發(fā)布時間：2017-05-02 18:03

  本文關(guān)鍵詞：eNOS解偶聯(lián)與模擬潛艇逃生大鼠肺動脈內(nèi)皮損傷的關(guān)系及血小板活化的干預(yù)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]隨著潛艇逃生技術(shù)的發(fā)展,各國海軍模擬潛艇逃生技術(shù)在向更深的海域前進,而阻礙其前進的障礙之一就是減壓病的氣泡損傷。減壓病的機理：人體每下潛10m,大致相當于增加一個大氣的壓力。機體在高壓力的環(huán)境下,肺泡內(nèi)的各種氣體分壓增高,并平衡于吸入壓縮空氣中各種氣體的分壓相。肺泡內(nèi)的氣體分壓高于血液中的氣體分壓,因而相應(yīng)地增加了氣體在血液中的溶解量。當人體由高氣壓環(huán)境快速減壓,體內(nèi)壓力超過外界總氣壓較多,于是溶解于血液或組織內(nèi)的氣體在幾秒至幾分鐘內(nèi)游離為氣相,并以氣泡形式聚積,阻塞于組織和血液中；大部分的02及CO2可迅速被血漿內(nèi)成分如：血紅蛋白所吸收,僅少數(shù)以物理狀態(tài)游離于體液中,而氮氣是惰性氣體不能被組織所吸收,可長期以氣泡狀態(tài)存在。氣泡可聚集在血管內(nèi)形成栓塞,阻礙血液循環(huán)。并可通過氣泡與血管內(nèi)皮細胞的直接接觸引起血管內(nèi)皮細胞功能障礙,內(nèi)皮依賴的血管舒張能力降低,導(dǎo)致遠端組織缺血、水腫及出血,排氮障礙。并有文獻報道氣泡可激活血小板,引起血小板活化聚集,即氣泡介導(dǎo)的血小板活化bubble-induced platelet aggregation (BIPA)從而進一步阻塞血管,是形成減壓病的重要機制。益肺活血顆粒(Yifei Houxue granule,YFHXG)是董建華院士根據(jù)臨床治療經(jīng)驗擬定,主要用于治療慢性阻塞性肺疾病(COPD)及肺動脈高壓(PAH),方劑中黃芪、黨參可補益全身之氣,川芎、桃仁、赤芍、紅花等則有活血化瘀之功效�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明川穹根莖中可提取分離出一種生物堿單體：四甲基吡嗪,即川芎嗪,是臨床效果公認的活血化瘀中藥提取物。川芎嗪可抑制血小板聚集和降低血小板活性、增加冠狀動脈和腦血管血流、降低血液粘度、改善微循環(huán)及血液流變性等,具有擴張血管的作用�？紤]模擬潛艇逃生大鼠患減壓病機制中存在BIPA,基于該制劑有活血作用,我們采用該方劑研究其對減壓病是否存在干預(yù)作用。國內(nèi)外學(xué)者普遍認為,不安全減壓可導(dǎo)致血管及組織內(nèi)氣泡形成。相關(guān)研究表明不論氣泡直徑是否大于血管管徑、無論氣泡數(shù)目多少,它的流向、流速及流態(tài)均取決于血管的功能狀態(tài)。氣泡作為一種流體,在血流、血壓的作用下,可變形通過各種管徑、各種走形的血管,繼而隨著血液循環(huán)。只有當血管功能障礙導(dǎo)致血管痙攣閉鎖和血液停滯,才引起氣泡無出路。當血壓的作用力小于血管閉合時,氣泡呈靜止狀態(tài),導(dǎo)致減壓病的發(fā)生。因此,我們推測減壓病可影響血管舒張能力。血管舒張分為內(nèi)皮依賴性血管舒張及非內(nèi)皮依賴性血管舒張。內(nèi)皮依賴性血管舒張可由乙酰膽堿、緩激肽等刺激引起,主要介導(dǎo)生理刺激下引起的血管舒張。NO是內(nèi)皮依賴性血管舒張的重要因子。