發(fā)布時(shí)間：2017-05-31 21:14

  本文關(guān)鍵詞：組織工程真皮移植對(duì)急性創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的嚴(yán)重創(chuàng)傷、大面積燒傷等原因?qū)е氯珜悠つw缺損是臨床常見的病癥之一。傳統(tǒng)處理方式是創(chuàng)面清創(chuàng)后,通過換藥,待創(chuàng)面肉芽組織生長(zhǎng)良好后再行植皮或皮瓣手術(shù)閉合創(chuàng)面。傳統(tǒng)換藥治療肉芽生長(zhǎng)緩慢,需經(jīng)很長(zhǎng)時(shí)間才能達(dá)到創(chuàng)面愈合,常給患者帶來極大的疼痛,并且增加醫(yī)生的工作量。然而,由于刃厚皮移植構(gòu)建的皮膚常缺乏完整的真皮結(jié)構(gòu),難以完成真皮組織的重建,全厚皮、中厚皮或皮瓣移植造成的新創(chuàng)面及產(chǎn)生的瘢痕往往使患者難以接受,此外皮膚缺損面積較大時(shí),將會(huì)面臨皮源匱乏,導(dǎo)致供給不足的窘境。皮膚組織工程學(xué)的應(yīng)用與發(fā)展為改善皮片愈合質(zhì)量及解決皮源匱乏提供了嶄新的思路和方法,而真皮替代物成為皮膚組織工程學(xué)研究的熱點(diǎn)。真皮替代物在皮膚重建過程中具有重要作用,其可增強(qiáng)創(chuàng)面愈合后皮膚彈性、柔韌性及機(jī)械耐磨性,減少瘢痕增生、控制創(chuàng)面收縮。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)組織工程皮膚需要有真皮支架的支持方能實(shí)現(xiàn)表皮功能的改善和真皮結(jié)構(gòu)的重建。一方面,真皮支架作為創(chuàng)面修復(fù)的真皮模板,可引導(dǎo)成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的長(zhǎng)入和增殖,形成新生的真皮組織,從而促進(jìn)真皮結(jié)構(gòu)重建；另外一方面,真皮支架可以通過表皮-真皮之間的相互作用,為表皮層提供營(yíng)養(yǎng)成分,確保表皮的成活率,同時(shí)也為表皮提供良好的信號(hào)促進(jìn)其成熟和分化。國(guó)外研究者已經(jīng)成功地開發(fā)出了多種真皮替代物,其中美國(guó)Integra是迄今為止較為理想的人工皮,其在深度燒傷創(chuàng)面的修復(fù)及嚴(yán)重創(chuàng)傷等領(lǐng)域,取得了一定的臨床效果。但這些商品化的組織工程皮膚價(jià)格昂貴,且來源有限,無(wú)法在我國(guó)臨床應(yīng)用推廣。 本實(shí)驗(yàn)選用的Lando雙層人工皮(深圳齊康醫(yī)療器械有限公司),與美國(guó)Integra具有相似的結(jié)構(gòu),上層是由符合YY0484-2004標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的雙組分加成型硫化硅橡膠制成硅橡膠層；下層為濕態(tài)膠原海綿層,由符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的I型膠原(牛跟腱中提取)與符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)硫酸軟骨素(供注射用)交聯(lián)制成。是否此人工皮可快速血管化,為移植自體皮提供充足的養(yǎng)分,并為后期創(chuàng)面的修復(fù)奠定良好基礎(chǔ)呢?本實(shí)驗(yàn)將建立一種藏豬皮膚全層缺損創(chuàng)面的動(dòng)物模型,用于雙層人工皮的移植。我們對(duì)雙層人工皮血管化的影響進(jìn)行了預(yù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,移植后3d、7d人工皮雙層結(jié)構(gòu)尚未分離,且與創(chuàng)面基底粘連不緊密。若此時(shí)強(qiáng)行揭去上層硅膠膜,不僅會(huì)損壞創(chuàng)基新生的血管組織,而且會(huì)使真皮支架完整性遭到破壞。移植后14d、21d人工皮存活良好,雙層結(jié)構(gòu)已分離,揭去上層硅膠膜可見肉芽組織,人工皮與創(chuàng)面基底組織粘連十分緊密。在此基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)對(duì)雙層人工皮植入后在創(chuàng)面血管化的影響行進(jìn)一步觀察,觀察其移植后14d、21d聯(lián)合自體刃厚皮移植對(duì)創(chuàng)面修復(fù)的療效,并推測(cè)最佳植皮時(shí)機(jī)點(diǎn),為其今后應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。材料和方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：24只一級(jí)藏豬(由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供),體重為30-35Kg,雌雄不限。術(shù)前12 h禁食,4 h禁水,稱重,采用速眠新110.1 ml/kg肌注,3%戊巴比妥鈉1ml/kg腹腔注射聯(lián)合麻醉。動(dòng)物麻醉后,將動(dòng)物固定在手術(shù)臺(tái)上,于每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部正中線兩側(cè)分別由前向后切取3個(gè)邊長(zhǎng)5cm深達(dá)肌肉筋膜的正方形全層皮膚缺損創(chuàng)面,每側(cè)創(chuàng)面距離背部正中線至少3cm,且同側(cè)創(chuàng)面間距達(dá)5cm以上。