本文關(guān)鍵詞：低聲壓次聲對(duì)大鼠顱腦損傷后膠質(zhì)纖維酸性蛋白及生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumatic brain injury, TBI),又稱(chēng)腦外傷,是由外傷引起的腦組織結(jié)構(gòu)和功能?chē)?yán)重?fù)p害的疾病,多發(fā)生于交通事故、摔傷、火器傷等意外事故和自然災(zāi)害等情況,高致殘和致死率給社會(huì)及家庭帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和醫(yī)療護(hù)理負(fù)擔(dān)。腦外傷并非單一的腦組織損傷,它包括外力直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)而引起的原發(fā)性損傷,以及在原發(fā)性損傷的基礎(chǔ)之上,隨著傷后的炎癥反應(yīng)、病理生理變化及出血、腦水腫等因素所引起的繼發(fā)性損傷。其中腦外傷后繼發(fā)性顱腦損傷是造成神經(jīng)元死亡和神經(jīng)功能障礙的主要原因,從而導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶和運(yùn)動(dòng)功能障礙等嚴(yán)重后遺癥。如何預(yù)防和治療腦外傷以及如何最大程度地促進(jìn)神經(jīng)功能的修復(fù),降低腦外傷后功能障礙的發(fā)生率已成為當(dāng)今的研究熱點(diǎn)。目前,對(duì)腦外傷的治療,臨床上多采用防治腦水腫、降低顱內(nèi)壓和冬眠低溫等保守治療方法,然而中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷修復(fù)效果并不滿意�？祻�(fù)治療的早期介入已日益受到廣大醫(yī)務(wù)人員重視,并且已取得了明顯的療效。積極尋求有效的促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的干預(yù)方法,已成為現(xiàn)在康復(fù)醫(yī)學(xué)的研究熱點(diǎn),而且具有相當(dāng)大的社會(huì)意義及可觀的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。物理治療是康復(fù)治療的重要手段之一,次聲作為眾多物理因子中的一種,在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中現(xiàn)階段應(yīng)用仍較少。次聲,即頻率為0.0001Hz-20 Hz的機(jī)械振動(dòng)波,在自然界中廣泛存在。次聲的頻率低,波長(zhǎng)長(zhǎng),故在傳播過(guò)程中不易被介質(zhì)吸收,因此具有很強(qiáng)的穿透力,且在大氣中具有衰減小,傳播遠(yuǎn)的特性。次聲的生物學(xué)效應(yīng)與其強(qiáng)度有關(guān),研究證明,高于90dB的次聲對(duì)生物體有損害作用,而強(qiáng)度低于90dB的次聲,即低聲壓級(jí)次聲,具有腦保護(hù)及促進(jìn)神經(jīng)再生的作用。生理學(xué)研究結(jié)果表明,人體內(nèi)器官存在一個(gè)固定的振動(dòng)頻率,頭部為8-12HZ、內(nèi)臟為4-8 HZ,心臟為4-6 HZ,這些固有頻率都在次聲頻率范圍內(nèi),可引起機(jī)體產(chǎn)生共振作用。近年有學(xué)者發(fā)現(xiàn),低聲壓級(jí)次聲可與生物體產(chǎn)生緩慢而輕柔的共振作用,其還可以產(chǎn)生力學(xué)、熱學(xué)、光學(xué)、電學(xué)等多種物理效應(yīng),因此,地聲壓級(jí)次聲次聲不僅不會(huì)對(duì)生物體產(chǎn)生損傷,還可以對(duì)生物產(chǎn)生深部按摩作用,增強(qiáng)機(jī)體抗氧化系統(tǒng)酶活性,增高代償反應(yīng)。由于次聲的頻率很低,所以大氣對(duì)次聲波的吸收系數(shù)很小,因而其穿透力極強(qiáng),可傳播至極遠(yuǎn)處而能量衰減很小,因此它的穿透力較強(qiáng),能在人體內(nèi)很好的傳播,可穿透致病態(tài)組織(細(xì)胞)內(nèi),使病態(tài)組織內(nèi)閉塞的血管重新開(kāi)放,改善病態(tài)組織內(nèi)的血液循環(huán),為促進(jìn)氧氣、吞噬細(xì)胞、免疫球蛋白等物質(zhì)向病變組織輸送提供了有利條件。本實(shí)驗(yàn)小組前期細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),低聲壓級(jí)次聲可促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞存活素的表達(dá),從而促進(jìn)BMSCs的增殖,抑制其凋亡；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),應(yīng)用低聲壓級(jí)次聲作用于腦缺血再灌注大鼠可刺激胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)分泌和促進(jìn)大鼠腦缺血周?chē)切文z質(zhì)細(xì)胞表達(dá),從而使大鼠梗死面積縮小,神經(jīng)癥狀明顯改善。故據(jù)此推測(cè),低聲壓級(jí)次聲可能對(duì)腦外傷也具有治療作用。前期的研究中發(fā)現(xiàn)連續(xù)作用7天可達(dá)到較好的治療效果,故本研究選擇連續(xù)干預(yù)7天。然而次聲作用后的影響和生物效應(yīng)與次聲的參數(shù)有關(guān),每天作用時(shí)間的長(zhǎng)短不同,所得的結(jié)果也不同。