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實(shí)時(shí)定量PCR法分析2型糖尿病患者腸道乳酸桿菌菌種數(shù)量的改變

發(fā)布時(shí)間:2016-12-01 18:33

  本文關(guān)鍵詞:實(shí)時(shí)定量PCR法分析2型糖尿病患者腸道乳酸桿菌菌種數(shù)量的改變,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


《南方醫(yī)科大學(xué)》 2012年

實(shí)時(shí)定量PCR法分析2型糖尿病患者腸道乳酸桿菌菌種數(shù)量的改變

劉婷婷  

【摘要】:[研究背景] 隨著人們生活水平的提高,2型糖尿病患病率在全球范圍內(nèi)呈逐年升高趨勢(shì),正逐漸成為威脅人類健康的“頭號(hào)殺手”之一。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),2型糖尿病的發(fā)生機(jī)制除了與基因及飲食結(jié)構(gòu)、體力活動(dòng)等環(huán)境因素有關(guān)之外,還與腸道菌群關(guān)系密切。研究表明,2型糖尿病患者或動(dòng)物模型與正常對(duì)照者相比腸道菌群構(gòu)成發(fā)生了改變,這可能是引起胰島素抵抗及糖尿病的因素。還有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),通過(guò)改變飲食因素使腸道菌群構(gòu)成發(fā)生變化能引起肥胖,進(jìn)而增加糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。因此腸道菌群與代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),已成為國(guó)內(nèi)外研究的新熱點(diǎn)。人體消化道定植著相當(dāng)復(fù)雜又相對(duì)穩(wěn)定的腸道菌群,在能量代謝、免疫防御、合成人體必需的微量元素及礦物質(zhì)等方面發(fā)揮著不可替代的作用。其中,乳酸桿菌普遍存在于人類消化道中,并且經(jīng)常作為益生菌加入食品中。目前,腸道微生物與人類健康的相互作用仍存在分歧,它們影響人體代謝的機(jī)制仍不十分清楚。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),服用干酪乳酸桿菌能減輕大鼠的肥胖及胰島素抵抗。然而也有實(shí)驗(yàn)表明,乳酸桿菌能引起炎癥反應(yīng),而炎癥反應(yīng)又與肥胖及2型糖尿病有關(guān)。 [目的] 本研究擬從腸道菌群角度,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),比較我國(guó)2型糖尿病人群與血糖正常人群腸道總?cè)樗釛U菌及其具體菌種(嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、植物乳桿菌、鼠李糖乳桿菌)數(shù)量的差異,并且分析乳酸桿菌數(shù)量與血糖、血脂等代謝性指標(biāo)的相關(guān)性,從而為2型糖尿病的發(fā)病機(jī)制提供新線索,為2型糖尿病的防治尋求新靶點(diǎn)。 [方法] 選取2010年8月——2010年10月在廣東某社區(qū)醫(yī)院病房住院及門診隨診的2型糖尿病病人50人,同時(shí)選取30名健康對(duì)照者,性別、年齡、BMI相匹配,并排除腫瘤、肝腎等臟器嚴(yán)重?fù)p害、患有甲狀腺等其它內(nèi)分泌疾病、1月內(nèi)服用抗生素及微生態(tài)制劑、近4周內(nèi)患腹瀉病或其它胃腸道疾病者。收集每個(gè)2型糖尿病患者空腹血樣品,進(jìn)行空腹血糖(FBG)、胰島素、C肽、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血脂(包括TC、LDL-C、HDL-C、TG)、C反應(yīng)蛋白(CRP)濃度測(cè)定,進(jìn)行OGTT試驗(yàn),收集2h后血樣品進(jìn)行餐后2h血糖(PBG)、胰島素、C肽濃度測(cè)定。收集每個(gè)研究對(duì)象當(dāng)日糞便樣品,稱取濕重糞便樣品每份2g,經(jīng)反復(fù)離心、去除雜質(zhì)、洗滌,得到菌體沉淀,用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取細(xì)菌總DNA。根據(jù)待測(cè)目標(biāo)細(xì)菌16SrRNA基因序列設(shè)計(jì)特異性引物,將10倍系列稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品與糞便細(xì)菌DNA樣品同時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng),每次反應(yīng)體系和反應(yīng)條件均相同,每次實(shí)驗(yàn)同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品及空白對(duì)照,每個(gè)樣品均同時(shí)做2個(gè)平行復(fù)孔。反應(yīng)完畢后根據(jù)熔解曲線分析PCR產(chǎn)物的特異性,根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每克糞便樣品中待測(cè)細(xì)菌基因的拷貝數(shù),作為定量結(jié)果。將此定量結(jié)果經(jīng)log10轉(zhuǎn)換后錄入SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。應(yīng)用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較組間差異。用K類中心聚類法根據(jù)所含細(xì)菌數(shù)目的差異將所有研究對(duì)象分成相互獨(dú)立的兩類,用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較兩類間目標(biāo)細(xì)菌的差異,用兩獨(dú)立樣本率比較的χ2檢驗(yàn)比較兩類中糖尿病患者的百分比來(lái)判斷該分類方法與糖尿病之間是否存在關(guān)聯(lián),并計(jì)算敏感性、特異性。用Pearson相關(guān)分析總?cè)樗釛U菌拷貝數(shù)與糖尿病患者脂代謝指標(biāo)、糖代謝指標(biāo)、炎癥指標(biāo)的相關(guān)性。以P(0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)果] 用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)對(duì)乳酸桿菌屬及其具體菌種實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,糖尿病組(7.771±0.874)乳酸桿菌含量顯著高于對(duì)照組(6.606±0.586)(P0.001);糖尿病組(4.550±0.674)嗜酸乳桿菌含量顯著高于對(duì)照組(2.904±0.614)(P0.001);糖尿病組(5.016±1.047)干酪乳桿菌含量顯著高于對(duì)照組(4.504±0.938)(P=0.031);糖尿病組(5.188±0.681)保加利亞乳桿菌含量顯著高于對(duì)照組(4.550±0.674)(P0.001);糖尿病組(3.744±0.995)鼠李糖乳桿菌含量顯著高于對(duì)照組(2.730±0.459)(P0.001);糖尿病組(4.698±0.938)植物乳桿菌含量低于對(duì)照組(4.619±0.657),但差異不具有顯著性(P=0.685)。通過(guò)聚類分析得到相互獨(dú)立、菌群構(gòu)成特征不同的兩類,其中第一類含有顯著增多的總?cè)樗釛U菌(7.8±0.9P0.001)、嗜酸乳桿菌(5.2±1.0P0.001)、保加利亞乳桿菌(5.2±0.6P=0.038)、干酪乳桿菌(5.2±1.2P=0.007)及鼠李糖乳桿菌(4.0±1.1P0.001),第二類含有顯著減少的總?cè)樗釛U菌(7.0±0.9P0.001)、嗜酸乳桿菌(2.9±0.6P0.001)、保加利亞乳桿菌(4.8±0.8P=0.038)、干酪乳桿菌(4.6±0.8P=0.007)及鼠李糖乳桿菌(2.9±0.6P0.001)。且該分類與糖尿病之間存在聯(lián)系,第一類中糖尿病患者所占百分比顯著高于第二類(χ2=25.368P0.001)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腸道菌群分析預(yù)測(cè)糖尿病的敏感性為0.600,特異性為0.967。Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示乳酸桿菌與脂代謝指標(biāo)顯著相關(guān),與糖代謝指標(biāo)、炎癥指標(biāo)之間未發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān)性??cè)樗釛U菌與低密度脂蛋白膽固醇顯著負(fù)相關(guān)(RP=0.252P=0.039),與總膽固醇(RP=0.215P=0.067)、甘油三酯(RP=0.161P=0.132)、高密度脂蛋白膽固醇(RP=0.157P=0.138)呈負(fù)相關(guān),但相關(guān)性不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 [結(jié)論] 本研究通過(guò)對(duì)乳酸桿菌屬及具體菌種的定量分析比較,可以初步認(rèn)為:乳酸桿菌及其具體菌種嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌在2型糖尿病人群和血糖正常人群中存在差異,2型糖尿病人群中上述菌屬及菌種增多。且研究結(jié)果顯示通過(guò)分析腸道菌群構(gòu)成的方法來(lái)判斷糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)具有較高的特異性,為2型糖尿病高危人群的判斷及2型糖尿病早期防治提供了新的線索。在所有代謝指標(biāo)中,發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白膽固醇與乳酸桿菌顯著負(fù)相關(guān)?梢酝茰y(cè),腸道菌群對(duì)血脂代謝具有一定的調(diào)節(jié)作用。通過(guò)飲食調(diào)節(jié)腸道乳酸桿菌含量可能有助于改善糖尿病、高脂血癥等代謝性疾病。

