本文關鍵詞：糖尿病大鼠腎組織差異表達的AGE-修飾蛋白研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的糖基化是一種重要且常見的蛋白質(zhì)修飾方式,被修飾后的蛋白質(zhì)其結(jié)構(gòu)和功能都可能發(fā)生變化,蛋白質(zhì)的異常糖基化與糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生密切相關,本研究通過對糖尿病大鼠腎臟組織中晚期糖基化終末產(chǎn)物(Advanced glycated end-products, AGE)-修飾的蛋白質(zhì)進行分析和鑒定,為糖尿病腎病患者的早期診斷和治療探索新的分子標志物。方法1.SPF級8周齡健康雄性SD (Sprague Dawley)大鼠50只,隨機分組法分為：糖尿病3月組20只、糖尿病1月組17只及正常對照組13只。2.2%鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ) 55mg/kg進行腹腔注射,制造糖尿病大鼠模型,對照組注射等劑量的檸檬酸緩沖液,分別于注藥后第3天及第6天測定尾靜脈全血血糖,兩次血糖均≥16.7mmol/L造模成功,最后獲得糖尿病3月及1月組大鼠分別為14只、13只。3.對正常及糖尿病大鼠腎臟組織制作普通切片及超薄切片,分別在光鏡及電鏡下觀察其顯微結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)的變化。4.制備大鼠腎組織勻漿,ELISA分析各組大鼠腎組織中的AGE-修飾蛋白濃度,Pearson相關性分析糖尿病組大鼠血糖與腎組織AGE-修飾蛋白濃度的相關性。5.提取腎臟組織總蛋白并測定其濃度,通過1-DE/Western-blot分離各組大鼠腎組織中的AGE-修飾蛋白, quantity-one4.6.2軟件分析對照組、糖尿病1月及3月組大鼠腎組織中AGE-修飾蛋白的表達差異。6.對表達有差異的AGE-修飾蛋白進行膠內(nèi)酶解及液相色譜-質(zhì)譜／質(zhì)譜鑒定,最后用Mascot進行數(shù)據(jù)庫檢索。結(jié)果1.腎臟組織病理形態(tài)學改變(1)光鏡下結(jié)構(gòu)改變：與正常對照組大鼠相比,糖尿病1月組大鼠腎小球系膜區(qū)局灶節(jié)段增寬,以系膜基質(zhì)增多為主,伴或不伴有系膜細胞的增生,糖尿病3月組大鼠腎小球系膜區(qū)增寬,仍以局灶節(jié)段性病變?yōu)橹?但較糖尿病1月組更明顯,并且出現(xiàn)毛細血管基底膜的局灶節(jié)段增厚。(2)電鏡下結(jié)構(gòu)改變：與正常對照組大鼠相比,糖尿病1月組大鼠腎臟系膜基質(zhì)增多,腎臟內(nèi)皮細胞及系膜細胞核未見染色質(zhì)凝集,糖尿病3月組大鼠腎臟系膜基質(zhì)明顯增多,腎小球內(nèi)皮細胞及系膜細胞核染色質(zhì)高度凝集與邊集,呈現(xiàn)凋亡細胞的形態(tài)學改變,且出現(xiàn)基底膜不均勻的增厚,部分足突缺失,與基底膜分離。2. ELISA分析顯示,與正常大鼠腎組織AGE-修飾蛋白濃度[(332.3+51.4)ug/ml]相比較,糖尿病1月及3月組大鼠腎組織AGE-修飾蛋白濃度[(420.9±53.0)ug/ml、(618.8±86.1) ug/ml]顯著增高(p0.05, p0.001);糖尿病3月組大鼠AGE-修飾蛋白濃度[(618.8±86.1)ug/ml]顯著高于1月組大鼠AGE-修飾蛋白濃度[(420.9±53.0) ug/ml] (p0.001); Pearson相關性分析提示糖尿病大鼠腎組織中AGE-修飾蛋白的濃度與血糖濃度顯著正相關(r=0.4303,p=0.025).3.1-DE/Western-blot、quantity-one4.6.2軟件分析顯示糖尿病組大鼠腎組織中4種AGE-修飾蛋白表達水平上調(diào),另外,上述4種蛋白在糖尿病3月組的表達水平顯著高于糖尿病1月組。