本文關(guān)鍵詞：阻斷雌激素及其受體α信號(hào)對(duì)BCG治療膀胱癌的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測(cè)不同的淺表性膀胱癌組織標(biāo)本中雌激素受體ERα的表達(dá)水平。探究雌激素及其受體抑制BCG療效的機(jī)制與淺表性膀胱癌復(fù)發(fā)的關(guān)系。建立淺表性膀胱癌鼠模型,體內(nèi)驗(yàn)證雌激素及其受體抑制BCG免疫治療效果的機(jī)制。方法:1.利用免疫組化的方法檢測(cè)相同分期分級(jí)復(fù)發(fā)與非復(fù)發(fā)淺表性膀胱腫瘤中的雌激素受體ERα的表達(dá)水平并比較其差異。2.細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)部分,穩(wěn)定表達(dá)ERα的人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系T24及野生型人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞系253J在37℃溫箱,5%CO2條件下培養(yǎng)48h后,利用蛋白印記技術(shù)(Western Blot)檢測(cè)ERα分別在兩種細(xì)胞系的表達(dá)情況。分別用雌二醇,雌二醇拮抗劑ICI182.780和TAM處理上述兩種細(xì)胞后,分別加入BCG,觀察細(xì)胞內(nèi)BCG及整合素蛋白α5β1的表達(dá)情況。探究雌激素影響B(tài)CG的粘附及進(jìn)入細(xì)胞的過程的機(jī)制。另一部分細(xì)胞遵循上述處理之后,與人單核巨噬細(xì)胞系THP-1進(jìn)行侵襲性實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證雌激素是否影響B(tài)CG對(duì)THP-1細(xì)胞的募集來殺傷腫瘤細(xì)胞。3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn),采用N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine(OH-BBN)誘導(dǎo)FBV雌性小鼠20周后成瘤,分別分為對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組,其中實(shí)驗(yàn)組又分為單純BCG膀胱灌注組、單純雌激素拮抗劑及BCG和雌激素拮抗劑膀胱灌注組,分別向?qū)嶒?yàn)組各組老鼠膀胱內(nèi)灌注以上藥物,比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠生存率,取瘤組織后,做病理切片,HE染色,同時(shí)檢測(cè)其中Brd U明確其增殖情況,檢測(cè)F4/80明確其巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果:雌激素受體α在術(shù)后復(fù)發(fā)的淺表性膀胱癌中的表達(dá)高于術(shù)后未復(fù)發(fā)的淺表性膀胱癌。T24ERα細(xì)胞中的ERα蛋白的表達(dá)高于野生型T24細(xì)胞,253J細(xì)胞中的ERα蛋白表達(dá)極低;BCG粘附和進(jìn)入膀胱癌細(xì)胞過程可以被雌二醇抑制;雌二醇抑制膀胱癌細(xì)胞整合素蛋白α5和β1的m RNA表達(dá),相反雌激素拮抗劑ICI182.780促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞內(nèi)整合素蛋白α5和β1的m RNA表達(dá);在253J和T24ERα兩種膀胱癌細(xì)胞中證實(shí)整合素蛋白α5β1中和抗體可以抑制雌激素拮抗劑ICI182.780誘導(dǎo)的BCG與膀胱癌細(xì)胞粘附及進(jìn)入膀胱癌細(xì)胞內(nèi)能力的增強(qiáng);膀胱癌細(xì)胞經(jīng)不同處理后與THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),BCG刺激膀胱癌細(xì)胞后可以促進(jìn)THP-1細(xì)胞的遷移,而雌二醇和BCG共同作用膀胱癌細(xì)胞后,THP-1細(xì)胞的遷移能力下降;采用不同的條件刺激T24ERα和253J細(xì)胞,即對(duì)照組、BCG組、E2+BCG組和E2+ICI182.780+BCG組,收集各組的條件培養(yǎng)基和膀胱癌細(xì)胞,檢測(cè)膀胱癌細(xì)胞中IL-6 m RNA水平與條件培養(yǎng)基中的IL-6蛋白水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)BCG刺激膀胱癌細(xì)胞可以導(dǎo)致膀胱癌細(xì)胞內(nèi)和分泌到細(xì)胞外的IL-6水平升高;上述四組的條件培養(yǎng)基分別處理THP-1細(xì)胞,ELISA檢測(cè)不同條件培養(yǎng)基中TNFα的表達(dá),顯示ICI182.780+BCG組條件培養(yǎng)基中TNFα的表達(dá)水平比單純BCG組高,而E2+BCG組比單純BCG組低;應(yīng)用上述四組條件培養(yǎng)基處理T24ERα和253J細(xì)胞,48小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞的活性,結(jié)果顯示THP-1+BCG+ICI182.780組中膀胱癌細(xì)胞活性最低。