本文關(guān)鍵詞：清胰湯對SAP大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的保護(hù)作用及其蛋白質(zhì)組表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:從蛋白質(zhì)組學(xué)方面研究重癥急性胰腺炎(SAP)的病理機(jī)制,探討清胰湯在治療SAP過程中對大鼠胰腺腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)作用,以及對SAP早期胰腺腺泡細(xì)胞蛋白質(zhì)組表達(dá)的影響;同時,在實驗研究過程中對大鼠胰腺腺泡細(xì)胞分離、純化及培養(yǎng)的技術(shù)方法進(jìn)行完善和優(yōu)化。方法:選擇SPF級成年雄性Wistar大鼠69只,體重250~300g,按電腦隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為假手術(shù)組(9只)、SAP模型組(30只)、藥物治療組(30只)三組。SAP模型組和藥物治療組分別經(jīng)胰膽管逆行注射5%�；悄懰徕c制備SAP大鼠模型,假手術(shù)組以同樣方法注射等劑量5%生理鹽水。動物麻醉蘇醒后,藥物治療組每隔12h灌胃清胰湯劑5ml(相當(dāng)于30g原生藥/kg),SAP模型組和假手術(shù)組每隔12h灌胃等劑量的生理鹽水。各組分別在第一次灌胃清胰湯和生理鹽水后24h、48h、72h三個時間點,在麻醉狀態(tài)下分別消化大鼠胰腺組織,并經(jīng)腹主動脈取血。通過將細(xì)胞分離液(膠原酶+胰蛋白酶抑制劑)進(jìn)行膽胰管內(nèi)逆行注射和體外消化,分別對胰腺腺泡細(xì)胞進(jìn)行分離、提純、體外培養(yǎng),以及細(xì)胞存活率及純化率測定;在透射電鏡下比較三個時間點三組胰腺腺泡細(xì)胞及多種細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)的差異;取48h時間點各組大鼠胰腺腺泡細(xì)胞,提取、純化各組胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì),分別對各組提取的胰腺腺泡細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行2-DE電泳,PDQuest軟件對電泳圖譜進(jìn)行分析,然后選取有意義的差異顯著、表達(dá)穩(wěn)定且分辨率較好的蛋白質(zhì)點膠內(nèi)利用胰蛋白酶水解,將水解后的多肽進(jìn)行MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析,獲得相應(yīng)的肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF),最后將MALDI-TOF-MS質(zhì)譜數(shù)據(jù)用Mascot在線質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)檢索工具通過互聯(lián)網(wǎng)在免費(fèi)的蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫內(nèi)進(jìn)行檢索,鑒定出表達(dá)穩(wěn)定的差異蛋白質(zhì)結(jié)果,并將SAP模型組和清胰湯藥物治療組的最終結(jié)果進(jìn)行對比研究。結(jié)果:(1)透射電鏡下觀察,SAP模型組胰腺腺泡細(xì)胞及胞內(nèi)細(xì)胞器,包括細(xì)胞核、線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、酶原顆粒等出現(xiàn)明顯的結(jié)構(gòu)異常改變,且胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)髓鱗體、空泡、溶酶體、次級溶酶體等病理結(jié)構(gòu),隨著時間延長,腺泡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)破壞程度不斷加重;藥物治療組胰腺腺泡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理改變程度明顯輕于SAP模型組,且隨著時間延長,腺泡細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù),72h時間點觀察到的胰腺腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整,包括上述多種細(xì)胞器結(jié)構(gòu)形態(tài)良好,細(xì)胞正常生理功能逐漸恢復(fù)。(2)三組2-DE凝膠電泳圖譜中可見蛋白質(zhì)點較多、且圓,分辨率較高,三張圖譜具有一定的相似性,且差異點明顯;對兩個差異顯著,表達(dá)穩(wěn)定的蛋白質(zhì)點進(jìn)行分析:與假手術(shù)組相比,SAP模型組胰腺腺泡細(xì)胞的“差異蛋白質(zhì)點30”的表達(dá)量上調(diào)17倍,SAP模型組胰腺腺泡細(xì)胞的“差異蛋白質(zhì)點38”的表達(dá)量上調(diào)22倍。