本文關鍵詞：血管內皮生長因子（VEGF）對caspase-3表達的影響及梗死區(qū)缺氧損傷的心肌細胞保護的機制研究

  更多相關文章： 低氧血管內皮生長因子(VEGF) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3) BCl-2 鈣成像

【摘要】：背景及目的:冠心病是一種發(fā)病率、死亡率和致殘率極高的常見病和多發(fā)病,嚴重威脅人類健康,已成為嚴重的社會公共衛(wèi)生問題之一。心肌缺血發(fā)生時,能夠及時、有效地恢復缺血心肌的血流灌注,是減少缺血心肌損傷和恢復心臟功能的重要措施之一,也是改善缺血性心臟病患者預后的關鍵。但大量基礎和臨床研究[1,2]證實,缺血心肌的再灌注本身也會誘發(fā)一系列新的病理生理變化,進一步加重心肌組織細胞的損傷,出現(xiàn)再灌注心律失常、心肌舒縮功能障礙、代謝異常以及心肌超微結構改變等,即發(fā)生心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),直接影響患者的心臟功能和預后。心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion,I/R)損傷是極其復雜的病理生理過程,主要是缺氧器官在恢復血流和氧輸送的情況下心肌損傷加劇的現(xiàn)象[3]。觀察缺血-再灌注小鼠6小時后,HIF-1及VEGF的表達,誘導缺氧心肌細胞后給予生理鹽水、VEGF、VEGF阻斷劑,檢測HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、PLB、Ca MK-II、SERCA2a、Bcl-2的表達;探討VEGF對缺氧心肌細胞保護的可能機制。方法:1.選取同批次清潔級雄性健康昆明小鼠,開胸結扎小鼠左冠狀動脈前降支,構建急性心肌梗死經典模型;應用免疫組化技術檢測HIF1a、caspase-3在細胞內分布的變化,在用熒光定量PCR技術分析正常小鼠心肌組織及梗死邊緣區(qū)心肌組織HIF1a、caspase-3的表達量的變化。2.用CoCl2誘導心肌細胞缺氧模型,用蛋白印跡法檢測缺氧心肌細胞HIF1a、VEGF及caspase-3蛋白水平。使用熒光定量PCR技術分析缺氧心肌細胞HIF1a、VEGF及caspase-3表達量的變化。3.分別給三組缺氧心肌細胞注射共計100μl的0.9%的生理鹽水、添加VEGF阻斷劑AEE788至終濃度10u M和100ng/ml VEGF;應用蛋白印跡法方法分別分析三組缺氧心肌細胞6小時后Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II蛋白水平;使用熒光定量PCR技術分析三組缺氧心肌細胞Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表達水平。4.采用熒光指示劑Fura-2 AM方法進行細胞內鈣離子的測定,對肌漿網攝鈣能力進行測定。結果:1.急性心肌梗死模型:采用前胸結扎左冠狀動脈前降支構建小鼠急性心肌梗死。實驗中常見的死亡原因有:出血、麻醉不當、肺損傷、神經損傷、氣道阻塞、感染、心律失常等。2.缺氧心肌細胞模型:采用濃度為50uM的CoCl2誘導缺氧心肌細胞模型,免疫組化顯示:缺氧心肌細胞內HIF1a、caspase-3的分布明顯異常,熒光定量PCR技術分析顯示:HIF1a、caspase-3的表達明顯升高。3.缺氧心肌細胞:應用蛋白印跡法方法顯示HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平較正常心肌細胞明顯升高,熒光定量PCR技術分析HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表達水平較正常心肌細胞也明顯升高。4.缺氧心肌細胞、缺氧+VEGF、缺氧+AEE 788:應用蛋白印跡法方法顯示缺氧+VEGF組的HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平最高,缺氧+AEE 788組的以上蛋白水平最低。熒光定量PCR技術分析以上蛋白的表達水平有相似的結果。5.用熒光指示劑Fura-2 AM方法進行細胞內鈣離子的測定,缺氧心肌細胞內Fura-2 AM結合鈣離子的能力減弱,其中缺氧+AEE 788組最弱。結論血管內皮生長因子(VEGF)對早期缺氧或缺血性損傷過程中的心肌細胞具有保護作用,VEGF的這種保護作用有望成為急性心肌梗死及缺血-再灌注損傷心肌細胞的治療靶點。
【關鍵詞】：低氧血管內皮生長因子(VEGF) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3) BCl-2 鈣成像
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R541.4
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 中英文縮略詞表10-12
• 引言12-14
• 材料與方法14-28
• 結果28-41
• 討論41-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-50
• 綜述 血管內皮生長因子（VEGF）對梗死心肌細胞Ca2+濃度影響和可能機制50-62
• 參考文獻57-62
• 個人簡歷、在學期間發(fā)表的學術論文62-63
• 致謝63

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