本文關鍵詞：體外誘導人腎間質成纖維細胞成骨分化的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：觀察在體外培養(yǎng)條件下,使用成骨誘導培養(yǎng)液和不同濃度鈣離子誘導人腎間質成纖維細胞發(fā)生成骨分化的效果,以此初步探討腎臟Randall斑形成的可能的細胞學機制。方法：體外培養(yǎng)人腎間質成纖維細胞,實驗分為5個組：成骨誘導液組(+成骨誘導液)、Ca Ⅰ組(+0.5mmol/LCa2+), CaⅡ組(+1.5mmol/LCa2+), CaⅢ組(+2.5mmol/LCa2+)和對照組(+PBS)。各組細胞分別培養(yǎng)至第1d、3d、6d、9d時,采用MTT法檢測細胞增殖活性。誘導至第9d時,用細胞茜素紅鈣染色試劑盒和改良鈣鈷法磷酸酶染色試劑盒對各組細胞進行染色,于倒置顯微鏡下拍照,觀察鈣結節(jié)形成和堿性磷酸酶的表達情況。同樣,收集培養(yǎng)至第9d時的各組樣本,采用流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡率。另外,于細胞培養(yǎng)的第0、3、6和9d,采用RT-qPCR和Western bloting檢測上述各組細胞Runx2 mRNA和蛋白的表達水平。結果：MTT試驗結果：CaⅡ組和CaⅢ組可明顯抑制細胞的增殖活性；CaI組和成骨誘導液組則無明顯抑制細胞增殖活性的作用；細胞凋亡率檢測結果：細胞培養(yǎng)至第9d時,3個濃度鈣離子誘導液組和成骨誘導組的細胞凋亡率分別是4.5%、37%、55%和2%,正常對照組為0.5%；細胞茜素紅鈣染色結果：成骨誘導組和高鈣離子組均可見典型陽性紅色鈣結節(jié)表現(xiàn),而對照組呈現(xiàn)陰性；堿性磷酸酶染色結果：高鈣離子組均可以見到典型的黑色塊狀的硫化鈷沉淀物,而正常對照組染色結果陰性；RT-qPCR結果：成骨誘導組、CaⅡ組分別培養(yǎng)至第3d、6d、9d時,細胞樣本Runx2 mRNA表達水平均高于0d組,和0d組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)；第9d時,Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、CaⅢ組其細胞Runx2 mRNA表達均高于對照組,和對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義。5、Western blotting結果：與Od組比較,培養(yǎng)至第3d、6d、9d時的成骨誘導組和Ca Ⅱ組細胞Runx2蛋白的表達水平均升高,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)；Ca Ⅰ組、Ca Ⅱ組、CaⅢ組細胞Runx2蛋白表達水平均高于對照組,與對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論：1、在體外培養(yǎng)環(huán)境下,人腎成纖維細胞在成骨誘導培養(yǎng)液的刺激作用下發(fā)生成骨分化。2、在高鈣離子環(huán)境下,人腎成纖維細胞也發(fā)生了類似的成骨分化。3、腎乳頭組織中的成纖維細胞在高鈣離子等因素的作用下發(fā)生成骨分化,這可能是腎臟Randall形成的細胞學基礎。
【關鍵詞】：人腎成纖維細胞 成骨分化 腎乳頭鈣化斑 高鈣尿癥 腎結石
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R692
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 英文縮略語中英文對照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 實驗材料12-15
• 實驗方法15-28
• 實驗結果28-43
• 討論43-47
• 小結47-48
• 參考文獻48-52
• 綜述部分52-76
• 參考文獻64-76
• 致謝76-77
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文77

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李秀蘭;張楊;師宜健;王增立;;體外誘導成纖維細胞成骨活性表達的研究[J];中國修復重建外科雜志;2006年02期

  本文關鍵詞：體外誘導人腎間質成纖維細胞成骨分化的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：311579