創(chuàng)面徹底清創(chuàng)止血后,用含慶大霉素的無(wú)菌生理鹽水反復(fù)沖洗創(chuàng)面,生理鹽水紗布覆蓋備用。本實(shí)驗(yàn)采用同體自身對(duì)照,右側(cè)創(chuàng)面行雙層人工皮移植術(shù)(實(shí)驗(yàn)組),左側(cè)創(chuàng)面以凡士林油紗覆蓋(對(duì)照組)。實(shí)驗(yàn)組將雙層人工皮硅橡膠膜面朝上,放入剛制備好的右側(cè)創(chuàng)面中,然后將其與創(chuàng)緣皮膚間斷縫合固定,并預(yù)留10cm長(zhǎng)的縫線,打包包扎。對(duì)照組直接覆蓋凡士林紗布,其余操作同實(shí)驗(yàn)組。其中8只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于移植后創(chuàng)面血管化觀察,分別于I期移植術(shù)后第3d、7d、14d和21d隨機(jī)處死2只,行創(chuàng)面大體觀察,并取材行HE染色、Masson三色染色,免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中CD31的表達(dá)并計(jì)數(shù)新生血管數(shù)目。另外16只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于Ⅰ期術(shù)后14d、21d聯(lián)合自體皮片移植對(duì)創(chuàng)面修復(fù)療效的觀察,分別于14d、21dⅡ期聯(lián)合植皮術(shù)后2W、4W、8W、12w隨機(jī)處死2只動(dòng)物,觀察植皮術(shù)后2w皮片成活情況及術(shù)后2W、4W、8W、12w皮片收縮及質(zhì)地情況,并取材行HE染色、Masson三色染色,免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本中CD31表達(dá)并計(jì)數(shù)新生血管數(shù)目。結(jié)果1.創(chuàng)面大體觀察I期移植術(shù)后,總體上實(shí)驗(yàn)組創(chuàng)面較對(duì)照組干燥,感染發(fā)生率較低,肉芽組織生長(zhǎng)較好且平整,創(chuàng)緣皮膚無(wú)明顯紅腫。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第3d,未見肉芽組織生長(zhǎng)；第7d肉芽組織逐漸增多,真皮支架呈淡紅色,形態(tài)保持完好,但與創(chuàng)基組織粘連不緊密；第14d人工皮雙層結(jié)構(gòu)部分分離,硅膠膜易揭去,支架與創(chuàng)基組織緊密結(jié)合,可見鮮紅色肉芽組織幾乎填滿整個(gè)支架,肉芽組織平整；第21d人工皮雙層結(jié)構(gòu)已經(jīng)完全分離,肉芽組織尚平整,看不到真皮支架,觸之不易出血。14d Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后2w,實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大部分皮片存活良好,部分創(chuàng)面皮緣可見少許壞死,實(shí)驗(yàn)組皮片存活率高于對(duì)照組,但組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。21d Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后2w實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組皮片存活較不理想,對(duì)照組皮片存活率高于實(shí)驗(yàn)組,組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與實(shí)驗(yàn)組14dⅡ期聯(lián)合植皮術(shù)后皮片存活率比較,21d Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后的實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組組間比較統(tǒng)計(jì)學(xué)均有差異。隨時(shí)間延長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)組14d Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后皮片收縮較不明顯,表面較光滑,皮片質(zhì)地較柔軟,可推移,具有較好的彈性及柔韌性； 對(duì)照組14dⅡ期聯(lián)合植皮術(shù)后和實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組21d Ⅱ期植皮術(shù)后的皮膚收縮明顯,部分創(chuàng)面可見明顯褶皺,表面彈性欠佳,不易推移。2.組織形態(tài)學(xué)觀察Ⅰ期移植術(shù)后,總體上實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組組織充血水腫及炎癥反應(yīng)較輕,成纖維細(xì)胞長(zhǎng)入較早,毛細(xì)血管生長(zhǎng)方式更接近正常皮膚,大部分平行于創(chuàng)面生長(zhǎng),成纖維細(xì)胞及膠原纖維排列也更規(guī)整。