本文關(guān)鍵詞：FOXC1在腎透明細胞癌中的表達及對細胞增殖和周期的影響

  更多相關(guān)文章： FOXC1 腎透明細胞癌 細胞增殖 細胞周期

【摘要】：目的：FOXC1為FOX蛋白超家族的成員之一,過去對于FOXC1的功能的研究主要集中于胚胎發(fā)育與基因遺傳方面,而近期的研究發(fā)現(xiàn)FOXC1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展的過程中起到了重要作用。目前,研究已證實FOXC1與乳腺癌、肺癌和肝癌等腫瘤的惡性程度密切相關(guān),但在腎透明細胞癌(ccRCC)中的表達情況及其對腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用及相關(guān)機制尚無明確研究報道。本課題通過對腎透明細胞癌及其癌旁組織中FOXC1的表達進行檢測分析,并通過在腎癌細胞系中敲低及過表達FOXC1基因,觀測其增殖變化,以了解FOXC1在腎透明細胞癌的發(fā)生發(fā)展中的作用,并為臨床診斷治療腎透明細胞癌提供靶標的基礎(chǔ)實驗依據(jù)。方法：1.收集我院60例腎透明細胞癌患者術(shù)后腫瘤及對應(yīng)瘤旁冰凍標本,進行實時定量PCR (RT-PCR)實驗、蛋白印跡(western-blot)實驗及免疫組織化學(xué)染色實驗(1HC),分別在核酸及蛋白水平檢測FOXC1的表達量,并對這60例病例臨床資料進行分析。2.通過RT-PCR及western-blot實驗,檢測正常腎小管上皮細胞株HK2,腎透明細胞癌細胞株769-P,786-O, OSRC-2中FOXC1的表達量。3.通過RNA干擾技術(shù),轉(zhuǎn)染FOXC1特異性干擾siRNA,下調(diào)細胞系786-O,769-P的FOXC1表達量,行平板克隆,MTS及細胞周期實驗,觀察分析其增殖變化。4.通過構(gòu)建pLV-EGFP[1]-FOXC1過表達質(zhì)粒,包裝病毒,感染786-O,769-P細胞系,使其過表達FOXC1基因,通過平板克隆,MTS及流式細胞技術(shù)檢測細胞周期實驗,觀察分析其增殖變化。結(jié)果：在腎透明細胞癌患者腫瘤冰凍標本中nRNA水平比相對應(yīng)的瘤旁冰凍標本由FOXC1表達有顯著下降(P0.05)。FOXC1在]mRNA水平不同性別、年齡、及TNM分期等分析均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),2.在腎透明細胞癌細胞系中成功轉(zhuǎn)染siRNA-FOXC1, FOXC1表達下調(diào)后平板克隆實驗及MTS實驗顯示細胞增值增高(P0.05),細胞周期實驗顯示低表達FOX Cl組G1期細胞比例降低,S期細胞比例升高(P0.05)。細胞大量進入S期從而促進細胞增殖。3.成功構(gòu)建pLV-EGFP-FOXC1質(zhì)粒,并在腎透明細胞系中構(gòu)建穩(wěn)定過表達FOXC1細胞株。過表達FOXC1的細胞株在平板克隆實驗及MTS實驗中增值率降低(P0.05),細胞周期測定實驗顯示質(zhì)粒組G1期細胞比例升高,細胞較少進入S期,使S期細胞比例均降低(P0.05),而G2期比例無顯著差異(P0.05)。細胞被阻滯于G1/S期而抑制細胞增殖。結(jié)論：FOXC1在ccRCC中表達降低,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及惡性潛能相關(guān)；FOXC1對細胞增殖及細胞周期變化有較大影響,提示可能在ccRCC的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮抑癌基因的作用。
【關(guān)鍵詞】：FOXC1 腎透明細胞癌 細胞增殖 細胞周期
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-8
• 前言8-10
• 第一部分 轉(zhuǎn)錄因子FOXC1在腎透明細胞癌組織中的表達及臨床病理相關(guān)性10-22
• 1. 材料與方法10-18
• 2. 結(jié)果18-21
• 3. 小結(jié)21-22
• 第二部分 siRNA下調(diào)FOXC1表達對腎透明細胞癌細胞系增殖能力及細胞周期的影響22-29
• 1. 材料與方法22-25
• 2. 結(jié)果25-28
• 3. 小結(jié)28-29
• 第三部分 構(gòu)建質(zhì)粒上調(diào)FOXC1表達及對腎透明細胞癌細胞系增殖能力及細胞周期的影響29-38
• 1. 材料與方法29-33
• 2. 結(jié)果33-37
• 3. 小結(jié)37-38
• 討論及結(jié)論38-41
• 參考文獻41-44
• 綜述：FOXC1基因在腫瘤中的作用與研究進展44-55
• 參考文獻50-55
• 英文略縮詞表55-56
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文56-57
• 致謝57-58

，

本文編號：653657