本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素抑制血管重構(gòu)的影響及機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究促紅細(xì)胞生成素(EPO)對(duì)血管新生內(nèi)膜及其膠原分泌的影響,探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子?1(TGF-?1)在其中的作用,并闡述TGF-?1/MMP-2(基質(zhì)金屬蛋白酶-2)信號(hào)傳導(dǎo)參與的作用機(jī)制。通過大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷動(dòng)物模型,觀察EPO抑制血管內(nèi)皮損傷后血管重構(gòu)的影響,進(jìn)一步闡述再狹窄相關(guān)發(fā)病機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供新思路。方法:1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模將清潔級(jí)健康SD大鼠75只(雌雄不限),按照隨機(jī)分配原則將大鼠分為五組,對(duì)照組,損傷組(球囊損傷頸動(dòng)脈組),EPO組(損傷組基礎(chǔ)上行EPO(3000U/kg)腹腔注射干預(yù)),TGF-?1組(EPO組基礎(chǔ)上頸動(dòng)脈外膜普朗尼克凝膠固定TGF-?1(0.5mg/ml)干預(yù)),MMP-2組(EPO組基礎(chǔ)上頸動(dòng)脈外膜普朗尼克凝膠固定MMP-2(0.5mg/ml)干預(yù))。采用PTCA球囊損傷大鼠單側(cè)頸動(dòng)脈的方法制造模型。每組大鼠按不同的時(shí)相點(diǎn)分別于術(shù)后第1、7、14天麻醉后處死。術(shù)前心尖內(nèi)取血,并將術(shù)側(cè)大鼠頸動(dòng)脈切取2cm,所有血管組織標(biāo)本取出后,用于相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。2、實(shí)驗(yàn)指標(biāo)檢測(cè)大鼠血管組織行常規(guī)切片和HE染色,觀察組織病理學(xué)變化。行ELISA法檢測(cè)大鼠血清中VEGF和TNF-α水平,選用Masson染色方法對(duì)膠原纖維進(jìn)行染色。應(yīng)用免疫組化染色檢測(cè)血管組織中的TGF-?1、MMP-2的表達(dá)。采用Real-time PCR法檢測(cè)eNOS mRNA水平。采用Western blot法檢測(cè)P-Akt和T-Akt蛋白的表達(dá)。3、病理結(jié)果分析采用數(shù)字圖像分析系統(tǒng)對(duì)血管標(biāo)本形態(tài)學(xué)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)數(shù)分析。應(yīng)用膠原纖維表達(dá)面積與其血管層面積的百分比作為膠原密度。經(jīng)免疫組化評(píng)分方法作為TGF-?1、MMP-2的表達(dá)結(jié)果,應(yīng)用目的基因的相對(duì)表達(dá)量作為eNOS mRNA的水平。用凝膠成像系統(tǒng)成像分析,以光密度相對(duì)灰度值作為P-Akt和T-Akt蛋白的表達(dá)結(jié)果。結(jié)果:1、血管組織新生內(nèi)膜厚度及面積比結(jié)果:①對(duì)照組之間各時(shí)間點(diǎn)無顯著差異(p0.05);②損傷組對(duì)比對(duì)照組,內(nèi)膜損傷程度增加,新生內(nèi)膜及面積比增加,并隨時(shí)間增加而加劇,各時(shí)間點(diǎn)差異有顯著性(p0.05);③epo組對(duì)比損傷組新生內(nèi)膜厚度明顯減輕,面積比明顯減小;但7d與14depo組之間無明顯差異(p0.05);③tgf-?1組、mmp-2組對(duì)比epo組新生內(nèi)膜厚度及面積比增加,與epo組比較有明顯差異(p0.05);2、血清vegf和tnf-α表達(dá)結(jié)果:①對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異(p0.05);②1d損傷組vegf及tnf-α表達(dá)即刻升高,至7d后仍維持在較高水平,至14d明顯增高;epo組各時(shí)間點(diǎn)水平較對(duì)照組升高,但與損傷組比較明顯降低,有明顯差異(p0.05);③tgf-?1組、mmp-2組在損傷即刻與損傷組無明顯差別,至7d、14d后,兩組vegf及tnf-α較epo組表達(dá)升高,差異具有顯著性(p0.05):3、血管組織膠原纖維表達(dá)結(jié)果①對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)無明顯差異(p0.05);②1d損傷組膠原表達(dá)減低,7d再次升高,14d達(dá)到峰值;epo組各時(shí)間點(diǎn)較損傷組值減低,差異有顯著性(p0.05);③14d損傷組、14dtgf-?1組較對(duì)照組染色面積值有升高,14dtgf-?1組中較14depo組升高明顯,且差異有顯著性(p0.05)。4、血管組織tgf-?1免疫組化染色評(píng)分:①對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)可見tgf-?1少量表達(dá),無明顯差異(p0.05);損傷組、tgf-?1組該因子表達(dá)增強(qiáng),與對(duì)照組比較,差異有顯著性(p0.05);②損傷組中tgf-?1表達(dá)在7d,14d表達(dá)開始明顯增加,與1d比較有差異顯著性(p0.05)。