本文關(guān)鍵詞：裸鼠腎癌模型中MiR-21與PDCD4相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在腎細胞癌(RCC)細胞系和組織中,microRNA-21(mi R-21)下調(diào)程序性細胞死亡因子4(PDCD4)抑制細胞惡性轉(zhuǎn)化,細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。本研究的目的是探討裸鼠腎癌模型中,PDCD4和miR-21之間的相互作用關(guān)系和角色。方法:24只雄性BALB/c裸鼠隨機分為三組(陰性對照組(n=8),miR-21inhibitor組(n=8),mi R-21 mimic組(n=8))。將786-O細胞移植到小鼠腋下,每天小鼠分別注射negative control siRNA,pre-mir-21(mimic)和anti-miR-21(inhibitor)。786-O細胞移植后16天,取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。另外,采用實時定量RT-PCR分析腫瘤組織中miR-21和PDCD4 mRNA的表達。在腫瘤組織中PDCD4蛋白的表達,采用免疫組織化學和Western blot檢測。此外,786-O細胞分別轉(zhuǎn)染PDCD4 siRNA和negative control siRNA,采用軟瓊脂集落形成,EDU增殖實驗和侵襲遷移實驗研究沉默PDCD4對腫瘤細胞生長、增殖、侵襲的影響。另取16只雄性BALB/c裸鼠隨機分為兩組:陰性對照組(n=8)和PDCD4 siRNA組(n=8),然后786-O細胞移植到腋下,試驗小鼠每天分別注射negative control siRNA或PDCD4 siRNA,移植后16天,取下荷瘤小鼠的腫瘤并稱重。結(jié)果:與陰性對照組相比,在miR-21 mimic組腫瘤重量明顯增加,然而,在miR-21 inhibitor組腫瘤重量顯著降低(P0.05)。與人腎癌組織和細胞系的結(jié)果類似,在裸鼠腎癌模型中,miR-21 mimic組中mi R-21的表達與陰性對照組相比顯著上調(diào),然而,在miR-21 inhibitor組miR-21的表達顯著降低。此外,觀察到在miR-21 mimic組PDCD4蛋白水平顯著減少,而在miR-21 inhibitor組顯著增加(P0.05),而三組腫瘤組織中PDCD4 mRNA的表達水平?jīng)]有差異(P0.05)。在EDU增殖實驗中,陰性對照組(NC組)的增殖率為(28.6±2.3)%,PDCD4 siRNA組的增殖率為(44.7±3.6)%,兩組差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在軟瓊脂集落形成實驗以及遷移和侵襲實驗中,PDCD4 siRNA轉(zhuǎn)染組細胞中克隆形成和侵襲能力顯著增加(P0.05)。此外,與陰性對照組相比,PDCD4 siRNA組腫瘤重量明顯增加(P0.05)。結(jié)論:與人腎癌組織和細胞系的結(jié)果類似,miR-21在促進腎癌細胞生長、增殖和侵襲,且在裸鼠腎癌模型中,miR-21轉(zhuǎn)錄后下調(diào)PDCD4蛋白表達促進腫瘤生長。我們的結(jié)果與其它研究表明,在腎細胞癌中miR-21和PDCD4可能發(fā)揮II重要作用,提示增加PDCD4表達或抑制miR-21的表達可能是治療腎癌的新的有效的治療策略。
【關(guān)鍵詞】：Mi R-21 PDCD4 裸鼠 腎細胞癌
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 緒論9-26
• 1.1 研究背景9-24
• 1.1.1 腎癌概述9
• 1.1.2 MicroRNA(miRNA)9-15
• 1.1.3 MicroRNA-21 (miR-21)與PDCD415-23
• 1.1.4 MiR-21，PDCD4與腎癌23-24
• 1.1.5 問題和展望24
• 1.2 研究目的24-25
• 1.3 研究意義25-26
• 第2章 材料和方法26-39
• 2.1 細胞株和實驗動物26
• 2.2 試劑和實驗設備26-28
• 2.2.1 試劑26-28
• 2.2.2 實驗設備28
• 2.3 方法28-39
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)和傳代28-29
• 2.3.2 RNAi實驗29-30
• 2.3.3 裸鼠腎癌模型建立30
• 2.3.4 引物設計30
• 2.3.5 免疫組化30-31
• 2.3.6 Western-blot31-33
• 2.3.7 qRT-PCR33-36
• 2.3.8 EDU增殖實驗36-37
• 2.3.9 軟瓊脂集落形成實驗37
• 2.3.10 細胞遷移和侵襲實驗37-38
• 2.3.11 統(tǒng)計分析38-39
• 第3章 結(jié)果39-47
• 3.1 裸鼠腫瘤的重量和腫瘤組織HE染色39-40
• 3.2 下調(diào)miR-21可增加PDCD4的表達量40-47
• 3.2.1 裸鼠腫瘤miR-21和PDCD4 mRNA的表達量40-41
• 3.2.2 裸鼠腫瘤中PDCD4蛋白的表達41-42
• 3.2.3 沉默PDCD4促進 786-0 細胞的增殖、生長和侵襲42-47
• 第4章 討論47-54
• 4.1 MiR-21在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)PDCD4促進腫瘤生長47-49
• 4.2 沉默PDCD4后 786-0 細胞增殖能力增強49-50
• 4.3 沉默PDCD4后 786-0 細胞遷移和侵襲能力增強50-54
• 第5章 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-69
• 縮略語詞匯表69-71
• 致謝71-72
• 攻讀學位期間的研究成果72

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：裸鼠腎癌模型中MiR-21與PDCD4相互作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：433101