發(fā)布時(shí)間：2017-08-11 02:00

  本文關(guān)鍵詞：FOXC1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖和周期的影響

  更多相關(guān)文章： FOXC1 腎透明細(xì)胞癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期

【摘要】：目的：FOXC1為FOX蛋白超家族的成員之一,過(guò)去對(duì)于FOXC1的功能的研究主要集中于胚胎發(fā)育與基因遺傳方面,而近期的研究發(fā)現(xiàn)FOXC1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展的過(guò)程中起到了重要作用。目前,研究已證實(shí)FOXC1與乳腺癌、肺癌和肝癌等腫瘤的惡性程度密切相關(guān),但在腎透明細(xì)胞癌(ccRCC)中的表達(dá)情況及其對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用及相關(guān)機(jī)制尚無(wú)明確研究報(bào)道。本課題通過(guò)對(duì)腎透明細(xì)胞癌及其癌旁組織中FOXC1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析,并通過(guò)在腎癌細(xì)胞系中敲低及過(guò)表達(dá)FOXC1基因,觀測(cè)其增殖變化,以了解FOXC1在腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中的作用,并為臨床診斷治療腎透明細(xì)胞癌提供靶標(biāo)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1.收集我院60例腎透明細(xì)胞癌患者術(shù)后腫瘤及對(duì)應(yīng)瘤旁冰凍標(biāo)本,進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR (RT-PCR)實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡(western-blot)實(shí)驗(yàn)及免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)(1HC),分別在核酸及蛋白水平檢測(cè)FOXC1的表達(dá)量,并對(duì)這60例病例臨床資料進(jìn)行分析。2.通過(guò)RT-PCR及western-blot實(shí)驗(yàn),檢測(cè)正常腎小管上皮細(xì)胞株HK2,腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株769-P,786-O, OSRC-2中FOXC1的表達(dá)量。3.通過(guò)RNA干擾技術(shù),轉(zhuǎn)染FOXC1特異性干擾siRNA,下調(diào)細(xì)胞系786-O,769-P的FOXC1表達(dá)量,行平板克隆,MTS及細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),觀察分析其增殖變化。4.通過(guò)構(gòu)建pLV-EGFP[1]-FOXC1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,包裝病毒,感染786-O,769-P細(xì)胞系,使其過(guò)表達(dá)FOXC1基因,通過(guò)平板克隆,MTS及流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn),觀察分析其增殖變化。結(jié)果：在腎透明細(xì)胞癌患者腫瘤冰凍標(biāo)本中nRNA水平比相對(duì)應(yīng)的瘤旁冰凍標(biāo)本由FOXC1表達(dá)有顯著下降(P0.05)。FOXC1在]mRNA水平不同性別、年齡、及TNM分期等分析均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),2.在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系中成功轉(zhuǎn)染siRNA-FOXC1, FOXC1表達(dá)下調(diào)后平板克隆實(shí)驗(yàn)及MTS實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞增值增高(P0.05),細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)顯示低表達(dá)FOX Cl組G1期細(xì)胞比例降低,S期細(xì)胞比例升高(P0.05)。細(xì)胞大量進(jìn)入S期從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。3.成功構(gòu)建pLV-EGFP-FOXC1質(zhì)粒,并在腎透明細(xì)胞系中構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)FOXC1細(xì)胞株。過(guò)表達(dá)FOXC1的細(xì)胞株在平板克隆實(shí)驗(yàn)及MTS實(shí)驗(yàn)中增值率降低(P0.05),細(xì)胞周期測(cè)定實(shí)驗(yàn)顯示質(zhì)粒組G1期細(xì)胞比例升高,細(xì)胞較少進(jìn)入S期,使S期細(xì)胞比例均降低(P0.05),而G2期比例無(wú)顯著差異(P0.05)。細(xì)胞被阻滯于G1/S期而抑制細(xì)胞增殖。結(jié)論：FOXC1在ccRCC中表達(dá)降低,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性潛能相關(guān)；FOXC1對(duì)細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期變化有較大影響,提示可能在ccRCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮抑癌基因的作用。
【關(guān)鍵詞】：FOXC1 腎透明細(xì)胞癌 細(xì)胞增殖 細(xì)胞周期
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-8
• 前言8-10
• 第一部分 轉(zhuǎn)錄因子FOXC1在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床病理相關(guān)性10-22
• 1. 材料與方法10-18
• 2. 結(jié)果18-21
• 3. 小結(jié)21-22
• 第二部分 siRNA下調(diào)FOXC1表達(dá)對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系增殖能力及細(xì)胞周期的影響22-29
• 1. 材料與方法22-25
• 2. 結(jié)果25-28
• 3. 小結(jié)28-29
• 第三部分 構(gòu)建質(zhì)粒上調(diào)FOXC1表達(dá)及對(duì)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系增殖能力及細(xì)胞周期的影響29-38
• 1. 材料與方法29-33
• 2. 結(jié)果33-37
• 3. 小結(jié)37-38
• 討論及結(jié)論38-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述：FOXC1基因在腫瘤中的作用與研究進(jìn)展44-55
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 英文略縮詞表55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文56-57
• 致謝57-58

，

本文編號(hào)：653657