本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素在高糖高脂誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪性肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用高糖高脂飲食誘導(dǎo)建立非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠模型,通過檢測(cè)血漿內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和CD68(巨噬細(xì)胞標(biāo)記物)以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum,ERS)重要相關(guān)因子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)的表達(dá),觀察大鼠肝細(xì)胞凋亡水平變化特點(diǎn),探討LPS在大鼠NASH發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。方法:1.建立NASH大鼠模型及分組:30只雄性SD大鼠均給予標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)飼料,自由進(jìn)食飲水三天后,隨機(jī)分為9周組:Synthetic diet+saline組(n=5)、Synthetic diet+LPS組(n=5)、Regular diet+LPS組(n=5)和Regular diet+saline組(n=5),另外設(shè)立5周組:Synthetic diet組(n=5)和Regular diet組(n=5),并在第5周末將大鼠進(jìn)行麻醉后處死以觀察Synthetic diet對(duì)大鼠肝臟影響。Synthetic diet配方為68.75%普通飼料+20%豬油+10%蔗糖+1%膽固醇+0.25%膽酸。自第6周開始,9周組動(dòng)物在相同條件下隔日皮下注射LPS 0.5mg/Kg或相同劑量的生理鹽水,所有大鼠自由進(jìn)食與飲水。在實(shí)驗(yàn)第9周末,1%戊巴比妥鈉3ml/Kg腹腔注射麻醉動(dòng)物,無菌無熱原條件下取腹主動(dòng)脈血,3500rpm離心后取血漿置于 70℃冰箱凍存?zhèn)溆�。取部分肝左葉10%福爾馬林固定,石蠟包埋,5μm切片,余肝組織置于㧟70℃冰箱備用。2.5周組肝組織切片HE染色,在光鏡下觀察肝臟病理學(xué)變化。采用放免法測(cè)定9周組血漿TNF-α水平;賴氏2、4-二硝基苯肼比色法測(cè)定9周組血漿ALT活性;鱟試劑法測(cè)定9周組血漿LPS水平。采用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定9周組肝臟CD68(巨噬細(xì)胞標(biāo)記物)的表達(dá)。采用TUNEL法測(cè)定9周組肝細(xì)胞凋亡水平。采用Western blot法測(cè)定9周組肝組織GRP78蛋白表達(dá)量。結(jié)果:1.HE染色在光鏡下可見5周正常對(duì)照組肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細(xì)胞核圓位于中央,呈條索狀排列整齊,以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝細(xì)胞內(nèi)未見脂滴,而5周高糖高脂飲食組肝細(xì)胞體積增大,可見小泡脂滴,細(xì)胞輪廓模糊,肝細(xì)胞呈輕度脂肪變性。2.9周組中Synthetic diet+saline組血漿LPS、ALT、TNF-α水平顯著高于Regular diet+saline組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);Synthetic diet組經(jīng)LPS處理后,血漿LPS、ALT、TNF-α水平顯著高于Regular diet+LPS組和Synthetic diet+saline組(p0.05);而在Regular diet組經(jīng)LPS處理后,與Regular diet+saline組相比血漿LPS、ALT與TNF-α水平無明顯變化(p0.05)。3.9周組中Regular diet+saline組肝臟較少見CD68陽性單核巨噬細(xì)胞浸潤,當(dāng)其經(jīng)LPS處理后CD68陽性細(xì)胞無明顯增多(p0.05);Synthetic diet+LPS組(0.140±0.018)可見大量巨噬細(xì)胞浸潤,CD68陽性表達(dá)量與Regular diet+LPS組(0.053±0.018)、Synthetic diet+saline(0.100±0.017)組相比均有顯著差異(p0.05)。4.9周組中Synthetic diet組經(jīng)LPS處理后GRP78蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào),要顯著高于Regular diet+LPS組和Synthetic diet+saline組(p0.05);Synthetic diet+saline組高于Regular diet+saline組(p0.05);Regular diet組經(jīng)LPS處理后與Regular diet+saline組相比無顯著差異(p0.05)。5.在9周正常對(duì)照組偶見少量的肝細(xì)胞凋亡,經(jīng)LPS處理后,與正常對(duì)照組相比可以看到肝細(xì)胞凋亡數(shù)量無明顯變化,凋亡率無顯著差異(p0.05);Synthetic diet+saline組肝細(xì)胞凋亡增多,凋亡率升高,經(jīng)LPS處理后肝細(xì)胞凋亡率達(dá)到最高值(57.08±6.21),與Synthetic diet+saline組(32.10±3.64)、Regular diet+LPS組(7.08±2.64)相比均差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.經(jīng)Pearson’s相關(guān)性分析,LPS與ALT表達(dá)明顯正相關(guān),r=0.78,p0.05;CD68與TNF-α表達(dá)明顯相關(guān),r=0.64,p0.05,GRP78表達(dá)量與肝細(xì)胞凋亡數(shù)呈明顯正相關(guān),r=0.77,p0.05。結(jié)論:1.高脂高糖飲食可以誘導(dǎo)建立NASH大鼠模型;2.LPS可對(duì)肝臟造成“二次打擊”,促進(jìn)了NASH的發(fā)生發(fā)展;3.LPS可激活大鼠肝臟巨噬細(xì)胞釋放大量促炎因子TNF-α;4.在NASH大鼠肝組織中存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),促炎因子TNF-α可能是引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的重要因子,而且內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與了肝細(xì)胞凋亡這一病理過程。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝炎 LPS TNF-α 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 肝細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R575.1
【目錄】：

• 摘要6-9
• abstract9-12
• 前言12-14
• 1 材料與方法14-20
• 1.1 材料14-15
• 1.2 主要試劑的配制15-16
• 1.3 分組與樣本采集方法16
• 1.4 指標(biāo)檢測(cè)16-19
• 1.5 圖像采集分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理19-20
• 2 結(jié)果20-26
• 2.1 肝臟組織學(xué)觀察20
• 2.2 生化指標(biāo)檢測(cè)20-21
• 2.3 免疫組化檢測(cè)21-22
• 2.4 GRP78蛋白表達(dá)結(jié)果22-23
• 2.5 肝細(xì)胞凋亡變化23-25
• 2.6 相關(guān)性分析25-26
• 3 討論26-32
• 3.1 本實(shí)驗(yàn)大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)26
• 3.2 NASH的發(fā)病機(jī)制26-27
• 3.3 LPS引起炎癥反應(yīng)27-28
• 3.4 炎癥與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激28-30
• 3.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與肝細(xì)胞凋亡30-32
• 4 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-38
• 綜述38-50
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 致謝50-51
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果51-52
• 個(gè)人簡歷52

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本文編號(hào)：382654