目的:探討靶向沉默肝細胞生長因子受體(c-Met)基因?qū)Π螂装㏕24細胞放射敏感性的影響及作用機制。方法:通過脂質(zhì)體將特異性c-Met siRNA1和c-Met siRNA2轉(zhuǎn)染至膀胱癌T24細胞,設(shè)為si-c-Met1組和si-c-Met2組,轉(zhuǎn)染非特異性c-Met siRNA的T24細胞設(shè)為NC組,同時設(shè)置空白對照組(Blank組),采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印跡(Western blot)檢測各組T24細胞c-Met的表達,噻唑藍(MTT)法檢測各組細胞增殖情況,克隆形成實驗檢測各組細胞對放射敏感性的影響,流式細胞術(shù)檢測放射后細胞凋亡變化,Western blot檢測放射對細胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表達的影響。結(jié)果:si-c-Met1組和si-c-Met2組細胞中c-Met mRNA和蛋白表達較Blank組明顯降低(P<0.05),轉(zhuǎn)染c-Met siRNA2干擾效果更好。靶向沉默c-Met基...

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圖1Westernblot檢測各組膀胱癌T24細胞中c-Met蛋白表達情況

MTT法檢測Blank組、NC組和si-c-Met2組T24細胞轉(zhuǎn)染24、48、72h的A值,結(jié)果見表2所示,3組間相同時間點的A值比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明靶向沉默c-Met基因?qū)Π螂装㏕24細胞的增殖能力無較大影響。2.3沉默c-Met基因增強T24細胞....

圖2放射后各組膀胱癌T24細胞劑量存活曲線

表3各組膀胱癌T24細胞經(jīng)不同劑量照射后克隆形成數(shù)目比較(xˉ±s)Tab.3ComparisonofclonesnumberformedbyT24cellsindifferentgroupsafterirradiationwithdif....

圖3流式細胞儀檢測各組T24細胞凋亡率

圖2放射后各組膀胱癌T24細胞劑量存活曲線表4各組T24細胞經(jīng)0Gy和4Gy照射后細胞凋亡率比較(xˉ±s)Tab.4ComparisonofapoptosisratesofT24cellsineachgroupafter0Gyand....

圖4Westernblot檢測T24細胞中蛋白表達情況

表4各組T24細胞經(jīng)0Gy和4Gy照射后細胞凋亡率比較(xˉ±s)Tab.4ComparisonofapoptosisratesofT24cellsineachgroupafter0Gyand4Gyirradiation(x....

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