NO由一氧化氮合成酶(NOS)合成,NOS包括內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS)三型,nNOS為神經(jīng)型,多位于神經(jīng)元細胞；iNOS為誘導(dǎo)型,在炎癥的病理狀態(tài)下可誘導(dǎo)生成;eNOS在血管內(nèi)皮細胞中穩(wěn)定表達,可合成生理需要量NO,eNOS在二聚體形態(tài)下將左旋精氨酸轉(zhuǎn)化為NO, NO是內(nèi)皮依賴性血管舒張的重要因子。NO由一氧化氮合成酶(NOS)合成,eNOS在血管內(nèi)皮細胞中穩(wěn)定表達,可合成生理需要量NO, eNOS在二聚體形態(tài)下將左旋精氨酸轉(zhuǎn)化為NO,當eNOS解離為單體時則不能正常合成NO,而生成大量超氧陰離子02-,02-和NO反應(yīng)生成大量ONOO-,對血管組織中的蛋白進行了氮化修飾,改變信號途徑,直接和間接介導(dǎo)NO的細胞毒性效應(yīng)。目前研究中尚未探討減壓病中血管功能的損傷是否與eNOS解偶聯(lián)相關(guān),本研究對其進行初步探討。[方法]實驗動物選用SD大鼠,隨機分為5組,(1)空白對照組：將30只大鼠置于0.3m3的加壓艙,用于小型動物復(fù)現(xiàn)DCS,不予加壓處理,停留65min,持續(xù)通入空氣,維持二氧化碳(CO2)水平低于300ppm,艙內(nèi)濕度維持于40%-60%,溫度維持27-30℃。大鼠在艙內(nèi)可自由活動并通過環(huán)閉路電視顯示、記錄系統(tǒng),觀察大鼠艙內(nèi)行為。(2)模型組(DCS)：將30只大鼠置于與對照組相同的加壓艙內(nèi)設(shè)置相同的溫度、濕度。以100kpa/min的速度加壓艙內(nèi)空氣至600kpa(相當于60msw)維持60min,并持續(xù)通入空氣,維持C02水平低于300ppm,并以相同速度減至常壓。(3)低劑量YFHXG組：DCS模型制作+YFHXG(0.165g/kg),將30只大鼠按照劑量喂服益肺活血顆粒0.165g/kg,每日兩次,連續(xù)喂服,1周后將30只大鼠按照DCS組方式進行疾病模型制造。(4)中劑量YFHXG組：DCS模型制作+YFHXG(0.33g/kg),將30只大鼠按照劑量喂服益肺活血顆粒0.33g/kg,每日兩次,連續(xù)喂服,1周后將30只大鼠按照DCS組方式進行疾病模型制造。(5)高劑量YFHXG組：DCS模型制作+YFHXG (0.66g/kg),將30只大鼠按照劑量喂服益肺活血顆粒0.66g/kg,每日兩次,連續(xù)喂服,1周后將30只大鼠按照DCS組方式進行疾病模型制造。分別記錄每組大鼠患減壓病及死亡的數(shù)量,將每組存活大鼠行腹主動脈采血,采用流式細胞檢測法檢測每組大鼠血小板活化情況,放射免疫法檢測血清中6-keto-PGF(lalpha)和TXB2水平,在麻醉下取存活大鼠肺組織,行肺免疫熒光染色,觀察血小板肺內(nèi)聚集情況,剝離肺動脈組織采用免疫熒光染色檢測組織因子在肺動脈內(nèi)的表達量。將DCS組存活大鼠及對照組大鼠麻醉后剝離肺動脈,檢測離體肺動脈內(nèi)皮依賴的血管舒張力,采用western blot免疫印跡方法檢測肺動脈組織中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表達、解離情況以及肺動脈組織中各蛋白硝基化水平,行離體肺動脈超氧化物陰離子探針(DHE)染色檢測活性氧ROS形成情況。[結(jié)果]在血小板活化方面,空白組與DCS組及低、中、高劑量YFHXG組,DCS患病率及死亡率沒有差異(P0.05)。