③epo組各時(shí)間點(diǎn)較損傷組表達(dá)減輕,差異有顯著性(p0.05);④tgf-?1組tgf-?1表達(dá)明顯增加,染色加深,且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),表達(dá)逐漸增加,與損傷組同一時(shí)間點(diǎn)比較,有差異顯著性(p0.05)。5、血管組織mmp-2免疫組化染色評(píng)分:①對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)少量,無明顯差異(p0.05);②損傷組、tgf-?1組、mmp-2組與對(duì)照組比較,mmp-2值表達(dá)有差異顯著性(p0.05);③但同一時(shí)間點(diǎn)tgf-?1組與mmp-2組間mmp-2的表達(dá)無顯著差異(p0.05)。④epo組各時(shí)間點(diǎn)較損傷組表達(dá)減輕,差異有顯著性(p0.05);6、血管組織enosmrna的水平結(jié)果:①損傷組enosmrna水平較對(duì)照組降低,兩者比較有明顯差異(p0.05);②epo組enosmrna水平較損傷組明顯增加,差異有顯著性(p0.05);③TGF-?1及MMP-2組較EPO組,eNOS mRNA水平減低,但以TGF-?1組減低明顯,且差異有顯著性(P0.05)7、血管組織P-Akt和T-Akt蛋白表達(dá)結(jié)果:①損傷組中P-Akt和T-Akt表達(dá)與對(duì)照組之間比較差異不明顯(P0.05)。②EPO組中以P-Akt表達(dá)增加最為明顯,與損傷組比較,差異具有顯著性(P0.05);③TGF-?1組中P-Akt的表達(dá)減低明顯,與EPO組比較差異具有顯著性,但T-Akt表達(dá)無明顯變化(P0.05)。④MMP-2組中P-Akt表達(dá)與EPO組降低,差異具有顯著性,但T-Akt表達(dá)較EPO組無明顯降低,差異具有顯著性。結(jié)論:1、損傷組TGF-?1、MMP-2、VEGF、TNF-α等細(xì)胞因子的表達(dá)是增強(qiáng)的。2、EPO組的新生內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜與中膜面積比,及TGF-?1、MMP-2、VEGF、TNF-α等細(xì)胞因子表達(dá)較損傷組是減弱的。3、膠原纖維能在再狹窄的發(fā)病過程中起重要作用。4、促紅細(xì)胞生成素能夠通過激活PI3-K/Akt信號(hào)通路,增強(qiáng)e NOS表達(dá),調(diào)控下游信號(hào)分子表達(dá)來抑制新生血管內(nèi)膜增生。
【關(guān)鍵詞】：促紅細(xì)胞生成素 球囊損傷 再狹窄 TGF-?1 MMP-2 eNOS Akt
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R541.4
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 2.1.2 藥品及試劑14-15
• 2.1.3 主要儀器及器材15
• 2.2 方法15-22
• 2.2.1 動(dòng)物分組15-16
• 2.2.2 大鼠頸動(dòng)脈脈損傷模型的建立16
• 2.2.3 標(biāo)本的獲取及處理16-17
• 2.2.4 血管組織標(biāo)本形態(tài)學(xué)17
• 2.2.5 ELISA法檢測(cè)大鼠血清中VEGF和TNF-α的水平17-18
• 2.2.6 馬森氏膠原纖維染色18-19
• 2.2.7 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)TGF-?1 和MMP-2 的表達(dá)19
• 2.2.8 RT-PCR檢測(cè)組織中eNOS mRNA的水平19-20
• 2.2.9 Western Blot法檢測(cè)血管組織中P-Akt和T-Akt的表達(dá)20-21
• 2.2.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及處理21-22
• 第3章 結(jié)果22-35
• 3.1 大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型構(gòu)建結(jié)果22
• 3.2 血管組織病理學(xué)評(píng)價(jià)22-25
• 3.2.1 光鏡下血管組織形態(tài)學(xué)大體觀察：22
• 3.2.2 血管組織新生內(nèi)膜厚度的結(jié)果分析22-23
• 3.2.3 血管組織新生內(nèi)膜與中膜面積比的結(jié)果分析23-25
• 3.3 ELISA法檢測(cè)VEGF和TNF-α水平結(jié)果分析25
• 3.4 膠原纖維染色結(jié)果分析25-29
• 3.5 血管組織免疫組化染色評(píng)分29-33
• 3.5.1 TGF-?1 免疫組化染色評(píng)分29-30
• 3.5.2 MMP-2 免疫組化染色評(píng)分30-33
• 3.6 大鼠血管組織中eNOS mRNA的結(jié)果分析33-34
• 3.7 大鼠血管組織中P-Akt和T-Akt的表達(dá)結(jié)果分析34-35
• 第4章 討論35-42
• 4.1 關(guān)于大鼠頸動(dòng)脈損傷模型的建立35-36
• 4.2 再狹窄概述36-37
• 4.3 細(xì)胞因子在再狹窄過程中的作用37-39
• 4.4 膠原在再狹窄發(fā)生過程中的作用39-40
• 4.5 促紅細(xì)胞生成素在抑制血管重構(gòu)過程中的作用40-42
• 第5章 結(jié)論42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述48-54
• 參考文獻(xiàn)52-54

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：促紅細(xì)胞生成素抑制血管重構(gòu)的影響及機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：364885