本文關(guān)鍵詞：人參皂苷Rg1調(diào)控凋亡對癲癇大鼠海馬神經(jīng)元的保護作用

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【摘要】：[目的]癲癇(Epilepsy)是一種最常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一,是由于神經(jīng)元反復(fù)突然異常放電,導(dǎo)致短暫的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)的慢性腦部疾病。目前癲癇的主要治療方法以藥物為主,常規(guī)及新型抗癲癇藥物在臨床應(yīng)用中雖有一定的進展,但并不能完全控制所有的癇性發(fā)作,而且有1/3的癲癇患者經(jīng)正規(guī)抗癲癇藥物治療后仍難以控制,產(chǎn)生耐藥性,發(fā)展成為難治性癲癇。既往研究表明,頻繁而持續(xù)的癲癇發(fā)作可導(dǎo)致大腦神經(jīng)元凋亡,而細胞凋亡在癲癇后腦損傷及慢性癲癇的形成中起重要作用。近年來,對中草藥的研究越來越多,人參皂苷 Rg1是從人參、三七等人參屬植物中提取的主要活性成分之一,其具有抗凋亡、抗炎、抗氧化等神經(jīng)保護作用。那么人參皂苷 Rg1 對癲癇是否有保護作用呢?基于以上假設(shè),本研究擬通過建立氯化鋰-匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇模型,觀察匹羅卡品誘導(dǎo)癲癇模型海馬神經(jīng)元凋亡情況；分析人參皂苷 Rg1 對海馬神經(jīng)元凋亡的影響；不同濃度人參皂苷 Rg1 的預(yù)處理,何種濃度效果較好；從而初步探討人參皂苷 Rg1 對癲癇可能的神經(jīng)保護機制。[方法]健康成年雄性SD大鼠100只(體重285±15g),隨機分為5組：即空白對照組,匹羅卡品致癇組,50mg/kg人參皂苷 Rg1 治療組、100mg/kg人參皂苷 Rg1 治療組、200mg/kg人參苷 Rg1 治療組,每組20只。G-Rg1 治療組于造模前6 h分別對大鼠分別使用不同濃度的人參皂苷 Rg1 進行腹腔注射(introperitioneal. i.p),空白對照組和匹羅卡品致癇組同時給予相同劑量的生理鹽水腹腔注射。6h后匹羅卡品致癇組及 G-Rg1 治療組注射氯化鋰(127mg/kg, i.p),18 h后給予硫酸阿托品(1 mg/kg, i.p)減輕匹羅卡品的膽堿能外周反應(yīng),30 min后予以匹羅卡品(30 mg/kg, i.p),空白對照組則給予與匹羅卡品等容量的生理鹽水腹腔注射。觀察大鼠行為學(xué)改變,根據(jù)Racine分級標(biāo)準(zhǔn),達到Ⅲ級及以上發(fā)作可認(rèn)為是癲癇發(fā)作,觀察達Ⅲ級以上發(fā)作90 min后給予地西泮(10mg/kg)腹腔注射終止發(fā)作,后期給予精心護理以減少大鼠死亡。于點燃后72 h所有大鼠10%水合氯醛(350mg/kg)麻醉,一部分大鼠斷頭取腦,分離出海馬,置于-80℃冰箱備用,采用Western Blot的方法檢測大鼠海馬中Bcl-2及Bax的表達,一部分大鼠使用4%多聚甲醛灌注取腦,蔗糖梯度脫水,包埋固定,冰凍切片機切成15μm厚度的大腦切片備用,采用免疫組化、免疫熒光的方法觀察海馬組織及神經(jīng)元的形態(tài),以及檢測癲癇大鼠海馬神經(jīng)元中的Bcl-2及Bax的表達。[結(jié)果]空白對照組未出現(xiàn)癲癇發(fā)作及死亡,人參皂苷Rgl治療組與匹羅卡品致癇組相比,大發(fā)作潛伏期時間延長,各組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作后,免疫組化及免疫熒光結(jié)果提示大鼠神經(jīng)元尤其是海馬神經(jīng)元的胞漿內(nèi)凋亡蛋白Bax免疫陽性反應(yīng)增強,蛋白產(chǎn)物表達增多,抗凋亡蛋白Bcl-2表達減少。G-Rgl治療組與匹羅卡品致癇組相比,促凋亡蛋白Bax表達減少,抗凋亡蛋白Bcl-2表達增加。Western Blot結(jié)果與免疫組化和免疫熒光結(jié)果相符,且在濃度為100mg/kg時抗凋亡作用明顯。[結(jié)論]氯化鋰聯(lián)合匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癇發(fā)作,可引起凋亡因子Bcl-2及Bax的表達改變,Bcl-2表達降低,Bax表達上升,在海馬區(qū)域出現(xiàn)神經(jīng)元凋亡；人參皂苷Rg1可延長氯化鋰-匹羅卡品致癇大鼠的強直陣攣的發(fā)作潛伏期；以及降低致癇大鼠的死亡率,通過上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達,減少氯化鋰-匹羅卡品致癇大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。本研究結(jié)果提示,人參皂苷Rgl對氯化鋰聯(lián)合匹羅卡品誘導(dǎo)的癲癇大鼠模型有明顯的神經(jīng)保護作用,其作用機制可能是通過上調(diào)癲癇大鼠海馬組織中抗凋亡蛋白Bcl-2的表達,下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達來實現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：人參皂苷Rg1 癲癇 凋亡 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-16
• 材料與方法16-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-42
• 綜述42-49
• 參考文獻46-49
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果49-50
• 致謝50

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本文編號：757999