流式細胞顯示,與空白對照組比較,YFHXG組與DCS組血小板活化率明顯升高(P0.05)；而與DCS組比較,YFHXG組血小板活化率有所減低,并且呈藥物濃度梯度減低(P0.05)。免疫熒光顯示：與對照組比較,DCS組與YFHXG組中肺組織血小板聚集明顯增加,并且益肺活血顆粒對DCS引起的血小板聚集有抑制作用。放射免疫提示：與空白對照組比較,YFHXG組與DCS組大鼠血清中TXB2水平明顯升高,PGI2水平下降,TXB2/PGI2比值明顯升高(P0.05)；而與DCS組比較,YFHXG組TXB2/PGI2比值有所減低,并且呈藥物濃度梯度減低(P0.05)。在eNOS解偶聯(lián)方面,DCS組存活大鼠肺動脈內(nèi)皮依賴的血管舒張能力明顯下降;eNOS表達量：DCS組及對照組無明顯差異,但DCS組較對照組eNOS單體/二聚體比例明顯升高；DCS組肺動脈組織各蛋白酪氨酸硝基化水平顯著高于對照組；DHE染色見DCS組肺動脈中ROS生成量明顯高于對照組。[結(jié)論]通過上述實驗研究及結(jié)論,發(fā)現(xiàn)模擬潛艇逃生過程中不安全減壓致血管內(nèi)氣泡生成,導(dǎo)致減壓病發(fā)生。使大鼠肺動脈出現(xiàn)內(nèi)皮依賴血管舒張功能減弱,肺動脈中eNOS二聚體解離為單體,NO生成減少,ROS合成增加。同時DCS模型大鼠中出現(xiàn)大量血小板活化,TXB2/PGI2比值升高,肺組織中出現(xiàn)大量血小板聚集,但肺動脈中組織因子表達無變化。同時益肺活血顆�？梢种艱CS模型大鼠血小板活化及肺內(nèi)聚集,并降低TXB2/PGI2比值。通過本次研究我們得到以下結(jié)論：(1) 模擬潛艇逃生大鼠,可出現(xiàn)內(nèi)皮依賴性血管舒張功能障礙,其發(fā)生機制與eNOS解偶聯(lián)相關(guān)；(2) eNOS解偶聯(lián)可導(dǎo)致NO合成降低,血管舒張能力下降,同時可引起ROS合成增加,介導(dǎo)血管組織的超氧化損傷；(3) 模擬潛艇逃生大鼠可出現(xiàn)氣泡介導(dǎo)的血小板活化,導(dǎo)致血小板活化率增高,出現(xiàn)血小板肺內(nèi)聚集：(4) 益肺活血顆�？梢种蒲“寤罨^程,并呈濃度依賴性,考慮與其活血作用有關(guān);(5) 益肺活血顆粒雖能減低不安全減壓后血小板的活化程度,但不能降低減壓病的患病率及死亡率�？紤]減壓病為全身多組織、多系統(tǒng)損傷,包括氮麻醉、氣壓傷等,益肺活血顆粒的保護作用在減壓病中較局限,尚不能夠影響總體發(fā)病率及死亡率。
【關(guān)鍵詞】：減壓病 血小板 內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 益肺活血顆粒
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R847
【目錄】：

• 摘要3-7
• ABSTRACT7-15
• 第一章 研究背景及意義15-24
• 1.1 潛艇逃生過程對機體的影響16
• 1.2 減壓病的損傷機制16-19
• 1.2.1 eNOS解偶聯(lián)發(fā)生于減壓病中可能性論證17-18
• 1.2.2 血小板活化在減壓病損傷中的作用機制18-19
• 1.3 中藥益肺活血顆粒19-21
• 1.3.1 益肺活血顆粒組方19
• 1.3.2 益肺活血顆粒主要作用及研究19-21
• 1.4 立題意義21-22
• 參考文獻22-24
• 第二章 實驗技術(shù)路線24-38
• 2.1 引言24
• 2.2 實驗技術(shù)路線24-27
• 2.2.1 實驗技術(shù)路線圖24
