本文關(guān)鍵詞：糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的研究

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【摘要】：第一部分糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的應(yīng)用研究目的：糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)的常見眼部并發(fā)癥之一,同時(shí)也是致盲的主要因素。本研究在建立實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠模型的基礎(chǔ)上,觀察糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的影響,對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物CD68和膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glial cell line derived neurotropic factor, GDNF)表達(dá)的影響,探討糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。方法：選用SPF級(jí)SD雄性六周齡大鼠24只,對(duì)除6只正常組外的其它大鼠經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotoein, STZ) (60mg/kg)誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型,正常組大鼠經(jīng)腹腔注射等體積生理鹽水。72小時(shí)后取大鼠尾尖靜脈血測(cè)血糖,連續(xù)3天血糖"g16.7mmol/L者則為造模成功。造模成功后隨即將糖尿病大鼠分為模型組6只、治療組6只、對(duì)照組6只。治療組和對(duì)照組在造模成功后即開始進(jìn)行干預(yù),給藥時(shí)間為每天上午8-10時(shí),給藥方式為灌胃。治療組(炙黃芪、紅參、丹參、三七粉、茯苓、桂枝、地龍等經(jīng)水煎濃縮,濃度為1g/mg),給藥量為10g／(kg·d)；對(duì)照組(多貝斯)給藥量為250mg/(kg·d)。每天觀察大鼠的毛色、形態(tài)及尿量,每2周測(cè)大鼠血糖、體重。經(jīng)過9個(gè)月的實(shí)驗(yàn)周期后,用10%水合氯醛過量麻醉以處死大鼠,摘取眼球,制備視網(wǎng)膜切片,通過光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察大鼠視網(wǎng)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變；運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色法(Envision法)檢測(cè)CD68和GDNF在視網(wǎng)膜上的表達(dá),通過圖像分析軟件測(cè)量免疫組化顯色的光密度值并進(jìn)行定量分析。結(jié)果：(1)血糖：造模前大鼠血糖無(wú)明顯差異(P0.05)；造模成功后,糖尿病大鼠的血糖在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與正常組相比明顯升高(P0.05)。(2)體重：造模前大鼠體重?zé)o明顯差異(P0.05)；造模后第6周,糖尿病大鼠的體重在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與正常組相比明顯減輕(P0.05)。(3)視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)觀察：光鏡下：與正常組相比,模型組大鼠視網(wǎng)膜各層排列紊亂,神經(jīng)纖維層增厚、水腫；神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)邊集現(xiàn)象明顯,可見部分神經(jīng)節(jié)細(xì)胞壞死、核溶解；內(nèi)叢狀層水腫明顯；內(nèi)核層胞體排列紊亂、疏松,空泡樣變性；外核層胞體排列紊亂、疏松；感光細(xì)胞呈絲狀排列,尚整齊,可見空泡樣改變；治療組與模型組和對(duì)照組相比,視網(wǎng)膜各層排列明顯整齊,神經(jīng)纖維層水腫不明顯,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞見部分核固縮,偶見空泡樣改變,內(nèi)叢狀層排列完整、緊密,感光細(xì)胞外節(jié)見少量空泡樣改變明顯減輕。電鏡下：與正常組大鼠相比,模型組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞間隙增大,細(xì)胞核濃縮明顯,染色質(zhì)見邊集現(xiàn)象,細(xì)胞間可見增生活化的小膠質(zhì)細(xì)胞包繞；外核層排列紊亂、疏松,核膜皺縮、內(nèi)陷,可見染色質(zhì)邊集,核間可見小膠質(zhì)細(xì)胞；光感受器細(xì)胞外節(jié)膜盤排列紊亂、疏松變形,并發(fā)生斷裂、溶解,線粒體腫脹,空泡化明顯。治療組與模型組和對(duì)照組相比,大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞間隙增大,排列尚整齊,可見核濃縮,染色質(zhì)邊集,可見散在分布的小膠質(zhì)細(xì)胞；外核層排列整齊而緊密,細(xì)胞核電子密度均勻；光感受器細(xì)胞外節(jié)膜盤排列整齊,局部可見疏松,未見明顯線粒體腫脹及空泡樣改變。(4)CD68在視網(wǎng)膜的表達(dá)結(jié)果：與正常組相比,模型組、治療組、對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜CD68陽(yáng)性表達(dá)明顯增加(P0.05)；與模型組相比,治療組、對(duì)照組表達(dá)明顯增高(P0.05)；與對(duì)照相比,治療組表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。(5) GDNF在視網(wǎng)膜上的表達(dá)結(jié)果,與正常組相比,模型組、治療組、對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜GDNF表達(dá)值明顯增高(P0.05)；與模型組相比,治療組、對(duì)照組表達(dá)量明顯增加(P0.05)結(jié)論：1實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜發(fā)生明顯的病理性損害；2糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用；3糖網(wǎng)1號(hào)方能抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,增強(qiáng)GDNF的表達(dá),有助于減輕視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的損害,促進(jìn)細(xì)胞的修復(fù)與再生。