēng)險(xiǎn)如日曬和早期發(fā)現(xiàn)早期診斷。治療原位惡性黑色素瘤的首選方法仍然是手術(shù)切除,其他抗腫瘤方法療效均較差,如:免疫治療、放化療等,而基因靶向治療[2]雖具有較好的治療前景但仍缺乏大規(guī)模臨床研究,無(wú)法掌握其后續(xù)效應(yīng)。于是尋求一種新的有效治療方法具有極其重要的意義。近年來(lái),眾多學(xué)者發(fā)現(xiàn)2-甲氧基雌二醇具有抗腫瘤增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等活性,其可抑制多種惡性腫瘤如乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌等的發(fā)生發(fā)展,現(xiàn)已將其用于乳腺癌的臨床治療中。本實(shí)驗(yàn)旨在探討2-甲氧基雌二醇對(duì)惡性黑色素瘤B16細(xì)胞增殖、侵襲及遷移的影響,從而為2-甲氧基雌二醇治療惡性黑色素瘤的可能性提供新的理論基礎(chǔ)。2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME)為內(nèi)源性雌激素代謝產(chǎn)物,與雌激素受體結(jié)合能力較低,其毒性較低,代謝較快,生物利用率較低。在體外和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯恐斜砻?2-ME具有抗多種腫瘤作用如乳腺癌[3]、前列腺癌[4]、肺癌[5]、胃癌[6]、宮頸癌[7]及骨髓瘤[8]等,其具體作用機(jī)制[9]為通過(guò)抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子而抵抗血管新生、促使多種凋亡因子參與腫瘤細(xì)胞的凋亡及通過(guò)微管蛋白解聚等誘導(dǎo)細(xì)胞周期的停滯,還包括增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)幅射的敏感性等。近年來(lái),由于2-ME毒副作用較少,其作為一種新型的抗腫瘤藥物日益受到重視。方法:將體外培養(yǎng)的小鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞為研究對(duì)象,用不同濃度(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)的2-甲氧基雌二醇處理鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞。1細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基在飽和濕度、37℃、5%CO2環(huán)境下(含青霉素100U/ml,鏈霉素100μg/ml,PH值7.3)培養(yǎng)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞。2倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)觀察不同濃度2-ME培養(yǎng)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞48h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。3 MTT比色分析法檢測(cè)不同濃度的2-ME在一定時(shí)間段內(nèi)(24h、48h、72h)對(duì)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞增殖的抑制作用。4平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)不同濃度的2-ME處理鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞2周后的克隆形成能力,并以未處理的細(xì)胞作對(duì)照。5 Transwell侵襲小室測(cè)定方法檢測(cè)經(jīng)不同濃度的2-ME處理鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞24h后細(xì)胞的穿Matrigel膠數(shù)目,觀察藥物在體外對(duì)細(xì)胞趨化侵襲能力的影響,并以未處理的細(xì)胞作對(duì)照。6 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)經(jīng)不同濃度的2-ME處理鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞8h后細(xì)胞的穿膜數(shù)目,觀察藥物在體外對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響,并以未處理的細(xì)胞作對(duì)照。7細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)經(jīng)10μmol/L 2-ME處理鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞24h后觀察劃痕愈合程度,并以未處理的細(xì)胞作對(duì)照。8統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)良好,細(xì)胞大多呈多角形,折光性好;經(jīng)2-ME處理實(shí)驗(yàn)組,細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,細(xì)胞變圓,可見(jiàn)散在分布皺縮明顯細(xì)胞及破裂細(xì)胞,且隨濃度升高,變圓及胞核固縮的細(xì)胞逐漸增多。2 MTT比色分析法經(jīng)重復(fù)測(cè)量的方差分析顯示:不同濃度的2-ME對(duì)黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖的抑制作用存在差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(F=920.78,P0.05);在培養(yǎng)24h、48h、72h后2-ME對(duì)黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖的抑制作用存在差異,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6245.73,P0.05);藥物濃度和培養(yǎng)時(shí)間之間存在交互作用(F=1199.58,P0.05)3平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果肉眼觀察,與對(duì)照組相比,B16-10μmol/L,B16-20μmol/L,B16-40μmol/各組細(xì)胞形成的集落均較小,克隆形成數(shù)分別為(303.0±15.7)、(162.7±9.2)、(95.0±11.4)、(67.3±9.7),經(jīng)方差分析統(tǒng)計(jì)學(xué)分析F=238.79,P0.05,說(shuō)明各組總體均數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？寺⌒纬陕史謩e為:60.6±3.1%、32.5±1.8%、19.0±2.3%和13.5±1.9%,經(jīng)LSD-t檢驗(yàn)各組中任意兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4 Transwell侵襲小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組B16-negative細(xì)胞的體外侵襲能力較高,與實(shí)驗(yàn)組B16-10μmol/L,B16-20μmol/L,B16-40μmol/L細(xì)胞的體外侵襲能力相比,細(xì)胞侵襲能力差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=115.4,P0.05),實(shí)驗(yàn)組各組間侵襲能力亦具有顯著差異(P0.05)。5 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組B16-negative細(xì)胞的體外遷移運(yùn)動(dòng)能力較高,與實(shí)驗(yàn)組B16-10μmol/L,B16-20μmol/L,B16-40μmol/L細(xì)胞的體外遷移運(yùn)動(dòng)能力相比,細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)能力差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=67.227,P0.05),實(shí)驗(yàn)組各組間遷移能力亦具有顯著差異(P0.05)。6細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果劃痕試驗(yàn)證實(shí)陰性對(duì)照組的B16細(xì)胞經(jīng)過(guò)24小時(shí)后幾乎遷移至所有的劃痕區(qū)域。而實(shí)驗(yàn)組B16-10μmol/L的劃痕區(qū)域僅有部分由B16細(xì)胞占有。與陰性對(duì)照組相比,濃度為10μmol/L的2-ME對(duì)鼠黑素瘤細(xì)胞B16運(yùn)動(dòng)能力有抑制作用。結(jié)論:1 2-ME對(duì)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖具有抑制作用,且在一定濃度范圍內(nèi)和時(shí)間段內(nèi)呈現(xiàn)時(shí)間-劑量依賴(lài)性。2三個(gè)濃度的2-ME均可以抑制鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞的集落形成,抑制B16細(xì)胞的克隆形成能力。3三個(gè)濃度的2-ME均可以抑制鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞的侵襲和遷移運(yùn)動(dòng)能力。
【關(guān)鍵詞】：惡性黑色素瘤 B16細(xì)胞 2-甲氧基雌二醇 MTT 克隆 侵襲 遷移
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-11
• 英文縮寫(xiě)11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-20
• 結(jié)果20-23
• 附圖23-29
• 附表29-31
• 討論31-34
• 結(jié)論34
• 參考文獻(xiàn)34-38
• 綜述 2-甲氧基雌二醇抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展38-52
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 周霞;周帆;姜華;侯健;;2-甲氧基雌二醇對(duì)骨髓瘤細(xì)胞增殖及c-myc基因表達(dá)改變的影響[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2006年05期

2 周昕欣;王彩霞;;加味四君子湯含藥血清對(duì)B16惡性黑色素瘤細(xì)胞侵襲和MMP2、MMP9表達(dá)的影響[J];中藥藥理與臨床;2013年01期

  本文關(guān)鍵詞：2-甲氧基雌二醇對(duì)鼠惡性黑色素瘤B16細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：282292