目的:探討靶向沉默肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(c-Met)基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞放射敏感性的影響及作用機(jī)制。方法:通過脂質(zhì)體將特異性c-Met siRNA1和c-Met siRNA2轉(zhuǎn)染至膀胱癌T24細(xì)胞,設(shè)為si-c-Met1組和si-c-Met2組,轉(zhuǎn)染非特異性c-Met siRNA的T24細(xì)胞設(shè)為NC組,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組(Blank組),采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印跡(Western blot)檢測(cè)各組T24細(xì)胞c-Met的表達(dá),噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況,克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞對(duì)放射敏感性的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)放射后細(xì)胞凋亡變化,Western blot檢測(cè)放射對(duì)細(xì)胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:si-c-Met1組和si-c-Met2組細(xì)胞中c-Met mRNA和蛋白表達(dá)較Blank組明顯降低(P<0.05),轉(zhuǎn)染c-Met siRNA2干擾效果更好。靶向沉默c-Met基...

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圖1Westernblot檢測(cè)各組膀胱癌T24細(xì)胞中c-Met蛋白表達(dá)情況

MTT法檢測(cè)Blank組、NC組和si-c-Met2組T24細(xì)胞轉(zhuǎn)染24、48、72h的A值,結(jié)果見表2所示,3組間相同時(shí)間點(diǎn)的A值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說明靶向沉默c-Met基因?qū)Π螂装㏕24細(xì)胞的增殖能力無較大影響。2.3沉默c-Met基因增強(qiáng)T24細(xì)胞....

圖2放射后各組膀胱癌T24細(xì)胞劑量存活曲線

表3各組膀胱癌T24細(xì)胞經(jīng)不同劑量照射后克隆形成數(shù)目比較(xˉ±s)Tab.3ComparisonofclonesnumberformedbyT24cellsindifferentgroupsafterirradiationwithdif....

圖3流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組T24細(xì)胞凋亡率

圖2放射后各組膀胱癌T24細(xì)胞劑量存活曲線表4各組T24細(xì)胞經(jīng)0Gy和4Gy照射后細(xì)胞凋亡率比較(xˉ±s)Tab.4ComparisonofapoptosisratesofT24cellsineachgroupafter0Gyand....

圖4Westernblot檢測(cè)T24細(xì)胞中蛋白表達(dá)情況

表4各組T24細(xì)胞經(jīng)0Gy和4Gy照射后細(xì)胞凋亡率比較(xˉ±s)Tab.4ComparisonofapoptosisratesofT24cellsineachgroupafter0Gyand4Gyirradiation(x....

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