本文關(guān)鍵詞：將與皮膚組織塊共培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植至大鼠皮膚創(chuàng)面后對愈合效果的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定并與新生大鼠皮膚組織塊進(jìn)行共培養(yǎng)目的:在體外分離提取出大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),培養(yǎng),擴(kuò)增以后觀察其生長形態(tài)、測定生長曲線和對其表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,旨在培養(yǎng)出純度較高的BMSCs與新生大鼠皮膚組織塊進(jìn)行共培養(yǎng)。方法:1.經(jīng)過幾種不同方法的研究于對比,我們選取全骨髓貼壁培養(yǎng)法來進(jìn)行BMSCs的分離、培養(yǎng)和純化。在無菌條件下抽取健康SD大鼠(8周齡左右、約150g)股骨和脛骨的骨髓,離心后重懸細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),經(jīng)過換液和傳代去除掉其他細(xì)胞。得到純度較高,單一性的細(xì)胞。2.我們對分離出來的細(xì)胞貼壁生長的形態(tài)變化進(jìn)行觀察和記錄。然后選取第三代生長狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行了MTT法檢測細(xì)胞生長曲線,并繪制了生長曲線圖。3.我們分別應(yīng)用了細(xì)胞免疫熒光技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)來檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物CD34、CD44、CD45、CD105的表達(dá)情況。4.將新生大鼠的皮膚組織塊與P3-P5的BMSCs放入transwell共培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)。結(jié)果:1.細(xì)胞的生長形態(tài)觀察:細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶后24小時換液,以后3-4天換一次液,觀察可見原代細(xì)胞貼壁生長后呈現(xiàn)出圓形,梭形,星型等不規(guī)則形狀,隨著時間的增加細(xì)胞形態(tài)逐漸趨于一致并且集落生長,散在分布。2.細(xì)胞生長曲線測定:結(jié)果顯示生長曲線呈現(xiàn)出典型的“S“形,即潛伏適應(yīng)期、對數(shù)生長期和平臺期。3.細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測:我們所用的兩種方法結(jié)果顯示,CD44、CD105的陽性率表達(dá)非常高,CD45、CD34的陽性率表達(dá)很低。結(jié)論:1.通過全骨髓貼壁培養(yǎng)法成功分離提取出了大鼠BMSCs,并且P3-P5的BMSCs純度較高,活性較好。2.我們選取P3-P5生長狀態(tài)良好的BMSCs與新生大鼠的皮膚組織塊共培養(yǎng)后,用于第二部分的實驗研究。第二部分大鼠背部全層皮膚缺損模型制備并將共培養(yǎng)的細(xì)胞標(biāo)記后植入創(chuàng)面對愈合效果的作用研究目的:1.熟練掌握大鼠脊柱兩側(cè)全層皮膚缺損模型的構(gòu)建。2.大鼠的BMSCs與新生大鼠的皮膚組織塊共培養(yǎng)后對創(chuàng)面愈合的影響和單純BMSCs對創(chuàng)面愈合的影響進(jìn)行比較,觀察是否能加快創(chuàng)面愈合并探討其機(jī)制。為臨床上皮膚缺損的治療提供新的思路和方法。方法:3.大鼠背部全層皮膚缺損模型的制備:選取健康SD大鼠12只,水合氯醛腹腔注射麻醉,每只大鼠背部從頭至尾依次制作3組直徑為2cm全層皮膚缺損的圓形創(chuàng)面,脊柱兩側(cè)對稱分布,創(chuàng)面間隔為2cm。4.實驗分組:每只大鼠背部6個創(chuàng)面,脊柱兩側(cè)對稱分布,從頭至尾依次分為皮膚與BMSCs共培養(yǎng)組(A組),單純BMSCs組(B組),無菌PBS對照組(C組)。5.細(xì)胞移植:在創(chuàng)面中心和邊緣筋膜下A組注射和皮膚組織共培養(yǎng)的Brdu標(biāo)記的BMSCs,B組注射單純Brdu標(biāo)記的BMSCs,C組注射無菌PBS。A、B的移植細(xì)胞數(shù)為2X107個。6.創(chuàng)面的觀察:我們觀察模型創(chuàng)面3、7、14、21天的恢復(fù)情況,描述創(chuàng)面的滲出和肉芽組織增生情況并計算創(chuàng)面愈合指數(shù)(WCI)WCI=(1-處理后創(chuàng)面面積/原始創(chuàng)面面積)x100%。7.用免疫組織熒光的方法來檢測創(chuàng)面中Brd U、增殖細(xì)胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Integrinβ1(L-16)陽性率的表達(dá)來探討創(chuàng)面修復(fù)情況的不同。結(jié)果:1.創(chuàng)面觀察:我們觀察到創(chuàng)面的滲出和肉芽組織增生每組都有發(fā)生,三組的差距不是很明顯。但是測量創(chuàng)面面積,計算創(chuàng)面愈合指數(shù),用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析得到結(jié)果顯示3組之間的創(chuàng)面愈合速度是有差別的,其中A組的創(chuàng)面愈合速度是最快的,B組次之,C組最慢。2.免疫組織熒光結(jié)果:A、B兩組中可以見到Brd U標(biāo)記的BMSCs,C組中基本沒有。PCNA和Integrinβ1陽性細(xì)胞在A、B、C三組中都有表達(dá),其中A、B兩組要比C組陽性表達(dá)明顯。但兩者呈現(xiàn)出相反的趨勢,PCNA隨著天數(shù)的增加A組的陽性細(xì)胞比B組多,且每一組隨著天數(shù)的增加陽性表達(dá)也增加,Integrinβ1的陽性表達(dá)A組比B組少,且每一組隨著天數(shù)的增加陽性表達(dá)在減少。結(jié)論:新生大鼠的皮膚組織塊可以對BMSCs起到一定的作用,促使BMSCs在創(chuàng)面中更多的向皮膚細(xì)胞分化,讓其能夠更快更好的促進(jìn)創(chuàng)面的愈合。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 分離培養(yǎng) 表面標(biāo)志物 皮膚組織塊 共培養(yǎng) 全層皮膚缺損 BrdU標(biāo)記 創(chuàng)面愈合指數(shù) 免疫熒光技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R641
