本文關(guān)鍵詞：自噬對乳化異氟烷誘導神經(jīng)干細胞損傷的調(diào)節(jié)作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討與JNK通路相關(guān)的全身麻醉藥物乳化異氟烷(EI)對原代培養(yǎng)的SD大鼠胚胎神經(jīng)干細胞增殖的影響以及自噬調(diào)控在此種細胞增殖影響中發(fā)揮的效應。方法購得從妊娠期第14天的SD大鼠皮層中分離出來的原代胚胎神經(jīng)干細胞,種植于96孔板后置于溫箱中培養(yǎng),傳至3-5代后,未分化表型保持在85%以上,1.建立體外培養(yǎng)胚胎神經(jīng)干細胞接受乳化異氟烷處理的模型:步驟(1)同批細胞隨機分為6組(n=8),正常組(N組),脂肪乳組(F組),乳化異氟烷處理組(EI1組,EI2組,EI3組,EI濃度分別為8.12m M,9.80m M,12.04m M),20u M SP600125+9.80m M EI組(EI2SP組)。細胞處理12小時后,立即采用噻唑蘭(MTT)法分別檢測6組胚胎神經(jīng)干細胞的細胞活力;分別檢測凋亡細胞的比率以及JNK和Caspase3的蛋白表達量;步驟(2)選取步驟(1)中的N組、F組、EI2組,分別在6,12,24小時使用GFP-LC3B轉(zhuǎn)染技術(shù)檢測自噬現(xiàn)象的發(fā)生,檢測Beclin-1和LC3B蛋白表達量的變化。2.建立自噬干擾下乳化異氟烷處理后的細胞模型:分為5組(n=8),正常組(N組),脂肪乳組(F組),EI2組,10m M 3-MA+EI2組(EI2M組),25n M BAF+EI2組(EI2B組)。12小時穩(wěn)定培養(yǎng)后,立即采用MTT法檢測5組細胞胚胎神經(jīng)干細胞的細胞活力;分別檢測凋亡細胞的比率的變化。結(jié)果1.(1)與N組比較,F組各項指標無明顯差異,EI組細胞增殖的抑制率以及細胞凋亡率明顯升高(P0.001),EI組明顯上調(diào)Caspase3的表達量(P0.05),EI組內(nèi)三個濃度之間比較,細胞增殖的抑制率(P0.01),凋亡率以及Caspase3的蛋白表達水平(P0.05)之間的差異均有統(tǒng)計學意義;與EI2組比較,EI2SP組細胞增殖的抑制率明顯下降(P0.05),EI2SP組細胞的凋亡率明顯降低(P0.001),EI2SP組明顯下調(diào)Caspase3的表達量(P0.05)。(2)選取的N組、F組、EI2組在6,12,24小時分別觀察檢測的結(jié)果顯示,三個時間段內(nèi),與N組和F組比較,EI2組中細胞LC3B和Beclin-1的蛋白表達水平顯著上升(P0.05),GFP-LC3B的熒光標記量明顯上升(P0.001)。2.與N組,F組比較,EI2組細胞增殖的抑制率明顯升高(P0.01),EI2組中細胞的凋亡率顯著上升(P0.001);與EI2組比較,EI2M組細胞增殖的抑制率明顯升高(P0.01),細胞的凋亡率顯著上調(diào)(P0.05);與EI2組比較,EI2B組細胞增殖的抑制率以及細胞凋亡率顯著上升(P0.01)。結(jié)論JNK通路參與促進了乳化異氟烷引起的大鼠胚胎神經(jīng)干細胞的增殖抑制,此過程中自噬的發(fā)生對神經(jīng)干細胞的凋亡具有一定的保護作用。
【關(guān)鍵詞】：乳化異氟烷 神經(jīng)干細胞 JNK通路 自噬 凋亡
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R614
【目錄】：

• 縮略語與符號6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 JNK通 路相關(guān)的乳化異氟烷對神經(jīng)干細胞增殖影響的機制研究15-30
• 1.材料和試劑15-17
• 2.實驗方法17-22
• 3.統(tǒng)計分析22-23
• 4.實驗結(jié)果23-30
• 第二部分 自噬調(diào)控在乳化異氟烷引起的神經(jīng)干細胞損傷中發(fā)揮作用的研究30-38
• 1.材料和試劑30-31
• 2.實驗方法31-33
• 3.統(tǒng)計分析33-34
• 4.實驗結(jié)果34-38
• 討論38-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-46
• 附錄46-47
• 本人簡歷46
• 在校期間的研究成果目錄46-47
• 致謝47-48
• 綜述 異氟醚對發(fā)育神經(jīng)毒性的研究進展48-56
• 參考文獻54-56

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本文編號：353731