• 2.2.2 實驗創(chuàng)新及突破點24-25
• 2.2.3 eNOS解偶聯(lián)檢測指標選擇25-26
• 2.2.4 血小板活化檢測指標選擇26-27
• 2.3 實驗材料、溶液與設(shè)備27-28
• 2.3.1 益肺活血復(fù)方濃縮的制取27-28
• 2.4 實驗動物及分組28
• 2.5 實驗方法28-37
• 2.5.1 實驗動物造模方法28-29
• 2.5.2 實驗動物藥物灌服方式29
• 2.5.3 實驗動物樣本采取29-30
• 2.5.4 離體血管舒張力測定方法30
• 2.5.5 肺動脈eNOS含量測定及其解偶聯(lián)情況檢測方法30-35
• 2.5.6 肺動脈組織中蛋白硝基化檢測方法35
• 2.5.7 肺動脈組織中ROS水平檢測方法35
• 2.5.8 血小板活化率檢測方法35-36
• 2.5.9 肺組織中血小板聚集檢測方法36
• 2.5.10 血清中6-keto-PGF(1α)及TXB_2含量檢測方法36
• 2.5.11 肺動脈組織中vWF檢測方法36-37
• 2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理方法37
• 參考文獻37-38
• 第三章 實驗結(jié)果38-48
• 3.1 模擬潛艇逃生大鼠eNOS解偶聯(lián)情況38-40
• 3.1.1 模擬潛艇逃生大鼠離體血管內(nèi)皮依賴的血管舒張功能檢測38-39
• 3.1.2 3-硝基酪氨酸在肺動脈組織中的表達39
• 3.1.3 eNOS表達及解離檢測39-40
• 3.1.4 肺動脈ROS檢測結(jié)果40
• 3.2 模擬潛艇逃生大鼠血小板活化及益肺活血顆粒對其干預(yù)40-48
• 3.2.1 模擬潛艇逃生大鼠減壓病的患病率、死亡率及益肺活血顆粒干預(yù)結(jié)果41-42
• 3.2.2 模擬潛艇逃生大鼠氣泡介導(dǎo)的血小板活化及益肺活血復(fù)方制劑干預(yù)結(jié)果42-43
• 3.2.3 模擬潛艇逃生大鼠氣泡引起血小板肺內(nèi)聚集及益肺活血顆粒的抑制作用43-45
• 3.2.4 模擬潛艇逃生大鼠肺動脈組織中vWF表達情況45-47
• 3.2.5 模擬潛艇逃生大鼠血清中6-Keto-PGF1α-(PGI2的穩(wěn)定代謝物)、TXB2(TXA2的穩(wěn)定代謝物)及益肺活血顆粒的干預(yù)作用47-48
• 第四章 結(jié)論與展望48-57
• 4.1 主要結(jié)論及意義48-54
• 4.1.1 模擬潛艇逃生大鼠eNOS解偶聯(lián)與肺動脈內(nèi)皮功能損傷48-50
• 4.1.2 模擬潛艇逃生大鼠血小板活化情況50-51
• 4.1.3 益肺活血顆粒對模擬潛艇逃生大鼠的干預(yù)作用51-53
• 4.1.4 結(jié)論意義53-54
• 4.2 展望54
• 參考文獻54-57
• 附件一：綜述57-64
• References62-64
• 附件二：中英文對照表64-65
• 成果65-66
• 致謝66-69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 翟華強;袁園;歐敏;鄭虎占;;益肺活血顆粒對肺血管損傷家兔病理形態(tài)的影響[J];中國病理生理雜志;2010年03期

  本文關(guān)鍵詞：eNOS解偶聯(lián)與模擬潛艇逃生大鼠肺動脈內(nèi)皮損傷的關(guān)系及血小板活化的干預(yù)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：341411