故本次實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究了次聲在60min、90min、 120min干預(yù)時(shí)間對(duì)大鼠腦外傷后作用影響。顱腦損傷后,腦組織內(nèi)神經(jīng)元標(biāo)志物會(huì)發(fā)生改變,通過(guò)觀察這些標(biāo)志物的變化可以評(píng)估顱腦損傷后修復(fù)的程度。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein GFAP)是星形膠質(zhì)細(xì)胞骨架的中間絲蛋白,在星形細(xì)胞中有豐富而特異性的表達(dá),參與神經(jīng)損傷的修復(fù)與再生,是星形細(xì)胞活化的客觀標(biāo)志蛋白之一,對(duì)于維持星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定至關(guān)重要,并決定著星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)損傷反應(yīng)的程度,是星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物。星形膠質(zhì)細(xì)胞可分泌多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,如神經(jīng)生長(zhǎng)因子、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子等,從而保護(hù)受損神經(jīng)元,增加突觸的聯(lián)系,促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)及神經(jīng)功能恢復(fù)。星形膠質(zhì)細(xì)胞還可以維持離子平衡、調(diào)節(jié)能量代謝、對(duì)抗氧化應(yīng)激。生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(Growth associated protein-43 GAP-43)是一種神經(jīng)特異性的蛋白質(zhì),對(duì)神經(jīng)纖維生長(zhǎng)、發(fā)育、再生以及突觸功能維持和遞質(zhì)釋放都起重要作用。GAP-43在神經(jīng)發(fā)育和損傷修復(fù)過(guò)程中高水平表達(dá),可調(diào)節(jié)軸突延伸作用,改變細(xì)胞形態(tài),對(duì)軸突生長(zhǎng)和突觸建立有重要作用,被認(rèn)為是神經(jīng)元發(fā)育和再生的內(nèi)在決定因子。目的本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)大鼠顱腦外傷后予以低聲壓級(jí)次聲干預(yù),觀察大鼠mNSS評(píng)分及結(jié)合病理組織學(xué)、免疫組織化學(xué)染色法觀察大鼠顱腦外傷后膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)及生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43(GAP-43)表達(dá)的影響,探討次聲對(duì)大鼠腦損傷后神經(jīng)組織保護(hù)修復(fù)的影響及相關(guān)治療機(jī)理。方法1.動(dòng)物及分組健康Sprague-Dawley雄性大鼠30只,體重200-250 g,室溫、常濕飼養(yǎng),普通飼料,自由飲水。將30只SD大鼠隨機(jī)分為5組,分別為假手術(shù)組(n=6)、模型組(n=6)、次聲60min組(n=6)、次聲90min組(n=6)和次聲120min組(n=6)。2.腦外傷動(dòng)物模型的制備采用Feeney法制作顱腦外傷模型,用1%戊巴比妥鈉(30mg/kg)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射麻醉后,將大鼠頭部固定于解剖板上,常規(guī)備皮、消毒、鋪巾,沿頭正中切開(kāi)頭皮,剝離骨膜,暴露左側(cè)頂骨,于冠狀縫后1.5mm、矢狀縫旁2.5mm鉆一骨孔,咬除顱骨,直至形成一直徑為5mm骨窗,顯露硬腦膜。在硬腦膜上放置一與骨孔大小吻合的墊片,用20g砝碼于30cm高處沿外周導(dǎo)管墜落,直接撞擊撞墊進(jìn)行一次打擊(撞擊能量為600g·cm),造成左頂葉腦挫裂傷。打擊后用雙氧水、生理鹽水反復(fù)沖洗傷口。硬膜外置明膠海綿止血,骨蠟封閉骨窗,縫合頭皮。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于37℃恒溫板復(fù)溫,致麻醉清醒后放回籠中。假手術(shù)組除了不造成顱腦外傷外,其余步驟同模型組及次聲組。3.納入及剔除標(biāo)準(zhǔn)：在規(guī)定缺血時(shí)限內(nèi)(術(shù)后2-3h)按Zea Longa5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：0分,無(wú)神經(jīng)損傷癥狀；1分,不能伸展對(duì)側(cè)前爪；2分,向外側(cè)劃圈；3分,向?qū)?cè)傾倒；4分,不能自發(fā)行走,意識(shí)喪失。1分以上視為造模成功。如未出現(xiàn)右側(cè)肢體癱瘓(0分)或已死亡的動(dòng)物被剔除。隨機(jī)補(bǔ)充剔除標(biāo)本,保證最終納入分析的動(dòng)物共30只。4.處理方法次聲組按次聲干預(yù)時(shí)間的長(zhǎng)短隨機(jī)分成60分鐘組、90分鐘組、120分鐘組,分別給予次聲干預(yù)60分鐘、90分鐘、120分鐘,連續(xù)7天。