本文關(guān)鍵詞：FAM40A基因在家族性FSGS發(fā)病中的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:據(jù)國外報(bào)導(dǎo)FSGS(focal and segmental glomerulosclerosis)在成人原發(fā)性腎病綜合征中占12-35%,FSGS包括原發(fā)性和繼發(fā)性兩種。家族性FSGS在占原發(fā)性FSGS的8.9%左右,主要是由于基因突變引起,分為常染色體顯性和隱性兩種遺傳方式,且不同種族突變基因有所不同。家族性FSGS與散發(fā)性FSGS相比,早期臨床表現(xiàn)無明顯差異,容易漏診;但家族性FSGS發(fā)病更早,對治療反應(yīng)相對較弱,更易進(jìn)入終末期腎臟病。我們課題組在臨床工作中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)家庭4代36人中,11人經(jīng)腎活檢發(fā)現(xiàn)病理表現(xiàn)為FSGS,且經(jīng)基因診斷,不屬于目前已知的任何一種家族性FSGS。目的:1.通過基因連鎖分析及全外顯子測序確定致病基因;2.通過基因芯片探索發(fā)病機(jī)制;3.通過基因敲除構(gòu)建動物模型并驗(yàn)證發(fā)病機(jī)制。方法:一、遺傳方式及致病基因分析:1.對新發(fā)現(xiàn)的FSGS家族進(jìn)行系譜分析;2.采用基因連鎖分析和全外顯子掃描查找可能的突變基因。二、表達(dá)譜基因芯片:1.表達(dá)譜基因芯片掃描分析,了解與fam40a相互作用的基因;2、利用q PCR、western blotting驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。三、構(gòu)建fam40a條件性敲除小鼠模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下:1.利用小鼠胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ES)細(xì)胞同源重組技術(shù)和ES細(xì)胞囊胚注射技術(shù),獲得嵌合雄鼠。2.將嵌合雄鼠與C57雌鼠交配獲得flox雜合子小鼠。3.flox雜合子小鼠與EIIAcre小鼠雜交,獲得全身敲除的fam40a(+/-)小鼠;4.收集雜合子和野生型小鼠血尿和腎組織標(biāo)本送檢,觀察fam40a致病情況;利用q PCR、western blotting檢測小鼠腎臟fam40a和層黏蛋白(laminin)的變化。結(jié)果:一、家系分析及基因掃描1.通過家系分析發(fā)現(xiàn)本家族性FSGS遺傳方式符合常染色體顯性遺傳;2.基因連鎖分析及全外顯子測序?qū)⒅虏』蚨ㄎ坏紽AM40A。二、細(xì)胞模型部分:1.基因芯片結(jié)果:與陰性對照組相比,干擾組fam40a表達(dá)量下調(diào),編碼laminin的基因lamb1、lamb2表達(dá)量下調(diào);2.q PCR、western blotting結(jié)果:與陰性對照組相比,干擾組lamb1,lamb2表達(dá)量減少;Western blotting發(fā)現(xiàn)干擾組laminin表達(dá)量減少。三、動物模型部分:1.成功構(gòu)建了flox雜合子小鼠;2.成功構(gòu)建了fam40a雜合子;3.臨床指標(biāo):①8周齡的fam40a雜合子小鼠出現(xiàn)尿蛋白排泄增多②血清檢測:肌酐尿素氮在正常值范圍。4.病理指標(biāo):①光鏡:無明顯病理改變②電鏡:雜合子組:基底膜增厚、皺縮,足細(xì)胞節(jié)段融合;③免疫組化:與野生型組相比,雜合子組小鼠腎臟fam40a表達(dá)量降低,laminin沿GBM走行,表達(dá)減少。5、野生型對照組與模型組腎組織中fam40a、laminin檢測:①real time PCR顯示:與野生型相比,雜合子組小鼠fam40a、lamb1、lamb2表達(dá)量下降;②western blotting顯示:雜合子小鼠腎組織fam40a和laminin蛋白表達(dá)較野生型降低;結(jié)論:通過系譜分析和基因檢測,我們發(fā)現(xiàn)此家系患者遺傳方式符合常染色體顯形遺傳,突變基因?yàn)镕AM40A。小鼠fam40a敲除雜合子模型(fam40a+/-)于出生后8周末出現(xiàn)明顯蛋白尿,電鏡表現(xiàn)為足突融合,GBM增厚、皺縮。在fam40a雜合子小鼠和干擾fam40a足細(xì)胞中,laminin的表達(dá)受到影響。綜上所述:FAM40A對維持腎小球?yàn)V過功能非常重要,它的變化將引起足細(xì)胞和基底膜病變進(jìn)而導(dǎo)致蛋白尿;FAM40A可能通過影響laminin的表達(dá)而影響足細(xì)胞粘附到基底膜上,最終導(dǎo)致腎小球?yàn)V過膜功能障礙。其具體通路還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：FAM40A 足細(xì)胞 基底膜 FSGS laminin 腎病綜合征
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 縮略詞表9-11
• 前言11-19
• 參考文獻(xiàn)16-19
• 第一部分FFSGS患者家系分析及基因掃描19-24
• 一、材料及方法19-21
• 二、結(jié)果21-23
• 三、討論23-24
• 第二部分：fam40a干擾的足細(xì)胞表達(dá)譜基因芯片分析及差異基因驗(yàn)證24-44
• 一、材料及方法24-35
• 二、結(jié)果35-42
• 三、討論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-44
• 第三部分fam40a敲除小鼠模型建立及臨床病理指標(biāo)檢測44-61
• 一、材料及方法44-53
• 二、結(jié)果53-58
• 三、討論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-61
• 綜述 足細(xì)胞粘附對于腎小球?yàn)V過功能的重要性61-87
• 參考文獻(xiàn)74-87
• 在讀期間發(fā)表的論文87-88
• 致謝88-89

【共引文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：FAM40A基因在家族性FSGS發(fā)病中的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：358212