【關(guān)鍵詞】:
【學(xué)位授予單位】:南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R587.1;R440
【目錄】:

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【參考文獻(xiàn)】

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9 曹孟德,秦東春,郭小兵,蘇堤,王東升,蘇天水,燕桂香;HLA-DR快速基因分型PCR-SSP方法的建立[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年01期

10 王寧霞,李揚(yáng)秋,蔣光愉,徐以浩;PCR技術(shù)檢測(cè)大腸腫瘤及腫瘤樣病變中EB病毒DNA[J];廣東醫(yī)學(xué);1999年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 譚詩(shī)文;余波;冉懋韜;蔡一鳴;艾玉萍;王璇;張華;;牛源HBV套式PCR方法建立及其S靶基因同源性分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 王平;王輝;許文兵;朱元玨;;肺組織結(jié)核分枝桿菌巢式PCR快速檢測(cè)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011(第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議)論文匯編[C];2011年

3 回文廣;趙廷昌;孫福在;張卉;王建榮;高孝強(qiáng);田麗;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR原理及其應(yīng)用[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)第六屆青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集——植物病理學(xué)研究進(jìn)展(第五卷)[C];2003年

4 張?zhí)?凌宗帥;徐彪;梁成珠;朱來(lái)華;孫軍;王洪兵;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)豬流感病毒方法的建立[A];動(dòng)物檢疫學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