4. Q Exactive質(zhì)譜儀分析顯示上述4種表達上調(diào)的AGE-修飾蛋白分別是：肌動蛋白、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、過氧化氫酶及血清白蛋白。結(jié)論糖尿病大鼠腎組織中AGE-修飾蛋白的濃度及表達水平增加,并且與糖尿病病程相關,有4種AGE-修飾蛋白的表達水平增加,它們分別是：肌動蛋白、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白、過氧化氫酶及血清白蛋白。糖基化可能影響了這些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)及功能,導致糖尿病的腎臟損傷,其具體機制尚待進一步研究。
【關鍵詞】：糖尿病 糖尿病腎損傷 晚期糖基化終末產(chǎn)物 蛋白質(zhì)
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R587.2;R692.9
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-10
• 第一章 前言10-20
• 1.1 研究背景10-19
• 1.1.1 AGEs致糖尿病腎臟損傷機制的研究進展11-16
• 1.1.2 蛋白質(zhì)組學概述16-18
• 1.1.3 蛋白質(zhì)組學在糖尿病及糖尿病腎臟損傷中的前期研究18-19
• 1.2 本研究的特色19-20
• 第二章 糖尿病大鼠模型的建立20-24
• 2.1 動物、試劑及儀器20-21
• 2.1.1 動物20
• 2.1.2 試劑20
• 2.1.3 儀器20
• 2.1.4 主要溶液的配置20-21
• 2.2 方法21
• 2.2.1 動物模型的建立21
• 2.2.2 數(shù)據(jù)統(tǒng)計21
• 2.3 結(jié)果21-22
• 2.4 討論22-24
• 第三章 糖尿病大鼠腎損傷的病理學研究及腎組織AGEs定量研究24-33
• 3.1 試劑及儀器24-25
• 3.1.1 試劑24
• 3.1.2 儀器24
• 3.1.3 主要溶液的配制24-25
• 3.2 方法25-27
• 3.2.1 腎臟取材25
• 3.2.2 光鏡切片的制備25
• 3.2.3 電鏡切片的制備25
• 3.2.4 腎臟勻漿的制備25
• 3.2.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗25-27
• 3.2.6 統(tǒng)計學分析27
• 3.3 結(jié)果27-30
• 3.3.1 光鏡結(jié)果27-28
• 3.3.2 電鏡結(jié)果28-29
• 3.3.3 Elisa結(jié)果29-30
• 3.4 討論30-33
• 第四 章 正常及糖尿病大鼠腎組織的免疫印跡及蛋白質(zhì)組學研究33-45
• 4.1 試劑及儀器33-35
• 4.1.1 試劑33
• 4.1.2 儀器33-34
• 4.1.3 主要溶液的配置34-35
• 4.2 方法35-39
• 4.2.1 腎臟組織總蛋白的提取36
• 4.2.2 BCA蛋白定量36-37
• 4.2.3 蛋白印跡法37-38
• 4.2.4 凝膠染色及圖像掃描38-39
• 4.2.5 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜39
• 4.3 結(jié)果39-41
• 4.3.1 蛋白定量結(jié)果39-40
• 4.3.2 western blot結(jié)果40-41
• 4.3.3 1-DE結(jié)果41
• 4.3.4 質(zhì)譜鑒定的結(jié)果41
• 4.4 討論41-44
• 4.5 結(jié)論44-45
• 參考文獻45-51
• 在校期間研究成果51-52
• 中英文縮略詞52-54
• 致謝54

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