與SAP模型組相比,藥物治療組胰腺腺泡細(xì)胞的“差異蛋白質(zhì)點30”的表達(dá)量下調(diào)約1/3,藥物治療組胰腺腺泡細(xì)胞的“差異蛋白質(zhì)點38”的表達(dá)量下調(diào)約1/2;同時實驗確定兩種差異蛋白質(zhì)分別是糜蛋白酶樣蛋白和熱休克蛋白。結(jié)論:(1)清胰湯具有保護(hù)SAP早期胰腺腺泡細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,降低胞內(nèi)線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、酶原顆粒等多種細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)受損程度的作用;(2)SAP早期胰腺腺泡細(xì)胞異常表達(dá)的前體小分子蛋白質(zhì)(糜蛋白酶樣蛋白等)導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞正常功能失調(diào),進(jìn)而導(dǎo)致病情惡化發(fā)展;(3)清胰湯對SAP大鼠胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)異常表達(dá)的小分子蛋白質(zhì)(熱休克蛋白等)具有調(diào)節(jié)作用,通過干預(yù)這些特異蛋白質(zhì)的表達(dá)和修飾,從而達(dá)到治療SAP的目的。
【關(guān)鍵詞】：清胰湯 重癥急性胰腺炎 胰腺腺泡細(xì)胞 蛋白質(zhì)組 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語說明10-11
• 前言11-16
• 研究現(xiàn)狀、成果11-14
• 研究目的、方法14-16
• 一、正常大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的分離、提純及超微結(jié)構(gòu)觀察16-26
• 1.1 材料和方法16-21
• 1.1.1 主要設(shè)備16
• 1.1.2 主要試劑16-17
• 1.1.3 主要溶液配制17-18
• 1.1.4 實驗動物18
• 1.1.5 方法步驟18-21
• 1.1.6 統(tǒng)計學(xué)處理21
• 1.2 結(jié)果21-24
• 1.2.1 新鮮分離的大鼠胰腺腺泡細(xì)胞21-22
• 1.2.2 原代細(xì)胞體外培養(yǎng) 12h的胰腺腺泡細(xì)胞22-23
• 1.2.3 臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活性23
• 1.2.4 胰腺腺泡細(xì)胞純化率23
• 1.2.5 透射電子顯微鏡技術(shù)觀察胰腺腺泡細(xì)胞23-24
• 1.3 討論24-25
• 1.4 小結(jié)25-26
• 二、清胰湯對SAP大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的保護(hù)作用26-42
• 2.1 材料和方法26-29
• 2.1.1 主要設(shè)備26
• 2.1.2 主要試劑26-27
• 2.1.3 主要溶液配制27
• 2.1.4 實驗動物27
• 2.1.5 方法步驟27-29
• 2.1.6 統(tǒng)計學(xué)處理29
• 2.2 結(jié)果29-38
• 2.2.1 各組各時間點血清淀粉酶測定29-30
• 2.2.2 各組各時間點血清脂肪酶測定30-31
• 2.2.3 各組胰腺腺泡細(xì)胞分離31-35
• 2.2.4 透射電子顯微鏡技術(shù)觀察胰腺腺泡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化35-38
• 2.3 討論38-41
• 2.3.1 聯(lián)合測定血清淀粉酶、血清脂肪酶的重要意義38-39
• 2.3.2 清胰湯對胰腺腺泡細(xì)胞的保護(hù)作用39-41
• 2.4 小結(jié)41-42
• 三、清胰湯對SAP大鼠胰腺腺泡細(xì)胞蛋白質(zhì)組的影響42-55
• 3.1 材料和方法42-49
• 3.1.1 主要設(shè)備42-43
• 3.1.2 主要試劑43-45
• 3.1.3 實驗材料45
• 3.1.4 方法步驟45-49
• 3.2 結(jié)果49-52
• 3.2.1 胰腺腺泡細(xì)胞蛋白質(zhì)的 2-DE電泳及圖譜分析49-51
• 3.2.2 差異點蛋白質(zhì)的MALDI-TOF-MS質(zhì)譜分析及網(wǎng)上檢索51-52
• 3.3 討論52-54
• 3.4 小結(jié)54-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-59
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明59-60
• 綜述 SAP相關(guān)細(xì)胞因子的作用機(jī)制60-73
• 綜述參考文獻(xiàn)65-73
• 致謝73-74
• 個人簡歷74

  本文關(guān)鍵詞：清胰湯對SAP大鼠胰腺腺泡細(xì)胞的保護(hù)作用及其蛋白質(zhì)組表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：429944