發(fā)布時間：2017-05-20 10:23

  本文關(guān)鍵詞：豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的優(yōu)化分選及生物學(xué)特性鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：聯(lián)合采用免疫磁珠及流式細(xì)胞術(shù)分選豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞(VSELs);鑒定其生物學(xué)特性,并探尋體外培養(yǎng)、擴增豬骨髓VSELs的方法。方法：常規(guī)消毒、麻醉后穿刺豬髂后上棘獲取骨髓,使用紅細(xì)胞裂解法獲得豬骨髓單個核細(xì)胞,運用分別耦合了CD133和Lin抗體的磁珠進行免疫磁珠分選,對所得的CD133+細(xì)胞群和Lin-細(xì)胞群標(biāo)記熒光抗體CD133、CD45及Lin,進一步通過流式細(xì)胞術(shù)分選獲得VSELs,使用統(tǒng)計學(xué)方法分析兩種分選方法的效率,并探討聯(lián)合分選的價值；使用光學(xué)顯微鏡及透射電鏡觀察豬骨髓VSELs的形態(tài)特征和超微結(jié)構(gòu),運用堿性磷酸酶染色和免疫熒光染色的方法鑒定其多能干細(xì)胞標(biāo)志的表達；同時采用條件培養(yǎng)基對豬骨髓VSELs進行培養(yǎng)擴增,觀察VSELs的貼壁及增殖情況。結(jié)果：聯(lián)合采用免疫磁珠與流式細(xì)胞分選術(shù)能夠高效的分選出豬骨髓VSELs,且使用CD133陽性分選較Lin陰性分選效率更高,但聯(lián)合分選有費用高昂、細(xì)胞容易污染等缺點；豬骨髓VSELs約占總單個核細(xì)胞數(shù)量的0.01%-0.03%,該細(xì)胞體積較小、形態(tài)均一,呈二倍體核型、核大而細(xì)胞質(zhì)少、核質(zhì)比高,能夠表達多能抗原標(biāo)志Oct-4、Nanog和Sox2,同時堿性磷酸酶染色陽性；VSELs經(jīng)條件培養(yǎng)基培養(yǎng)后3-4小時可見細(xì)胞貼壁,培養(yǎng)2-3周仍無明顯增殖。結(jié)論：免疫磁珠及流式細(xì)胞術(shù)能夠快速的從豬骨髓中分選出數(shù)量較多、純度較高的VSELs；該細(xì)胞能表達胚胎樣干細(xì)胞的特異性抗原標(biāo)志,其生物學(xué)特性類似于胚胎干細(xì)胞,不易于體外培養(yǎng)、擴增。
【關(guān)鍵詞】：優(yōu)化分選 極小胚胎樣干細(xì)胞 生物學(xué)特性 培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-9
• 英文縮寫詞表9-11
• 第一章 前言11-12
• 第二章 極小胚胎樣干細(xì)胞簡介12-16
• 2.1 概述12
• 2.2 VSELs的生物學(xué)特性12-16
• 2.2.1 VSELs的分離與純化12-13
• 2.2.2 VSELs的起源與分布13-14
• 2.2.3 VSELs的細(xì)胞學(xué)特性14
• 2.2.4 VSELs的多向分化潛能14
• 2.2.5 VSELs的動員和歸巢14-15
• 2.2.6 VSELs與腫瘤15
• 2.2.7 VSELs的體外擴增15-16
• 2.2.8 VSELs的應(yīng)用前景16
• 第三章 材料與方法16-25
• 3.1 主要實驗儀器與試劑16-20
• 3.1.1 實驗動物16-17
• 3.1.2 主要實驗儀器17
• 3.1.3 實驗器械17
• 3.1.4 實驗試劑及試劑配制17-20
• 3.1.4.1 實驗試劑17-19
• 3.1.4.2 試劑配制19-20
• 3.2 實驗方法20-25
• 3.2.1 豬骨髓總單個核細(xì)胞的分離20-21
• 3.2.1.1 紅細(xì)胞裂解法分離豬骨髓單個核細(xì)胞20-21
• 3.2.1.2 密度梯度離心法分離豬骨髓單個核細(xì)胞21
• 3.2.2 MACS分選CD133+及Lin-細(xì)胞群21-22
• 3.2.2.1 CD133免疫磁珠陽性分選法21-22
• 3.2.2.2 Lin免疫磁珠陰性分選法22
• 3.2.3 FACS分選獲得豬骨髓VSELs22-23
• 3.2.4 豬骨髓VSELs的體外培養(yǎng)23
• 3.2.5 堿性磷酸酶檢測豬骨髓VSELs的活性23
• 3.2.6 細(xì)胞免疫化學(xué)鑒定豬骨髓VSELs23-24
• 3.2.7 透射電鏡觀察豬骨髓VSELs24
• 3.2.8 數(shù)據(jù)分析24-25
• 第四章 結(jié)果25-31
• 4.1 VSELs的形態(tài)特征及體外培養(yǎng)25-26
• 4.2 免疫磁珠分選效果26-28
• 4.3 流式分選28-29
• 4.4 透射電鏡觀察VSELs的超微結(jié)構(gòu)29
• 4.5 堿性磷酸酶活性檢測29-30
• 4.6 細(xì)胞免疫熒光檢測30-31
• 第五章 討論31-35
• 5.1 免疫磁珠聯(lián)合流式細(xì)胞術(shù)優(yōu)化分選的價值31-32
• 5.2 VSELs分選的注意事項32
• 5.3 Oct-4與VSELs的多向分化潛能32-33
• 5.4 VSELs保持靜止的機制33
• 5.5 VSELs治療心臟退行性疾病的優(yōu)勢33-34
• 5.6 面臨的問題與展望34-35
• 第六章 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-40
• 綜述40-49
• 參考文獻46-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50-51

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郝麗平,仲玉英,汪志,徐俊偉,賈東平;仔豬骨髓內(nèi)紅細(xì)胞增殖特點[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1995年10期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 屠琛琛;豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外自然培養(yǎng)及不同誘導(dǎo)方式下分化和旁分泌功能的實驗研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 金凱;豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的優(yōu)化分選及生物學(xué)特性鑒定[D];揚州大學(xué);2015年

2 孫加斌;豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的分離、鑒定及生物學(xué)特性探究[D];揚州大學(xué);2014年

3 陳忍霞;感染PRRSV斷奶仔豬骨髓CD8a基因表達研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 李莉;HP-PRRSV HuN4株對仔豬骨髓感染與損傷機制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

  本文關(guān)鍵詞：豬骨髓極小胚胎樣干細(xì)胞的優(yōu)化分選及生物學(xué)特性鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：381382