本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：觀察在體外培養(yǎng)條件下,使用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液和不同濃度鈣離子誘導(dǎo)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞發(fā)生成骨分化的效果,以此初步探討腎臟Randall斑形成的可能的細(xì)胞學(xué)機(jī)制。方法：體外培養(yǎng)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分為5個(gè)組：成骨誘導(dǎo)液組(+成骨誘導(dǎo)液)、Ca Ⅰ組(+0.5mmol/LCa2+), CaⅡ組(+1.5mmol/LCa2+), CaⅢ組(+2.5mmol/LCa2+)和對(duì)照組(+PBS)。各組細(xì)胞分別培養(yǎng)至第1d、3d、6d、9d時(shí),采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性。誘導(dǎo)至第9d時(shí),用細(xì)胞茜素紅鈣染色試劑盒和改良鈣鈷法磷酸酶染色試劑盒對(duì)各組細(xì)胞進(jìn)行染色,于倒置顯微鏡下拍照,觀察鈣結(jié)節(jié)形成和堿性磷酸酶的表達(dá)情況。同樣,收集培養(yǎng)至第9d時(shí)的各組樣本,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。另外,于細(xì)胞培養(yǎng)的第0、3、6和9d,采用RT-qPCR和Western bloting檢測(cè)上述各組細(xì)胞Runx2 mRNA和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：MTT試驗(yàn)結(jié)果：CaⅡ組和CaⅢ組可明顯抑制細(xì)胞的增殖活性；CaI組和成骨誘導(dǎo)液組則無(wú)明顯抑制細(xì)胞增殖活性的作用；細(xì)胞凋亡率檢測(cè)結(jié)果：細(xì)胞培養(yǎng)至第9d時(shí),3個(gè)濃度鈣離子誘導(dǎo)液組和成骨誘導(dǎo)組的細(xì)胞凋亡率分別是4.5%、37%、55%和2%,正常對(duì)照組為0.5%；細(xì)胞茜素紅鈣染色結(jié)果：成骨誘導(dǎo)組和高鈣離子組均可見典型陽(yáng)性紅色鈣結(jié)節(jié)表現(xiàn),而對(duì)照組呈現(xiàn)陰性；堿性磷酸酶染色結(jié)果：高鈣離子組均可以見到典型的黑色塊狀的硫化鈷沉淀物,而正常對(duì)照組染色結(jié)果陰性；RT-qPCR結(jié)果：成骨誘導(dǎo)組、CaⅡ組分別培養(yǎng)至第3d、6d、9d時(shí),細(xì)胞樣本Runx2 mRNA表達(dá)水平均高于0d組,和0d組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；第9d時(shí),Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、CaⅢ組其細(xì)胞Runx2 mRNA表達(dá)均高于對(duì)照組,和對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5、Western blotting結(jié)果：與Od組比較,培養(yǎng)至第3d、6d、9d時(shí)的成骨誘導(dǎo)組和Ca Ⅱ組細(xì)胞Runx2蛋白的表達(dá)水平均升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)；Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、CaⅢ組細(xì)胞Runx2蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組,與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論：1、在體外培養(yǎng)環(huán)境下,人腎成纖維細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液的刺激作用下發(fā)生成骨分化。2、在高鈣離子環(huán)境下,人腎成纖維細(xì)胞也發(fā)生了類似的成骨分化。3、腎乳頭組織中的成纖維細(xì)胞在高鈣離子等因素的作用下發(fā)生成骨分化,這可能是腎臟Randall形成的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人腎成纖維細(xì)胞 成骨分化 腎乳頭鈣化斑 高鈣尿癥 腎結(jié)石
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R692
【目錄】：

• 個(gè)人簡(jiǎn)歷3-5
• 英文縮略語(yǔ)中英文對(duì)照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 實(shí)驗(yàn)方法15-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-43
• 討論43-47
• 小結(jié)47-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 綜述部分52-76
• 參考文獻(xiàn)64-76
• 致謝76-77
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 李秀蘭;張楊;師宜健;王增立;;體外誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞成骨活性表達(dá)的研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2006年02期

  本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：311579