本文關鍵詞：早期糖尿病腎病循環(huán)MICRORNA指紋譜的建立及相關MIRNA基因啟動子甲基化調控作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《重慶醫(yī)科大學》 2013年

早期糖尿病腎病循環(huán)MICRORNA指紋譜的建立及相關MIRNA基因啟動子甲基化調控作用的研究

查何  

【摘要】：目的建立早期糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）循環(huán)microRNA（miRNA）指紋譜，為糖尿病腎病的早期分子診斷和治療提供依據。 方法使用PAXgene blood RNA tubes采集早期糖尿病腎病和糖尿病（Diabetes mellitus，DM）患者的新鮮血液各3例，Trizol法提取總RNA,YM-100微離心過濾柱富集片段小于300nt的小RNA，經過修飾處理后與含有最新版本探針序列（Version10.0microRNA數(shù)據庫，）的RNA芯片雜交和特異性的熒光染料染色，經過軟件分析和數(shù)據處理后，獲得早期糖尿病腎病和糖尿病的差異表達譜。通過TaqMan MicroRNA Assays定量RT-PCR試劑盒對6個樣本中的let-7a的表達水平進行定量檢測，驗證RNA芯片結果的可靠性。 結果RNA芯片檢測結果顯示早期糖尿病腎病和糖尿病血液中的miRNA有22個差異表達較明顯的，通過比較共篩選出10個糖尿病腎病顯著差異miRNAs，其中表達上調的miRNAs為5個，分別是hsa-miR-4429、 hsa-miR-4454、 hsa-miR-320e、 hsa-miR-320b和hsa-miR-320d，表達下調的miRNAs為5個，分別是hsa-let-7f、hsa-miR-363、hsa-let-7a、hsa-let-7d、hsa-miR-26a。通過定量RT-PCR檢測了let-7a的表達水平，結果與芯片結果一致，表明芯片結果是可靠的。 結論早期糖尿病腎病和糖尿病患者的部分循環(huán)miRNAs表達具有顯著差異，建立早期糖尿病腎病循環(huán)miRNA指紋譜可能為糖尿病腎病的早期分子診斷和治療提供新的思路。 目的檢測早期糖尿病腎�。―N組）、糖尿�。―M組）和正常人(CON組)全血DNA中l(wèi)et-7a-3基因啟動子的甲基化水平，探討基因啟動子甲基化對let-7a表達的影響，，為研究調控早期糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展的分子機制提供新的線索。 方法熒光定量甲基化特異性PCR（qMSP）檢測DN組、DM組和CON組全血DNA樣本各20例的let-7a-3基因啟動子甲基化率，PCR產物采用瓊脂糖凝膠電泳和克隆測序的方法驗證PCR反應的準確性。 結果qMSP法檢測let-7a-3基因啟動子的甲基化水平，顯示DN組平均甲基化率為96.2%，DM組平均甲基化率為76.6%，正常組平均甲基化率為63.2%，經統(tǒng)計分析，DN組平均甲基化率明顯高于DM組和正常組（P0.05），而DM組和正常組相比，增高并不明顯（P＞0.05）。 結論早期糖尿病腎病患者let-7a-3基因啟動子的甲基化水平明顯增高，影響let-7a-3基因的表達，使得let-7a的表達量下降（RNA芯片和定量RT-PCR檢測證實），很可能是調控早期糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的分子機制之一。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R587.2;R692
【目錄】：

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本文編號：202015