模型組干預(yù)過(guò)程中除不開(kāi)機(jī)外,其余過(guò)程同次聲組。假手術(shù)組只打開(kāi)顱窗,不損傷腦組織,不進(jìn)行次聲干預(yù)。5.療效評(píng)價(jià)術(shù)后第7天對(duì)納入分析的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分(modified Neurological Severity Scores, mNSS)進(jìn)行評(píng)分,最后取腦片行HE染色及免疫組織化學(xué)染色,觀察各組大鼠腦損傷周?chē)M織病理改變及膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein, GFAP)及生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43 (Growth associated protein-43)表達(dá)的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,各組數(shù)據(jù)以(x±s)表示,各組mNSS評(píng)分和IOD值采用方差分析,組間兩兩比較比較采用LSD法,以P0.05作為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果次聲3組與模型組的mNSS評(píng)分均存在差異(P0.05),次聲三組間的mNSS評(píng)分無(wú)差異(P0.05)；免疫組化結(jié)果：①五組間的GFAP表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),3個(gè)次聲組GFAP的IOD值與模型組比較均存在差異(P0.05),3個(gè)次聲組間GFAP表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。②五組間的GAP-43表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),3個(gè)次聲組GAP-43的IOD值與模型組比較均存在差異(P0.05),3個(gè)次聲組間GAP-43表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)結(jié)論1、低聲壓級(jí)次聲治療能夠顯著降低神經(jīng)功能評(píng)定總分,促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。2、低聲壓級(jí)次聲可促進(jìn)大鼠腦外傷區(qū)周?chē)M織GFAP的表達(dá),促使星形細(xì)胞活化,參與神經(jīng)損傷的修復(fù)與再生。3、低聲壓級(jí)次聲可促進(jìn)大鼠腦外傷區(qū)周?chē)M織GAP-43的表達(dá),對(duì)軸突生長(zhǎng)和突觸建立有重要作用。4、根據(jù)以上研究結(jié)果,我們推測(cè)：①低聲壓級(jí)次聲每天作用時(shí)間大于60min時(shí),大鼠可產(chǎn)生適應(yīng)現(xiàn)象。5、低聲壓級(jí)次聲對(duì)腦外傷后大鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：次聲 腦外傷 膠質(zhì)纖維酸性蛋白 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R651.15
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 第一章 研究背景16-26
• 第一節(jié) 腦損傷后神經(jīng)可塑性16-21
• 一、神經(jīng)可塑性理論的發(fā)展16-17
• 二、腦可塑性的相關(guān)機(jī)制17-19
• 三、康復(fù)治療對(duì)腦損傷后神經(jīng)可塑性的影響19-21
• 四、結(jié)語(yǔ)21
• 第二節(jié) 次聲對(duì)腦的生物學(xué)效應(yīng)21-26
• 一、次聲生物學(xué)效應(yīng)的研究現(xiàn)狀22
• 二、次聲對(duì)大腦生物學(xué)效應(yīng)的研究現(xiàn)狀22-24
• 三、存在問(wèn)題24-25
• 四、展望25-26
• 第二章 實(shí)驗(yàn)部分26-47
• 第一節(jié) 低聲壓次聲對(duì)腦外傷后大鼠行為學(xué)的影響26-33
• 1 材料及方法26-29
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析29
• 3 結(jié)果29-30
• 4 討論30-33
• 第二節(jié) 低聲壓次聲對(duì)大鼠腦外傷后GFAP和GAP-43表達(dá)的影響33-47
• 1 材料及方法34-38
• 2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析38
• 3 結(jié)果38-42
• 4 討論42-47
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 全文總結(jié)55-56
• 附錄56-57
• 附圖57-59
• 碩士期間論文發(fā)表情況59-60
• 致謝60-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：低聲壓次聲對(duì)大鼠顱腦損傷后膠質(zhì)纖維酸性蛋白及生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：353082