本文關鍵詞：針刺對PERK-CHOP介導的STZ-DM大鼠胰腺細胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的(1)探討PERK-CHOP信號通路對STZ-DM大鼠胰腺ERS的影響;(2)探討PERK-CHOP信號通路介導的ERS與針刺改善STZ-DM大鼠胰腺細胞凋亡之間的關系。方法(1)SPF級(220±20)g雄性SD大鼠80只,適應性喂養(yǎng)1周,隨機選取10只作為空白對照組,用普通飼料喂養(yǎng)4周。其余70只用高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周加低劑量STZ腹腔注射制備STZ-DM大鼠模型,RBG≥16.7mmol·L-1為STZ-DM大鼠(30只),再隨機分為3組,分別為模型對照組、針刺治療組和二甲雙胍組,每組10只。針刺治療組:取后三里(足三里)、內(nèi)庭、胰俞,其中后三里和內(nèi)庭穴接電針治療,每天1次,7次為1個療程,共治療4個療程;二甲雙胍組:100mg·kg-1鹽酸二甲雙胍灌胃,每天1次,療程與針刺治療組平行;模型對照組和空白對照組固定同針刺治療組,不做其它任何處理。干預期間均采用普通飼料喂養(yǎng)。(2)干預結束后測4組大鼠的隨機血糖及體重,采用10%水合氯醛腹腔麻醉,置冰碟上快速無菌取出胰體、胰尾置液氮中保存。每組另取1只大鼠胰體、胰尾置2.0%戊二醛中保存。采用實時熒光PCR和Western blot檢測各組大鼠胰腺組織的CHOP、PERK、Bcl-2、Bax m RNA表達和蛋白含量,用透射電鏡觀察胰腺超微結構。采用SPSS17.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(X±s)表示,兩組間均數(shù)比較采用t檢驗,多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA),組間兩兩比較采用LSD檢驗。結果(1)隨機血糖:高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周聯(lián)合低劑量STZ誘導成模后大鼠RBG(26.213±4.637mmol·L-1)顯著高于空白對照組(7.180±0.329mmol·L-1)(P0.01),提示造模成功。干預4周后,模型對照組RBG(26.303±3.593mmol·L-1)較治療前(25.567±5.189mmol·L-1)有所升高(P0.05);空白對照組RBG(7.460±0.868mmol·L-1)較治療前有所升高(P0.05);針刺治療組RBG(21.833±5.369mmol·L-1)較治療前(25.167±4.930mmol·L-1)明顯降低(P0.05);二甲雙胍組RBG(22.938±5.292mmol·L-1)較治療前(26.750±4.407mmol·L-1)也明顯降低(P0.05),與針刺治療組無統(tǒng)計學差異(P0.05)。提示針刺治療有降低STZ-DM大鼠RBG作用。(2)胰腺內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激:干預4周后,模型對照組大鼠胰腺組織PERK m RNA表達(2.638±0.274)顯著高于空白對照組(1.000±0.066),針刺治療組(1.627±0.118)與模型對照組相比顯著性下降(P0.01),但仍高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),與二甲雙胍組(1.673±0.204)相比無顯著差異(P0.05);模型對照組PERK蛋白表達(1.164±0.274)與空白對照組(0.465±0.089)相比顯著升高(P0.01),針刺治療組(0.783±0.117)與模型對照組相比明顯降低(P0.05),與空白對照組(0.465±0.089)和二甲雙胍組(0.711±0.333)相比差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型對照組大鼠胰腺組織CHOP m RNA表達(3.067±0.171)顯著高于空白對照組(1.003±0.064),差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),針刺治療組(1.472±0.153)與模型對照組相比顯著下降(P0.01),但仍高于空白對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),與二甲雙胍組(1.5988±0.172)相比無統(tǒng)計學意義;模型對照組CHOP蛋白表達(1.720±0.748)與空白對照組(0.916±0.453)相比明顯升高(P0.05),針刺治療組(1.071±0.700)與模型對照組相比有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),與空白對照組和二甲雙胍組(1.068±0.790)相比差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。以上結果提示STZ-DM大鼠胰腺組織存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,針刺可干預PERK-CHOP信號通路來改善胰腺組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激。(3)胰腺細胞凋亡:干預4周后,模型對照組大鼠胰腺細胞Bax m RNA表達(2.102±0.784)與空白對照組(1.005±0.120)相比顯著升高(P0.01)。