本文關(guān)鍵詞：丁苯酞對苯妥英鈉引起的SD大鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:丁苯酞(dl-3-n-butylphthalide,NBP)是人工合成的消旋體,臨床常用于缺血性腦血管病的治療,對腦神經(jīng)組織細(xì)胞具有保護(hù)作用。在臨床上,苯妥英鈉(Phenytoin sodium,PHT)常用于癲癇、心律失常、三叉神經(jīng)痛等疾病,其中以抗癲癇應(yīng)用最為常見;但其治療譜狹窄,易出現(xiàn)神經(jīng)毒性,不良反應(yīng)較多,如眩暈、共濟(jì)失調(diào)、言語不清等。而本實(shí)驗(yàn)主要研究丁苯酞對苯妥英鈉作用后的大鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞Bax和Bcl-2的表達(dá),探討苯妥英鈉的毒副作用及丁苯酞的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。方法:1分組及給藥:健康的清潔級8周齡雄性SD大鼠36只,重量為(170±20g),隨機(jī)分為NS(生理鹽水+花生油)組、NBP(丁苯酞+生理鹽水)組、PHT高劑量組、PHT低劑量組、PHT高劑量+NBP混合組和PHT低劑量+NBP混合組,每組各6只。采用自己制作的灌胃針在9:00—11:00Am進(jìn)行灌胃。PHT組、NBP+PHT組中的PHT按高、低劑量分別給200mg/kg/d、100mg/kg/d,同時(shí)其它組給予等量生理鹽水;NBP(用食用花生油溶解)80mg/kg,同時(shí)其它組給予等量的花生油灌胃,每天1次,共30天。2取材及檢測:用10%水合氯醛(0.36ml/100g)麻醉各組大鼠,使其仰臥,并固定,剖開胸腔,暴露大鼠心臟,從心尖處插入灌注針,同時(shí)從右心耳處剪開心臟放血。先快速以0.9%生理鹽水(100ml~150ml)沖洗,再用4%多聚甲醛磷酸緩沖液(200ml~300ml)固定。注射完畢后立即斷頭,迅速取出其大腦和小腦,放入4%的多聚甲醛固定,常規(guī)乙醇梯度脫水,二甲苯透明,浸臘,包埋,選取大腦和小腦連續(xù)冠狀切片,片厚5μm。通過HE及尼氏染色觀察各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡和變性的情況,通過免疫組化檢測各組神經(jīng)細(xì)胞Bax、Bcl-2蛋白陽性表達(dá)情況并以平均光密度值(AOD)表示各組結(jié)果。3統(tǒng)計(jì)分析:使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,多組間均數(shù)采用One-Way ANOVA檢驗(yàn)比較,各組均數(shù)間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn),當(dāng)Ρ0.05時(shí),認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1 HE染色結(jié)果NS組及NBP組大鼠海馬和小腦神經(jīng)元排列整齊緊密,細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰,胞漿紅染胞核藍(lán)染,胞核圓形或橢圓形,核仁清晰,形態(tài)正常,偶見幾個(gè)凋亡細(xì)胞,其細(xì)胞輪廓模糊,細(xì)胞體積縮小,細(xì)胞核固縮深染,胞質(zhì)嗜酸性染色增強(qiáng),周圍空泡形成。PHT低劑量組海馬及小腦神經(jīng)元排列比較稀疏,輪廓模糊,細(xì)胞核固縮深染,且周圍空泡形成,凋亡細(xì)胞較多。NBP+PHT低劑量組海馬及小腦神經(jīng)元排列尚整齊,結(jié)構(gòu)尚完整,較PHT低劑量組細(xì)胞凋亡程度輕。PHT高劑量組海馬及小腦有大量凋亡細(xì)胞,其神經(jīng)元細(xì)胞排列散亂,稀疏,細(xì)胞體積縮小,核不規(guī)則,大量細(xì)胞核固縮深染,胞漿嗜伊紅。NBP+PHT高劑量組較PHT高劑量組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡程度輕。2尼氏染色結(jié)果NS組及NBP組大鼠海馬和小腦神經(jīng)元排列規(guī)則緊密,且形態(tài)完整、核仁清晰,胞漿內(nèi)尼氏體豐富,沒有明顯神經(jīng)元丟失。與NS組和NBP組相比,PHT低劑量組和PHT高劑量組大鼠海馬和小腦神經(jīng)元丟失較明顯,細(xì)胞分布不均,可見細(xì)胞皺縮,染色質(zhì)凝集成塊、核固縮、尼氏小體數(shù)量減少,其中PHT高劑量組神經(jīng)元丟失更為明顯。NBP+PHT低劑量組與NS組和NBP組相比,海馬及小腦神經(jīng)元沒有明顯丟失。NBP+PHT高劑量組海馬及小腦神經(jīng)元丟失較PHT高劑量組明顯減少。3免疫組化染色結(jié)果3.1 Bax蛋白表達(dá)結(jié)果Bax蛋白的陽性表達(dá)為棕黃色或棕色顆粒,主要分布在細(xì)胞胞膜和胞漿內(nèi),細(xì)胞核不著色。NS組和NBP組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞偶可見陽性細(xì)胞表達(dá);NBP+PHT低劑量組(NP1組)海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞可見少量陽性細(xì)胞表達(dá),NBP+PHT高劑量組(NP2組)海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增多;PHT高劑量組(NP2組)和PHT低劑量組(NP1組)海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞可見大量的陽性細(xì)胞表達(dá),且分布密集,胞漿呈棕黃色,染色深,其中PHT高劑量組(P2組)尤為顯著。