西格列汀對高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞JNK信號通路的影響
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【摘要】:目的:1.探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制劑西格列汀對高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞凋亡是否有保護(hù)作用。2.檢測MAPK信號通路蛋白JNK的濃度變化,探究二肽基肽酶IV(DDP-IV)抑制劑西格列汀發(fā)揮作用的機(jī)制。方法:體外完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞,待細(xì)胞生長鋪滿培養(yǎng)皿70%-80%時(shí)換用無胎牛血清培養(yǎng)基,生長24小時(shí)使細(xì)胞生長同步化,之后進(jìn)行分組如下:⑴正常對照組:低糖(5.5mmol/L)環(huán)境下培養(yǎng);⑵高糖組:高糖(25mmol/L)環(huán)境下培養(yǎng);⑶西格列汀干預(yù)組:預(yù)先加入西格列汀處理1小時(shí)后轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng);⑷JNK信號通路阻斷劑組:預(yù)先加入JNK信號通路的特異性阻斷劑SP600125處理1小時(shí)后將大鼠腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至高糖培養(yǎng)基下培養(yǎng)。之后采用流式細(xì)胞術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的凋亡程度,RT-PCR技術(shù)檢測實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞的JNK基因表達(dá)的水平,Western Blot方法測定實(shí)驗(yàn)各組細(xì)胞內(nèi)磷酸化的JNK蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:1.流式細(xì)胞術(shù)示:與對照組相比,高糖組細(xì)胞凋亡明顯增多;與高糖組相比,西格列汀干預(yù)組和阻斷劑組細(xì)胞凋亡明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P0.05)。2.RT-PCR結(jié)果示:與正常組相比,高糖組磷酸化的JNK顯著增高;與高糖組相比,西格列汀組、阻斷劑組磷酸化的JNK均顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P0.05)。3.Western Blot結(jié)果示:與正常組相比,高糖組磷酸化的JNK表達(dá)明顯增多;與高糖組相比,西格列汀組、阻斷劑組磷酸化的JNK表達(dá)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:西格列汀可以減輕高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞的凋亡,其機(jī)制可能是通過抑制JNK信號通路的表達(dá)來發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】:西格列汀 JNK信號通路 腎小管上皮細(xì)胞 MAPK信號通路
【學(xué)位授予單位】:山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R587.2;R692.9
【目錄】:
- 中文摘要5-7
- Abstract7-9
- 常用英文縮寫詞表9-10
- 前言10-12
- 1 材料與方法12-23
- 1.1 材料、試劑與儀器設(shè)備12-16
- 1.1.1 細(xì)胞株12
- 1.1.2 主要試劑12-13
- 1.1.3 主要儀器13-14
- 1.1.4 試劑配置14-16
- 1.2 指標(biāo)檢測及實(shí)驗(yàn)方法16-22
- 1.2.1 腎小管上皮細(xì)胞的培養(yǎng)16-17
- 1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)測細(xì)胞凋亡17
- 1.2.3 Real time-PCR檢測c-jun的表達(dá)水平17-21
- 1.2.4 Western blot檢測磷酸化JNK21-22
- 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法22-23
- 2 結(jié)果23-27
- 2.1 各組腎小管細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)凋亡的結(jié)果23-24
- 2.2 實(shí)驗(yàn)各組腎小管上皮細(xì)胞pJNK的RealTime-PCR的結(jié)果24-25
- 2.3 實(shí)驗(yàn)各組腎小管上皮細(xì)胞Western blot檢測pJNK的結(jié)果25-27
- 3 討論27-30
- 4 結(jié)論30-31
- 參考文獻(xiàn)31-34
- 綜述34-41
- 參考文獻(xiàn)38-41
- 在研期間參與課題及成果41-42
- 致謝42-43
- 個人簡歷43
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