第二部分針刺對(duì)外傷壓迫性視神經(jīng)萎縮的臨床觀察目的：觀察針刺對(duì)外傷壓迫性視神經(jīng)萎縮(optic atrophy, OA)的臨床療效。方法：對(duì)45例(68眼)外傷壓迫性視神經(jīng)萎縮患者,與針刺治療,觀察患者治療前與治療后1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月的視力、視野以及治療前與治療6個(gè)月后的視覺誘發(fā)電位(visual evoked potential, VEP)的變化。結(jié)果：(1)視力：治療1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月后視力與治療前相比,均有不同程度的提高,其有效率分別為32.35%、48.43%、61.29%；(2)視野平均光敏感度(mean light sensitivity, MS)、視野平均缺損值(mean defect, MD):與治療前相比,治療1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月的MS均明顯升高、MD值均明顯增高(P0.05); (3) VEP潛伏期和振幅：與治療前相比,治療6個(gè)月VEP-P100波的潛伏期明顯縮短(P0.05),振幅明顯升高(P0.05)。結(jié)論：針刺治療外傷壓迫性視神經(jīng)萎縮療效確切,能有效改善該病患者的視力、視野、視覺誘發(fā)電位,防止視神經(jīng)損害繼續(xù)加重,提高患者視功能質(zhì)量及生存治療。
【關(guān)鍵詞】：糖網(wǎng)1號(hào)方 糖尿病視網(wǎng)膜病變 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞 膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R259;R276.7
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 文獻(xiàn)綜述13-31
• 綜述一 糖尿病對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)視覺傳導(dǎo)細(xì)胞的影響13-24
• 1 視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞13-14
• 2 三級(jí)神經(jīng)元14-16
• 2.1 第一級(jí)神經(jīng)元—光感受器14
• 2.2 第二級(jí)神經(jīng)元—雙極細(xì)胞14-15
• 2.3 第三級(jí)神經(jīng)元—視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)15-16
• 3 視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞16-18
• 3.1 星形膠質(zhì)細(xì)胞與Muller細(xì)胞16-17
• 3.2 視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞17-18
• 4. 展望18-19
• 參考文獻(xiàn)19-24
• 綜述二 中醫(yī)藥治療在改善視神經(jīng)萎縮患者視覺功能方面的作用24-31
• 1 中藥復(fù)方辨證辨病論治24-25
• 2 針灸治療25-26
• 3 聯(lián)合治療26-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第一部分 糖網(wǎng)1號(hào)方對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的應(yīng)用研究31-51
• 前言31-33
• 材料與方法33-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物33
• 1.2 藥物與試劑33
• 1.3 主要儀器設(shè)備33-34
• 2 試驗(yàn)方法34-38
• 2.1 模型的建立及分組34
• 2.2 藥物干預(yù)34
• 2.3 動(dòng)態(tài)指標(biāo)監(jiān)測(cè)34
• 2.4 取材、標(biāo)本的處理及制備34-36
• 2.5 組織觀察36-37
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析37-38
• 結(jié)果38-47
• 1 動(dòng)態(tài)指標(biāo)38-39
• 1.1 一般情況38
• 1.2 大鼠血糖38-39
• 1.3 大鼠體重39
• 2 大鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)學(xué)觀察39-47
• 2.1 光鏡下觀察結(jié)果39-41
• 2.2 電鏡下觀察結(jié)果41-43
• 2.3 CD68和GDNF免疫組織化學(xué)法(Envision法)檢測(cè)結(jié)果43-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 第二部分 針刺對(duì)外傷壓迫性視神經(jīng)萎縮的臨床觀察51-60
• 前言51
• 資料與方法51-54
• 1.1 研究對(duì)象51-52
• 1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)52
• 1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)52
• 1.4 病例排除52
• 1.5 干預(yù)方法-針刺治療52-53
• 1.6 觀察指標(biāo)53
• 1.7 視力療效判斷標(biāo)準(zhǔn)53
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法53-54
• 結(jié)果54-58
• 2.1 視力54-55
• 2.2 視野55-56
• 2.3 視覺誘發(fā)電位56-58
• 討論58-60
• 參考文獻(xiàn)60-63
• 致謝63-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)介65

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本文編號(hào)：607315