本文關(guān)鍵詞：補體C3a及C5a受體缺失延緩IgA腎病進展，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的(1)通過動物實驗驗證補體C3a、C5a及其受體在Ig A腎病發(fā)病中的作用。(2)探究補體C3a、C5a及其受體在Ig A腎病發(fā)病中潛在作用機制。材料和方法(1)6-8周清潔級雌性Balb/c小鼠36只,陰性對照組、野生型組、C3a受體敲除組、C5a受體敲除組各9只,其中后三組統(tǒng)稱為實驗組。(2)采用有活性的仙臺病毒滴鼻經(jīng)鼻粘膜感染聯(lián)合尾靜脈注射建立小鼠Ig A腎病模型,測定24小時尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐。(3)留取腎組織標本,通過直接免疫熒光法檢測腎組織Ig A、C3沉積;采用PAS染色光鏡下觀察腎組織病理改變;采用RT-q PCR法檢測腎組織中TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 m RNA相對表達量;采用免疫組織化學的方法檢測腎組織CD4+T細胞、CD8+T細胞及CD68+單核巨噬細胞浸潤及TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1等炎癥因子因子沉積情況。結(jié)果(1)15周后實驗組小鼠24小時尿蛋白量高于陰性對照組,且野生型組高于C3a受體敲除組及C5a受體敲除組;各組間小鼠血清尿素氮及血清肌酐差異無統(tǒng)計學意義。(2)實驗組小鼠腎組織可見局灶節(jié)段性腎小球系膜細胞增生,系膜基質(zhì)增多,部分小鼠腎組織可見腎小管上皮細胞腫脹,間質(zhì)有單核巨噬細胞浸潤等病理改變,且野生型組病變變較C3a受體敲除組及C5a受體敲除組明顯,陰性對照組腎臟組織未見明顯病理改變。(3)實驗組小鼠腎組織TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 m RNA相對表達量高于陰性對照組,同時野生型組高于C5a受體敲除組及C3a受體敲除組,另外IL-1β、IL-6、MCP-1的m RNA相對表達量C5a受體敲除組高于C3a受體敲除組。(4)腎組織免疫組織化學染色結(jié)果顯示四組小鼠腎間質(zhì)未見T細胞浸潤現(xiàn)象,但可見散在單核巨噬細胞浸潤,且實驗組陽性率高于陰性對照組;四組小鼠腎組織中IL-6及IL-1β主要沉積于腎小球系膜區(qū)及腎小管上皮細胞胞漿,MCP-1及TNF-α主要沉積于腎小管上皮細胞胞漿,TGF-β則主要沉積于腎小球系膜細胞核及腎小管上皮細胞細胞核。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)腎組織單核巨噬細胞浸潤及IL-6、IL-1β及MCP-1的表達量和蛋白尿呈正相關(guān)。結(jié)論(1)C3a及C5a受體缺失可減少Ig A腎病小鼠尿蛋白量,減輕Ig A腎病腎組織損傷,并且C3a受體缺失對腎臟的保護作用更加明顯,提示C3a及C5a參與了Ig A腎病發(fā)病。(2)C3a及C5a受體缺失可減少腎組織單核巨噬細胞浸潤,減少IL-1β、IL-6及MCP-1的分泌,提示C3a及C5a可能通過介導(dǎo)炎癥反應(yīng)參與Ig A腎病腎損傷。
【關(guān)鍵詞】：IgA腎病 C3a C5a 受體
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 中英文縮寫詞對照表12-13
• 1 前言13-15
• 2 材料和方法15-27
• 2.1 研究對象和方法15
• 2.1.1 小鼠的選擇15
• 2.1.2 血液和尿液標本的收集及測定15
• 2.2 實驗耗材與試劑15-18
• 2.2.1 主要試劑及耗材15-17
• 2.2.2 主要實驗儀器設(shè)備17-18
• 2.3 主要溶液的配制18
• 2.4 仙臺病毒的擴增及血凝價測定18-19
• 2.4.1 仙臺病毒擴增步驟18-19
• 2.4.2 仙臺病毒血凝價測定步驟19
• 2.5 小鼠IgA腎病模型建立19-20
• 2.6 IgA腎病小鼠腎臟組織標本留取及常規(guī)染色20-22
• 2.6.1 腎臟組織取材20
• 2.6.2 腎臟組織冰凍及石蠟切片制作20
• 2.6.3 HE染色步驟20-21
• 2.6.4 PAS染色步驟21
• 2.6.5 Masson染色步驟21-22
• 2.7 小鼠IgA腎病模型鑒定22
• 2.7.1 直接免疫熒光法檢測腎組織IgA、C3 沉積情況22
• 2.7.2 免疫熒光結(jié)果判定方法22
• 2.8 RT-qPCR檢測腎組織中IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β mRNA的表達量22-24
• 2.8.1 腎組織總RNA提取22-23
• 2.8.2 反轉(zhuǎn)錄23
• 2.8.3 熒光定量PCR檢測23-24
• 2.9 免疫組織化學方法檢測腎組織中腎組織CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、 CD68+ 單核巨噬細胞浸潤及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 的沉積24-26
• 2.9.1 PV兩步法檢測實驗組及對照組小鼠腎組織中CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、CD68+ 單核巨噬細胞浸潤及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 的表達量24-25
• 2.9.2 免疫組織化學結(jié)果判定方法25-26
• 2.10 統(tǒng)計學分析方法26-27
• 3 結(jié)果27-34
• 3.1 仙臺病毒血凝價測定結(jié)果27
• 3.2 各組小鼠24小時蛋白尿量及血清肌酐、尿素氮的結(jié)果比較27
• 3.3 顯微鏡下觀察各組小鼠腎組織病理改變27-29
• 3.3.1 各組小鼠腎組織IgA及C3 沉積情況27-28
• 3.3.2 各組小鼠腎組織光鏡改變28-29
• 3.4 各組小鼠腎組織IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β mRNA相對表達量的比較29-30
• 3.5 各組小鼠腎組織CD4+、CD8+、CD68+陽性細胞浸潤及IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、TGF-β 等因子沉積情況30-32
• 3.6 各組小鼠腎臟組織炎癥因子mRNA表達量與蛋白尿的相關(guān)性分析32-33
• 3.7 各組小鼠腎組織CD68+陽性細胞浸潤及IL-1β、IL-6、MCP-1 的沉積情況與蛋白尿的相關(guān)性分析33-34
• 4 討論34-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻38-40
• 綜述 IgA腎病發(fā)病機制及治療研究進展40-60
• 參考文獻54-60
• 個人簡歷及在校期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果60-61
• 致謝61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 段喜梅;張穎;劉璐;周雅麗;權(quán)松霞;邢國蘭;;C3a、C5a及其受體在IgA腎病發(fā)病中的作用[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2013年03期

2 張朝甲;張穎;劉璐;杜路;周雅麗;權(quán)松霞;邢國蘭;;糖尿病腎病患者腎臟組織中C3aR、C5aR的表達[J];鄭州大學學報(醫(yī)學版);2014年02期

3 侯凡凡;伴有蛋白尿的IgA腎病的治療[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2002年01期

  本文關(guān)鍵詞：補體C3a及C5a受體缺失延緩IgA腎病進展，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321115