本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙�；敢种苿㏒AHA拮抗腎草酸鈣結(jié)晶形成及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的隨著現(xiàn)代生活水平的提高、生活方式的改變,環(huán)境、代謝因素相關(guān)的疾病日趨凸顯。作為泌尿科常見疾病之一,腎結(jié)石(kidney stones),不僅給患者帶來疼痛、手術(shù)的痛苦、沉重的經(jīng)濟負擔,而且給腎臟功能也帶來進行性惡化的遠期影響[1][2]。因此對于早期防治腎結(jié)石的發(fā)生發(fā)展就顯得尤為重要。最常見的腎結(jié)石類型是含鈣結(jié)石,其中草酸鈣結(jié)石所占比例將近80%[3]。腎結(jié)晶是腎結(jié)石早期階段的表現(xiàn)形式,當前有許多的研究主要集中在探索腎結(jié)晶的防治。草酸鈣結(jié)晶生成的病理生理過程如下:草酸鈣晶體激活煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶,誘發(fā)親環(huán)蛋白D(Cyclophilin D)活化,繼而發(fā)生線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(m PTP)開放、線粒體坍塌,活性氧增多,機體處于較高的氧化應激狀態(tài),細胞色素C由坍塌的線粒體釋放繼而激活Caspase3,這些反應最終導致小管上皮細胞損傷、凋亡,改變細胞膜上磷脂酰絲氨酸的分布,從而促進晶體與小管上皮細胞的粘附,腎結(jié)晶的大量形成[4]。于是通過抗氧化、抗凋亡等途徑可有效得減少腎結(jié)晶沉積,減輕結(jié)晶腎損傷。與遺傳病(Genetic diseases)相對應,表觀遺傳學疾病(Epigenetic diseases)是指DNA序列未改變而蛋白質(zhì)表達異常的疾病[5],在環(huán)境相關(guān)疾病中起到很重要的作用。組蛋白修飾是表觀遺傳現(xiàn)象(Epigenetics)之一,包括組蛋白磷酸化、泛素化、甲基化、乙�；痆5][6],而組蛋白乙酰化/去乙�；瘜φ{(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄活化發(fā)揮著重大的作用。組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶與去乙�；腹餐{(diào)控著組蛋白乙�；�/去乙�；膭討B(tài)平衡,當前有研究發(fā)現(xiàn),抑制組蛋白去乙�；缚梢员Ｗo腎臟功能,表現(xiàn)在改善腎臟纖維化、抑制炎癥反應、減少小管上皮細胞凋亡[7],并且在急性腎損傷(Acute Kidney Injury)方面取得較好的研究進展[8],提高腎功能恢復的能力。大多數(shù)疾病的發(fā)生發(fā)展與氧化應激有著千絲萬縷的聯(lián)系,抑制氧化應激程度能延緩病程的進展以及逆轉(zhuǎn)某些疾病的惡化。核轉(zhuǎn)錄因子(紅細胞來源2)相關(guān)因子2(即Nrf2)是介導抗氧化反應起保護作用的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,它主要是通過激活抗氧化蛋白的轉(zhuǎn)錄而發(fā)揮作用的。生理情況下,Nrf2是與胞質(zhì)中Keap1蛋白相偶聯(lián),當機體受到氧化應激損傷時,活性氧族(Reactive Oxygen Species,ROS)產(chǎn)物增多,促使Keap1-Nrf2解偶聯(lián),Nrf2迅速進入細胞核,啟動抗氧化蛋白表達。而在結(jié)晶形成的過程中,隨著成石因素逐漸強于抑石因素,機體本身的抗氧化能力逐漸減弱,如果能從外界給予機體抵抗氧化應激的支持,那么就可以阻斷結(jié)晶的進一步生長。研究表明,在腦缺血再灌注動物模型中,用組蛋白去乙�；敢种苿�(Histone deacetylase inhibitor,HDACI)進行干預后可激活Nrf2的表達及上調(diào)它的下游蛋白分子而起到保護神經(jīng)的作用[9]�；谝种平M蛋白去乙酰化酶能起到抗纖維化、抗炎、抗氧化等作用,再結(jié)合腎結(jié)晶的發(fā)病機制,本課題是以乙醛酸鹽(Glyoxyate)來制造Ca Ox腎結(jié)晶的動物模型,給予雄性小鼠腹腔注射辛二酰苯胺異羥肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA),擬驗證SAHA對小鼠草酸鈣結(jié)晶腎損傷的保護作用,并初步探討相關(guān)的分子機制,為臨床防治腎結(jié)晶損傷提供一定的理論基礎(chǔ)。研究內(nèi)容和方法一、觀察SAHA對草酸鈣結(jié)晶形成的影響,以及對腎模型小鼠腎功能的作用6周齡的ICR雄性小鼠24只,體重20-25克,飼養(yǎng)于第二軍醫(yī)大學動物中心SPF級動物房。適應性喂養(yǎng)一周后,分為4組:A.正常對照組(Control組)B.乙醛酸鹽+生理鹽水組(Saline組)C.乙醛酸鹽+DMSO組(DMSO組)D.