研究背景骨質(zhì)疏松癥是一種以骨量降低,骨組織微結(jié)構(gòu)退化為主要表現(xiàn)的慢性退行性疾病。骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生率隨著年齡的增長(zhǎng)而顯著增加。老年性骨質(zhì)疏松主要的特征之一是成骨細(xì)胞數(shù)量減少,活性降低所導(dǎo)致的骨形成減少。細(xì)胞凋亡是調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的主要機(jī)制。隨著年齡增長(zhǎng),成骨細(xì)胞凋亡顯著增加,最終可以導(dǎo)致骨量丟失。氧化應(yīng)激在機(jī)體衰老過(guò)程中普遍存在,晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPPs,advanced oxidation protein products)是一類含有二酪氨酸的新型氧化應(yīng)激標(biāo)志物。AOPPs可以誘導(dǎo)產(chǎn)生大量活性氧(ROS,reactive oxygen species),并導(dǎo)致多種細(xì)胞凋亡。因此,AOPPs不僅是氧化應(yīng)激的產(chǎn)物,其本身也是一種新型的致病物質(zhì)。前期研究表明,AOPPs水平隨著年齡增長(zhǎng)顯著增加,并與老年性骨量丟失發(fā)生發(fā)展呈正相關(guān);AOPPs刺激老年大鼠可以顯著加速其骨量丟失,骨質(zhì)退化。因此我們提出假設(shè):AOPPs通過(guò)誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡參與了年齡相關(guān)骨量丟失以及老年性骨質(zhì)疏松的發(fā)生發(fā)展。材料與方法本研究的體外實(shí)驗(yàn)部分選取小鼠前成骨細(xì)胞系MC3T3-E1細(xì)胞為模型,使用AOPPs刺激,觀察AO...

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１．入０？？８剌激誘導(dǎo)１＼１０１３－￡１細(xì)胞調(diào)亡

１．３．１?ＡＯＰＰｓ誘導(dǎo)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞凋亡??為了驗(yàn)證ＡＯＰＰｓ是否可以誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡，我們選擇體外培養(yǎng)的前成骨??細(xì)胞系ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞作為模型。如圖１－１Ａ所示，ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ／ＰＩ雙染配合??流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示：２４ｈ時(shí)，單純完全培養(yǎng)基組，２０（....

圖１－２．?ＡＯＰＰｓ刺激激活ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞內(nèi)源性凋亡途徑

?作為對(duì)照。使用ＪＣ－１線粒體膜電位探針，通過(guò)檢測(cè)綠色和紅色熒光強(qiáng)度的比值??來(lái)反應(yīng)線粒體膜電位的變化情況。如圖１－２Ａ激光共聚焦圖片所示，ＡＯＰＰｓ刺激??后，綠色熒光／紅色熒光比值顯著升高，提示線粒體膜電位的下降，并呈現(xiàn)濃度??依賴性。用２０〇ｎｇ／ｍｌ?ＡＯＰＰｓ刺激ＭＣ３....

圖２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激誘導(dǎo)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞產(chǎn)生大量Ｒ〇Ｓ

（２?）使用含打ＡＯＰＰｓ濃度力２００叫／ｍ丨的完傘培養(yǎng)苺分別刺激ＭＣ３＇ｌ＇３－ｍ細(xì)胞??Ｏｍｉｎ，?５ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，?６０ｍｉｎ，１２０ｍｉｎ，使用??導(dǎo)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞產(chǎn)生ＲＯＳ隨刺激時(shí)間變化的情況。結(jié)果如圖２－１Ｂ所不，??ＡＯＰＰｓ刺激可以顯著誘導(dǎo)ＭＣ３Ｔ３－....

圖２－??２Ｃ），最終完成ＮＡＤＰＨ氧化酶的激活

?〇ｉ?〇??ＡＯＰＰｓ?（ｐｇ／ｍｌ）??ＡＯＰＰｓ?ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??圖２＿１．?ＡＯＰＰｓ刺激誘導(dǎo)ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞產(chǎn)生大量Ｒ〇Ｓ。（Ａ）使用不同濃度ＡＯＰＰｓ?（０．??４０〇ｎｇ／ｍｌ）刺激ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１細(xì)胞Ｉ２０ｍｉｎ，?ＤＣＦＨ－Ｄ....

本文編號(hào)：4002529