NBP組、NS組與NP1組中任意兩組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。P1組、P2組、NP2組任意兩組比較,其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05):P1組Bax蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)低于P2組(P0.05),NP2組陽性細(xì)胞表達(dá)低于P1組(P0.05),NP2組陽性細(xì)胞表達(dá)低于P2組(P0.05)。P1組與NP1組比較,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,NP1組陽性細(xì)胞表達(dá)低于P1組(P0.05)。NP1組與NP2組比較,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,NP1組陽性細(xì)胞表達(dá)低于NP2組(P0.05)。3.2各組實(shí)驗(yàn)大鼠Bcl-2蛋白表達(dá)Bcl-2蛋白的陽性表達(dá)為棕色顆粒,呈重染,主要分布在細(xì)胞胞漿核膜,細(xì)胞核不著色。NS組與NBP組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞的陽性細(xì)胞表達(dá)明顯;PHT低劑量組及PHT高劑量組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞均少量表達(dá),其中高劑量組陽性細(xì)胞表達(dá)減少更明顯;NBP+PHT低劑量組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞陽性細(xì)胞表達(dá)明顯;NBP+PHT高劑量組海馬及小腦神經(jīng)細(xì)胞陽性細(xì)胞表達(dá)增多。NBP組、NS組與NP1組中任意兩組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);P1組、P2組、NP2組任意兩組比較,其差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05):P1組Bcl-2蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)高于P2組(P0.05),NP2組陽性細(xì)胞表達(dá)高于P1組(P0.05),NP2組陽性細(xì)胞表達(dá)高于P2組(P0.05)。P1組與NP1組比較,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且NP1組陽性細(xì)胞表達(dá)高于P1組(P0.05)。NP1組與NP2組比較,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,NP1組陽性細(xì)胞表達(dá)高于NP2組(P0.05)。結(jié)論:1不同治療劑量PHT均可導(dǎo)致正常大鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡,其抑制凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)減少,促凋亡蛋白Bax表達(dá)增多;其高劑量組影響更明顯,呈劑量相關(guān)性。2 NBP+PHT高、低劑量組分別與PHT高、低劑量組相比海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2表達(dá)均增多,Bax表達(dá)均減少,細(xì)胞凋亡受到抑制。NBP可能通過提高Bcl-2的表達(dá)水平,降低Bax的表達(dá)水平,抑制細(xì)胞凋亡,起到神經(jīng)保護(hù)作用。3與NBP組比較,NP1組海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2與Bax表達(dá)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;NP2組海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2表達(dá)減少,Bax表達(dá)增多,說明NBP可抑制低劑量PHT引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,不能完全抑制高劑量PHT引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：苯妥英鈉 丁苯酞 海馬 小腦 神經(jīng)元凋亡 Bcl-2 Bax
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-25
• 附圖25-51
• 附表51-52
• 討論52-56
• 結(jié)論56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 綜述 丁苯酞的主要藥理作用及其臨床應(yīng)用60-71
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 致謝71-72
• 個(gè)人簡歷72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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  本文關(guān)鍵詞：丁苯酞對苯妥英鈉引起的SD大鼠海馬、小腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：325286