乙醛酸鹽+SAHA組(SAHA組),每組6只,A組不處理,B、C、D組分別予以Saline、DMSO、SAHA 50mg/kg/d腹腔注射,間隔6小時后均予以乙醛酸鹽100mg/kg/d腹腔注射,以上處理連續(xù)7天后小鼠入代謝籠,留取24小時尿液,內(nèi)眥靜脈取血,用生理鹽水行心室灌流,取一側(cè)腎臟組織置于EP管中凍存于-80°C冰箱,以待檢測鈣含量,另一側(cè)腎臟組織內(nèi)固定后浸泡于甲醛中,以待制石蠟切片,行馮庫薩(Von kossa)染色。1.通過測定腎臟組織鈣含量,尿鈣/肌酐比值,觀察Von kossa染色及對其半定量分析,來評定SAHA對草酸鈣結(jié)晶形成的影響。2.檢測血清肌酐、血尿素氮(自動生化分析儀),ELISA法分析血KIM-1(kidneyinjury molecular 1),尿KIM-1表達,明確SAHA對結(jié)晶腎損傷的影響。二、研究SAHA減輕腎損傷的可能機制如第一部分動物處理,仍然分為4組:A.Control組B.Saline組C.DMSO組D.SAHA組,每組6只,A組不處理,B、C、D組分別予以Saline、DMSO、SAHA50mg/kg/d腹腔注射,間隔6小時后均予以乙醛酸鹽100mg/kg/d腹腔注射,以上處理連續(xù)7天后小鼠脊椎脫臼處死,用生理鹽水行心室灌流,一側(cè)腎臟組織置于EP管中凍存于-80°C冰箱,以待檢測MDA、SOD、GSH含量或活力,WB檢測Caspase-3,另一側(cè)腎臟組織浸泡于甲醛中,以待制石蠟切片,行免疫組化染色和TUNEL染色。1.檢測各組MDA、SOD、GSH含量或活力(比色法)來評價SAHA對模型小鼠氧化應激反應的影響。2.觀察比較各組OPN(骨橋蛋白)和CD44在腎臟中的表達。3.檢測SAHA對小管上皮細胞凋亡的影響,如觀察腎臟組織的TUNEL染色,并行半定量分析,以及Western blot檢測Caspase-3的蛋白表達量。結(jié)果一、SAHA減少腎結(jié)晶的形成,改善腎功能1.與Saline組和DMSO組比較,SAHA組小鼠腎組織的鈣含量顯著減少,且尿鈣/肌酐比值明顯降低,Von kossa結(jié)果表明沉積在小管腔中的鈣鹽也顯著減少,這些都證實了草酸鈣結(jié)晶形成被SAHA拮抗。2.血肌酐、血尿素氮在SAHA組明顯下降,尿KIM-1排泄也明顯減少,對腎功能有明顯保護作用。二、SAHA減輕草酸鈣結(jié)晶腎損傷的相關(guān)機制1.SAHA組小鼠腎組織MDA表達較生理鹽水對照組、DMSO對照組顯著減少,而SOD、GSH表達沒有明顯差異。2.SAHA組小管上皮細胞凋亡顯著減少,Caspase-3表達明顯減少。3.SAHA下調(diào)OPN、CD44的表達量。結(jié)論1、SAHA明顯減少模型小鼠腎臟組織的Ca Ox結(jié)晶形成2、SAHA能顯著改善草酸鈣結(jié)晶模型小鼠的腎功能3、SAHA能明顯抑制氧化應激水平4、SAHA能明顯減少腎小管上皮細胞凋亡5、SAHA下調(diào)模型小鼠腎組織的OPN、CD44的表達本課題首次將組蛋白去乙�；敢种苿㏒AHA應用于草酸鈣腎臟結(jié)晶小鼠模型中,發(fā)現(xiàn)SAHA能減少腎結(jié)晶的形成,減輕腎損傷,并對SAHA發(fā)揮效果的作用機制作了初步探討,可能是通過抗氧化,改善小管上皮細胞凋亡,下調(diào)OPN、CD44的表達等來防止腎損傷。這或許為防治腎結(jié)石特別是難治性、復發(fā)性腎結(jié)石提供了新的治療策略和靶點。
【關(guān)鍵詞】：草酸鈣結(jié)晶 組蛋白去乙�；敢种苿� SAHA 氧化應激 OPN CD44
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692.4
【目錄】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英文縮略詞表12-14
• 第一部分 SAHA減少腎草酸鈣結(jié)晶的形成且改善腎功能14-27
• 前言14-17
• 材料和方法17-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-27
• 第二部分 SAHA對模型小鼠腎臟保護作用的機制研究27-44
• 前言27-29
• 材料與方法29-37
• 結(jié)果37-41
• 討論41-44
• 結(jié)論44-45
• 綜述45-52
• 參考文獻52-59
• 成果與發(fā)表文章59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 賈猛;諶衛(wèi);丁家榮;胡海燕;梅淑欽;郭志勇;;丹紅注射液減輕草酸鈣結(jié)晶腎損傷的實驗研究[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2012年12期

2 李文;邊育紅;褚曉倩;;表觀遺傳學及其與疾病相關(guān)性[J];中國細胞生物學學報;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：組蛋白去乙�；敢种苿㏒AHA拮抗腎草酸鈣結(jié)晶形成及其機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：316268