實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后第3d支架底部即可見成纖維細(xì)胞長(zhǎng)入,未見細(xì)胞外基質(zhì)分泌；第7d較多成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)于支架孔隙中并分泌細(xì)胞外基質(zhì)成分,于交界區(qū)支架中還可見到新生的毛細(xì)血管；第14d支架內(nèi)見大量成纖維細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),新形成的毛細(xì)血管已非常接近支架材料的表面；術(shù)后第21d支架被上層的肉芽組織及下層的肌肉組織夾被,形成三明治樣結(jié)構(gòu),支架原有的孔隙已被成纖維細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)所填充,炎癥細(xì)胞較前略有減少,成纖維細(xì)胞及膠原排列較規(guī)整,可見支架部分?jǐn)嗔�、變�?xì)等降解情況。Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后,14d Ⅱ期聯(lián)合植皮術(shù)后實(shí)驗(yàn)組表皮分化較對(duì)照組及21dⅡ期聯(lián)合植皮術(shù)后實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組好,可見更多釘突結(jié)構(gòu),表皮與真皮連接更緊密,膠原纖維較粗大且排列有序,未見結(jié)節(jié)狀瘢痕組織結(jié)構(gòu),膠原沉積和分布形態(tài)與正常組織更類似,但均無(wú)毛囊、汗腺、皮脂腺腺體等皮膚附件存在。實(shí)驗(yàn)組14dⅡ期聯(lián)合植皮術(shù)后2w表皮已成活,可見較多釘突結(jié)構(gòu),支架可見斷裂、變細(xì)等降解情況。術(shù)后4w,表皮-真皮連接處連續(xù)規(guī)則,可見分化良好的釘突結(jié)構(gòu),膠原纖維沉積明顯,支架繼續(xù)降解。術(shù)后第8w,膠原纖維排列有序,炎癥細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及新生血管逐漸減少,支架基本完全降解。術(shù)后12w,大量表皮細(xì)胞長(zhǎng)入真皮層內(nèi),表皮層與真皮層緊密連接,真皮內(nèi)膠原纖維排列有序,未見結(jié)節(jié)狀瘢痕組織結(jié)構(gòu)。3.免疫組化觀察并計(jì)數(shù)新生血管數(shù)目I期移植術(shù)后第3d,實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均未見CD31明顯表達(dá),第7d兩組CD31表達(dá)開始明顯升高,實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后第14d達(dá)到高峰,對(duì)照組于第21d達(dá)到最高,除實(shí)驗(yàn)組第7d、21d新生血管數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)差異外(P0.05),兩組組內(nèi)其他時(shí)相點(diǎn)間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組新生血管數(shù)于術(shù)后第7d、14d數(shù)均高于對(duì)照組,術(shù)后第21d低于對(duì)照組,組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。14d、21dⅡ 期植皮術(shù)后實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組CD31表達(dá)陽(yáng)性的新生血管數(shù)目隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸減少,其中實(shí)驗(yàn)組14d Ⅱ期移植術(shù)后減少最快,對(duì)照組21d Ⅱ期移植術(shù)后減少最慢,每組組內(nèi)各時(shí)相點(diǎn)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與實(shí)驗(yàn)組14d Ⅱ期植皮術(shù)后同一時(shí)相點(diǎn)比較,除實(shí)驗(yàn)組21d Ⅱ期植皮術(shù)后2w組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P0.05),其余組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)結(jié)論1、與傳統(tǒng)油紗相比,雙層人工皮具有良好的生物相容性和生物降解性,上層硅膠膜可控制水分蒸發(fā)、防止細(xì)菌感染,下層支架早期可誘導(dǎo)自身的修復(fù)細(xì)胞長(zhǎng)入,獲得充分、快速的血管化速率。2、人工皮I期移植術(shù)后第14d為聯(lián)合植皮較佳時(shí)機(jī),此時(shí)聯(lián)合植皮可明顯改善創(chuàng)面愈合后皮片的質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】：雙層人工皮 肉芽組織 炎癥反應(yīng) 膠原纖維 降解 重塑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R641
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 前言16-21
• 1.1 引言21-22
• 1.2 材料和方法22-35
• 1.3 結(jié)果35-50
• 1.4 討論50-53
• 1.5 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 成果59-60
• 致謝60-62

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：組織工程真皮移植對(duì)急性創(chuàng)面修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：410674