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 常用縮寫詞中英文對照表14-15
• 前言15-17
• 第一部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定并與新生鼠皮膚組織塊進(jìn)行共培養(yǎng)17-32
• 1 材料與方法17-24
• 1.1 實驗動物17
• 1.2 主要實驗儀器17
• 1.3 主要購買的實驗試劑17-18
• 1.4 主要實驗試劑的配置18-19
• 1.5 BMSCs分離和培養(yǎng)19-20
• 1.6 BMSCs的換液和傳代20-21
• 1.7 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察21
• 1.8 BMSCs生長曲線的測定21-22
• 1.9 BMSCs的免疫熒光染色鑒定22
• 1.10 BMSCs的流式細(xì)胞儀檢測22-23
• 1.11 提取新生大鼠的皮膚和BMSCs共培養(yǎng)23-24
• 2 結(jié)果24-28
• 2.1 BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察24-25
• 2.2 BMSCs生長曲線的測定25-26
• 2.3 BMSCs的免疫熒光染色鑒定26-27
• 2.4 BMSCs的表面標(biāo)志物流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果27-28
• 3 討論28-32
• 3.1 BMSCs的來源和應(yīng)用28
• 3.2 BMSCs的生物學(xué)特性以及移植治療的優(yōu)點28-29
• 3.3 BMSCs的分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增29-30
• 3.4 BMSCs的鑒定30
• 3.5 培養(yǎng)出的BMSCs和皮膚組織塊共培養(yǎng)30-32
• 第二部分 大鼠背部全層皮膚缺損模型制備并將共培養(yǎng)的細(xì)胞標(biāo)記后植入創(chuàng)面對愈合效果的作用研究32-45
• 1 材料與方法32-37
• 1.1 實驗動物32
• 1.2 主要實驗儀器32
• 1.3 主要購買的實驗試劑32-33
• 1.4 主要配置的實驗試劑33
• 1.5 用終濃度為 10umol/L的Brd U標(biāo)記BMSCs33-34
• 1.6 大鼠背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型的制備34
• 1.7 細(xì)胞移植和實驗分組34-35
• 1.8 細(xì)胞創(chuàng)面恢復(fù)情況的觀察35
• 1.9 組織病理學(xué)檢測35-36
• 1.10 統(tǒng)計學(xué)分析36-37
• 2 結(jié)果37-42
• 2.1 觀察創(chuàng)面滲出及肉芽組織增生情況37-38
• 2.2 創(chuàng)面愈合情況38-39
• 2.3 免疫熒光檢測結(jié)果39-42
• 3 討論42-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 致謝57-58
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果58-59
• 個人簡歷59

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 都義日,付小兵,李存保,孫同柱,方利君;表皮細(xì)胞生長因子在體誘導(dǎo)豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向皮膚組織分化作用的研究[J];創(chuàng)傷外科雜志;2005年02期

2 張超紀(jì),任華,杜振宗,馬國濤,劉洪生;成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)為血管內(nèi)皮樣細(xì)胞[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年10期

3 鐘曉紅;王明剛;趙李平;高新宇;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在糖尿病創(chuàng)面中向皮膚腺上皮的分化[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年06期

4 方利君,付小兵,孫同柱,李建福,程飚,楊銀輝,王玉新,王通;在體誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為表皮細(xì)胞的初步觀察[J];中華創(chuàng)傷雜志;2003年04期

5 方利君,付小兵,孫同柱,李建福,程飚,楊銀輝,王玉新;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的實驗研究[J];中華燒傷雜志;2003年01期

6 方利君,付小兵,程飚,孫同柱,李建福,曹榮,王玉新;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞參與皮脂腺導(dǎo)管構(gòu)成的初步研究[J];中華外科雜志;2004年18期

  本文關(guān)鍵詞：將與皮膚組織塊共培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植至大鼠皮膚創(chuàng)面后對愈合效果的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：412522