本文關(guān)鍵詞：無(wú)創(chuàng)肢體缺血預(yù)處理延遲相中心肌差異表達(dá)蛋白質(zhì)的分離和鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：【目的】采用同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,i TRAQ)技術(shù)來(lái)研究無(wú)創(chuàng)肢體缺血預(yù)處理(Noninvasive Limb Ischemic Preconditioning,NLIP)延遲相階段心肌全部蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化,觀察NLIP延遲相對(duì)正常大鼠心肌蛋白質(zhì)表達(dá)的影響,探索NLIP內(nèi)源性效應(yīng)的分子機(jī)制�！痉椒ā繉�12只雄性SD大鼠隨機(jī)分入預(yù)處理組(NLIP組)和對(duì)照組(C組),每組6只。NLIP組用橡皮筋環(huán)扎大鼠右后肢根部,阻斷血流5min,開(kāi)放再灌注5min,共循環(huán)3次,建立NLIP模型;C組大鼠麻醉后不作預(yù)處理。于NLIP延遲相即24小時(shí)后,分別取兩組大鼠左心室心尖部組織50-100mg,液氮保存。每組6個(gè)樣本取等質(zhì)量混合為一個(gè)起始材料進(jìn)行蛋白抽提。采用i TRAQ技術(shù)經(jīng)蛋白酶解、肽段標(biāo)記、高PH反向分離、反向液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析等步驟檢測(cè)NLIP組和C組蛋白表達(dá)譜的差異。質(zhì)譜分析數(shù)據(jù)用Mascot搜索引擎在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行肽段和蛋白質(zhì)的鑒定。用Protein Pilot軟件對(duì)報(bào)告離子峰強(qiáng)度值進(jìn)行計(jì)算得出蛋白質(zhì)的定量信息。以組間表達(dá)差異Ratio1.2或Ratio1/1.2(0.833)且統(tǒng)計(jì)學(xué)P-Value0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選差異表達(dá)蛋白。利用基因本體論(Gene Ontology,GO)數(shù)據(jù)庫(kù)分析差異表達(dá)蛋白的生物學(xué)功能,用Wolfpsort軟件預(yù)測(cè)差異表達(dá)蛋白的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位。最后用Western blot驗(yàn)證部分差異表達(dá)蛋白在兩組樣本中的表達(dá)水平�！窘Y(jié)果】經(jīng)i TRAQ檢測(cè)和數(shù)據(jù)庫(kù)搜索,共鑒定得到3280個(gè)蛋白質(zhì),其中55個(gè)蛋白質(zhì)被認(rèn)定為顯著差異表達(dá)蛋白。NLIP組與C組相比,表達(dá)上調(diào)的蛋白有35個(gè),表達(dá)下調(diào)的蛋白有20個(gè)。通過(guò)對(duì)差異表達(dá)蛋白的GO注釋及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位分析發(fā)現(xiàn),這些蛋白主要存在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核及線粒體中,廣泛參與代謝、生物調(diào)節(jié)、應(yīng)激反應(yīng)及信號(hào)傳導(dǎo)等過(guò)程,具有分子結(jié)合、催化、抗氧化及調(diào)節(jié)酶活性等功能。對(duì)差異表達(dá)蛋白ACOX1、PDK4和PRDX2的Western blot檢測(cè)證實(shí)其蛋白表達(dá)趨勢(shì)與i TRAQ相對(duì)定量結(jié)果基本一致,均在NLIP組中表達(dá)上調(diào)。【結(jié)論】NLIP延遲相中大鼠心肌蛋白質(zhì)表達(dá)譜發(fā)生了改變,對(duì)差異表達(dá)蛋白質(zhì)的功能分析提示NLIP的延遲相效應(yīng)可能與這些蛋白質(zhì)改善能量代謝、調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激水平、參與基因表達(dá)調(diào)控及蛋白質(zhì)折疊與降解等過(guò)程有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：肢體缺血預(yù)處理 i TRAQ 蛋白質(zhì)組學(xué) GO分析
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R654.2
【目錄】：

• 英文縮略語(yǔ)4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-23
• 結(jié)果23-32
• 討論32-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-54
• 綜述54-79
• 參考文獻(xiàn)66-79
• 致謝79

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：無(wú)創(chuàng)肢體缺血預(yù)處理延遲相中心肌差異表達(dá)蛋白質(zhì)的分離和鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：335340