針刺治療組(1.518±0.203)與模型對照組相比顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),與空白對照組相比仍有所升高(P0.01),與二甲雙胍組(1.650±0.488)相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型對照組Bax蛋白表達(2.102±0.784)與空白對照組(0.795±0.313)相比顯著升高(P0.01)。針刺治療組(1.095±0.049)與模型對照組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),與空白對照組和二甲雙胍組(1.072±0.212)相比均無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型對照組大鼠胰腺細胞Bcl-2 m RNA表達(0.398±0.058)與空白對照組(1.005±0.094)相比顯著降低(P0.01)。針刺治療組(0.642±0.083)與模型對照組相比顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),但仍低于空白對照組(P0.01),與二甲雙胍組(0.620±0.049)相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型對照組Bcl-2蛋白表達(0.412±0.250)與空白對照組(1.003±0.369)相比顯著降低(P0.01)。針刺治療組(1.400±0.472)與模型對照組相比顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),與空白對照組和二甲雙胍組(1.119±0.073)相比均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結果提示STZ-DM大鼠的胰腺細胞出現(xiàn)凋亡,針刺可以抑制胰腺細胞凋亡。(4)電鏡下胰腺組織細胞的形態(tài)學觀察:干預4周后,通過投射電鏡對STZ-DM大鼠胰腺細微結構進行觀察,結果空白對照組可見豐富線粒體,呈圓形狀,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富,呈條索狀,細胞漿周圍有多量聚集成堆的酶原顆粒;模型對照組僅見少量線粒體,且大部分出現(xiàn)空泡變性、嵴距離明顯擴張或斷裂,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、斷裂,核染色質(zhì)有邊集濃染現(xiàn)象,酶原顆粒明顯減少;針刺治療組線粒體數(shù)目減少,少數(shù)出現(xiàn)不同程度的空泡變性、腫脹、嵴擴張,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)略有擴張、變形,少數(shù)出現(xiàn)斷裂,排列稍紊亂,酶原顆粒散在分布在細胞漿周圍;二甲雙胍組可見部分線粒體空泡變性、嵴斷裂,細胞核邊集,少量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張、斷裂,酶原顆粒略減少。以上結果提示針刺治療可有效保護STZ-DM大鼠胰腺組織的細胞形態(tài)。結論(1)STZ-DM大鼠胰腺組織存在著ERS,PERK-CHOP信號通路可能是誘導ERS的途徑;(2)針刺可以降低STZ-DM大鼠的RBG,并能有效保護胰腺組織的形態(tài),抑制胰腺組織的細胞凋亡;(3)針刺可以通過調(diào)節(jié)STZ-DM大鼠PERK-CHOP信號通路改善胰腺組織ERS,從而抑制胰腺組織的細胞凋亡。
【關鍵詞】：針刺 STZ-DM大鼠 信號通路 細胞凋亡
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R245
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 英文縮略詞表15-17
• 1 前言17-21
• 2 材料與方法21-33
• 2.1 實驗動物21
• 2.2 實驗試劑與儀器21-23
• 2.3 動物篩選與分組23-24
• 2.4 動物模型的制備24-25
• 2.5 干預方法25
• 2.6 取材25-26
• 2.7 基因表達檢測26-28
• 2.8 蛋白表達檢測28-31
• 2.9 光鏡下胰腺組織的形態(tài)學觀察31
• 2.10 圖片灰度值分析31-32
• 2.11 實驗結果統(tǒng)計方法與處理32-33
• 3 結果33-50
• 4 討論50-63
• 4.1 古代醫(yī)家對消渴病的認識50-52
• 4.2 中醫(yī)學對消渴病的治療52-54
• 4.3 現(xiàn)代中醫(yī)對T2DM的研究54-55
• 4.4 針灸治療T2DM的現(xiàn)代實驗研究55-58
• 4.5 模型的建立和實驗觀察指標的選擇58-61
• 4.6 選穴的理論依據(jù)61-62
• 4.7 西藥對照的選用依據(jù)62-63
• 5 結果分析63-66
• 6 結論66-67
• 7 不足與展望67-68
• 8 參考文獻68-74
• 綜述74-80
• 參考文獻77-80
• 個人簡歷80-81
• 致謝81

【參考文獻】

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  本文關鍵詞：針刺對PERK-CHOP介導的STZ-DM大鼠胰腺細胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：413033