5 吳馳;張紅梅;詹能勇;鄧永聰;單萬(wàn)水;余衛(wèi)業(yè);;熒光定量PCR技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的臨床應(yīng)用研究[A];2010年中國(guó)防癆協(xié)會(huì)臨床/基礎(chǔ)專業(yè)學(xué)術(shù)大會(huì)匯編[C];2010年

6 周素娟;張鐵軍;何納;;HCV的C/E1區(qū)PCR擴(kuò)增方法的改進(jìn)[A];華東地區(qū)第十次流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨華東地區(qū)流行病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議20周年慶典論文集[C];2010年

7 李青;鐘青萍;王麗;;海產(chǎn)品中副溶血弧菌的PCR快速檢測(cè)方法的建立[A];“食品加工與安全”學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2010年廣東省食品學(xué)會(huì)年會(huì)論文集[C];2010年

8 陳信忠;任聰;龔艷清;王壽昆;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒[A];經(jīng)濟(jì)發(fā)展方式轉(zhuǎn)變與自主創(chuàng)新——第十二屆中國(guó)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì)年會(huì)(第三卷)[C];2010年

9 潘康成;馮興;崔恒敏;張亞蘭;趙爽;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)雞口服枯草芽孢桿菌后腸道芽孢桿菌數(shù)量變化[A];第四屆第十次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集(下冊(cè))[C];2010年

10 孫秋影;盧長(zhǎng)春;魏強(qiáng);龐淑芬;;LightCycler 480實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第五屆輸血大會(huì)論文專集(摘要篇)[C];2010年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 余運(yùn)西;[N];健康報(bào);2005年

2 劉錫潼;[N];北京現(xiàn)代商報(bào);2006年

3 記者 陳鶯;[N];民營(yíng)經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 朱明;[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)(漢);2007年

5 靖九江;[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

6 ;[N];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2007年

7 李紅蕾;[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

8 李美琳;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

9 戴秀娟 李尤佳;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

10 易善永;[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張?jiān)谄?熒光定量PCR檢測(cè)禽白血病病毒與RNA干擾抑制J亞群禽白血病病毒復(fù)制的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 渠柏艷;基于血液樣品和微流控芯片技術(shù)的細(xì)胞分離、PCR擴(kuò)增及DNA測(cè)序方法研究[D];東北大學(xué);2009年

3 張麗;實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)兒童急性早幼粒細(xì)胞白血病PML/RARα融合基因[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 李澤松;缺失型α-地中海貧血基因診斷芯片及在分子流行病學(xué)研究中的應(yīng)用[D];重慶大學(xué);2008年

5 陳智勇;胰腺癌相關(guān)基因mucin4的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

6 王彥君;細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4基因微衛(wèi)星多態(tài)性與炎癥性腸病相關(guān)性研究[D];吉林大學(xué);2008年

7 鄭衛(wèi)軍;農(nóng)村糖尿病患者自我管理行為研究[D];浙江大學(xué);2011年

8 馬孟根;豬源致病性沙門氏菌耐藥基因PCR和基因芯片檢測(cè)技術(shù)研究[D];四川大學(xué);2005年

9 杜瑋南;中國(guó)北方漢族人群2型糖尿病易感基因的精細(xì)定位[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

10 劉穎;南瓜多糖對(duì)1型糖尿病大鼠的降糖作用及其機(jī)制探討[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王穩(wěn);利用RT-PCR驗(yàn)證基于小鼠外顯子芯片發(fā)現(xiàn)的腦缺血相關(guān)基因表達(dá)的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

2 劉新軍;表達(dá)布氏桿菌sodc基因的重組沙門氏菌的構(gòu)建及不同種布氏桿菌鑒別PCR檢測(cè)方法的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 郭世奎;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)結(jié)直腸癌患者腸道微生態(tài)的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

4 金戈;博爾納病病毒磷蛋白的原核表達(dá)和p24片段熒光定量PCR試劑盒的研制開發(fā)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 劉志國(guó);實(shí)時(shí)多重?zé)晒釶CR快速鑒別布魯菌方法的建立[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 鄭升博;豬鏈球菌多重PCR檢測(cè)方法的建立及屠宰場(chǎng)樣品感染率的調(diào)查研究[D];上海交通大學(xué);2010年

7 劉寧;PCR擴(kuò)增16srRNA基因以快速診斷敗血癥及分型細(xì)菌[D];南昌大學(xué);2010年

8 陳晶晶;不同納米材料對(duì)PCR優(yōu)化作用的研究及機(jī)制探討[D];東華大學(xué);2011年

9 譚景尹;PCR—膜芯片~(?)技術(shù)檢測(cè)結(jié)核桿菌耐藥基因突變的應(yīng)用研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

10 王文娟;食源性致病菌多重PCR檢測(cè)試劑盒的研制與應(yīng)用[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年


  本文關(guān)鍵詞:實(shí)時(shí)定量PCR法分析2型糖尿病患者腸道乳酸桿菌菌種數(shù)量的改變,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號(hào):201112

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