HE染色顯示對(duì)照組和ICI182.780組出現(xiàn)乳頭狀瘤,BCG組出現(xiàn)膀胱尿路上皮非典型增生,BCG+ICI182.780灌注組膀胱尿路上皮基本正常;對(duì)照組表達(dá)Brd U的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)目最多,ICI組與對(duì)照組相似,BCG+ICI182.780組表達(dá)Brd U的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)目最少,BCG組比對(duì)照組和ICI182.780組表達(dá)Brd U的膀胱尿路上皮細(xì)胞數(shù)少,但比BCG+ICI182.780多;F4/80的陽性細(xì)胞數(shù)以BCG+ICI182.780組最多,BCG組次之、對(duì)照組和ICI組最少;不同處理組治療后,BCG+ICI182.780組小鼠生存時(shí)間最長(zhǎng),對(duì)照組和ICI182.780組小鼠生存時(shí)間最短。結(jié)論:雌激素受體α在術(shù)后復(fù)發(fā)的表淺膀胱癌中的表達(dá)較高,雌二醇可以抑制BCG與腫瘤細(xì)胞的粘附及進(jìn)入細(xì)胞從而影響B(tài)CG的療效。此外,雌二醇可以抑制BCG對(duì)巨噬細(xì)胞的募集作用。因此,雌激素水平升高可能是導(dǎo)致BCG療效降低的因素之一
【關(guān)鍵詞】：膀胱癌 雌激素 復(fù)發(fā) BCG 動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.14
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號(hào)說明10-11
• 前言11-14
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-14
• 一、雌激素受體的表達(dá)與淺表性膀胱癌復(fù)發(fā)的相關(guān)性14-20
• 1.1 對(duì)象和方法14-17
• 1.1.1 研究對(duì)象14
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 1.2 結(jié)果17
• 1.3 討論17-18
• 1.4 小結(jié)18-20
• 二、體外實(shí)驗(yàn)雌激素和雌激素受體抑制BCG的免疫治療作用機(jī)制的研究20-40
• 2.1 對(duì)象和方法20-29
• 2.1.1 研究對(duì)象20
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料20-23
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法23-29
• 2.2 結(jié)果29-34
• 2.2.1 ERα在T24ERα和253J細(xì)胞內(nèi)蛋白水平的表達(dá)結(jié)果29-30
• 2.2.2 雌激素可以抑制BCG粘附和進(jìn)入膀胱癌細(xì)胞30-31
• 2.2.3 雌激素可以抑制BCG誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞在膀胱癌細(xì)胞周圍的富集31-34
• 2.3 討論34-39
• 2.4 小結(jié)39-40
• 三、雌激素拮抗劑與BCG聯(lián)合應(yīng)用治療淺表性膀胱癌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究40-48
• 3.1 對(duì)象和方法40-42
• 3.1.1 研究對(duì)象40
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料40-41
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 3.2 結(jié)果42-44
• 3.2.1 雌激素抑制劑可以增強(qiáng)BCG對(duì)膀胱腫瘤的抑制作用42
• 3.2.2 BrdU實(shí)驗(yàn)證明雌激素拮抗劑可以增強(qiáng)BCG對(duì)膀胱腫瘤增殖的負(fù)調(diào)控作用42-43
• 3.2.3 雌激素拮抗劑可以增強(qiáng)BCG介導(dǎo)的局部巨噬細(xì)胞富集43
• 3.2.4 雌激素拮抗劑聯(lián)合BCG可以提高FVB膀胱癌小鼠生存率43-44
• 3.3 討論44-46
• 3.4 小結(jié)46-48
• 結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明55-56
• 綜述 BCG在膀胱癌的治療中作用的研究進(jìn)展56-68
• 綜述參考文獻(xiàn)62-68
• 致謝68-70
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷70

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本文編號(hào)：431006